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实验目的和原理
弥散性血管内凝血（disseminated intravascular coagulation，DIC）是指在某些致病因子的作用下，大量促凝物质入血，凝血因子和血小板被激活，使凝血酶增多，微循环中形成广泛的微血栓，继而因凝血因子和血小板大量消耗而继发纤溶亢进，引起全身出血及微循环衰竭的临床综合征。主要临床表现为出血、休克、器官功能障碍和微血管病性溶血性贫血等，是一种危重的综合征。严重感染和内毒素血症、持续广泛的组织缺血、缺氧及严重酸中毒等都可导致血管内皮细胞广泛损伤；一些癌细胞可表达组织因子，感染性疾病可导致内皮细胞组织因子表达增加，脑、肺、胎盘等组织凝血因子含量很丰富，其损伤也会引起大量组织因子释放，从而诱发急性DIC。
本实验通过注射兔脑粉生理盐水浸液来复制急性DIC动物模型，旨在让学生探讨DIC的发病原因和机制，并掌握诊断急性DIC的常规方法。
实验对象
家兔。
实验器材与试剂
兔手术台，气管插管，动脉插管，静脉插管，输液装置，恒温水浴箱，分光光度计，血细胞计数板，血红蛋白吸管，表面皿，离心机，试管，吸管，注射器，缝合线，1%普鲁卡因，4%兔脑粉生理盐水浸液，1%鱼精蛋白注射液，P试液，0.025mol/L氯化钙溶液，饱和氯化钠溶液，3.8%枸橼酸钠溶液，血小板稀释液，生理盐水等。
实验步骤与观察
1.称取家兔一只并以仰卧位固定于兔手术台上，家兔颈部去毛，用1%普鲁卡因在颈部正中行局部浸润麻醉。
2.在家兔颈部正中做一5～8cm长的切口，用血管钳钝性纵向分离皮下组织，充分暴露出气管，并在其下穿线备用。在甲状软骨下第三或第四软骨环处倒“T”形切开气管，迅速向胸腔方向插入气管插管并用线结扎固定。分离右侧颈外静脉，在其下穿两根线备用。分离左侧颈总动脉并在其下穿两根线备用。
3.将颈外静脉近心端夹闭，远心端结扎，在靠近远心端结扎线侧壁剪一“V”字形小口（大小为血管管径的1/3～1/2），朝向心端插入静脉插管并牢固结扎，插管另一端与输液装置相连，滴注生理盐水（每分钟10滴）以保持静脉通畅。
4.将左侧颈总动脉远心端结扎，近心端以动脉夹夹闭以备采血。
5.定量吸取4%兔脑粉生理盐水浸液（2mL/kg），并用生理盐水稀释至30mL，将此液体由颈外静脉在15min内滴注完毕（滴注速度：第1个5min以1mL/min滴注，第2个5min以2mL/min滴注，第3个5min以3mL/min滴注）。
6.分别在四个时间点从颈总动脉采血3mL处理备用，并从中取血1～2滴以便行血小板计数（滴注4%兔脑粉生理盐水浸液前5min，滴注完毕后15min、45min和75min）。检测指标有血浆鱼精蛋白副凝试验（3P试验）、血浆凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、血浆纤维蛋白原定量（fibrinogen，Fbg）及血小板计数（platelet count，PLT）。各指标的检测方法见附注。
7.实验结束后将家兔处死，观察家兔内脏器官如心、肺、肝、肾等的变化及血液是否凝固。
注意事项
1.实验成败的关键因素是兔脑粉生理盐水浸液的制备及注射的速度。滴注兔脑粉生理盐水浸液应先慢后快，滴注速度过快易导致动物死亡。
2.实验中吸管及试管应避免交叉污染。
3.测定血液指标前，应先将血浆在恒温水浴箱（水温应维持在37±0.5℃）中温浴约1min。
思考题
1.兔脑粉生理盐水浸液导致急性DIC的机制是什么？
2.发生急性DIC时家兔的血液学指标有何变化？
附注：
1.制备兔脑粉生理盐水浸液 称取400mg兔脑粉，与10mL生理盐水充分搅匀后，置于水浴箱中37℃水浴60min，每15min充分搅拌1次。1000r/min离心5min，取上清液过滤后备用。
2.制备血浆 经颈总动脉取血3mL（废弃最先流出的数滴血液），将血液与抗凝剂（3.8%枸橼酸钠溶液）以9∶1体积混匀，3000r/min离心15min，获得血浆（含微量血小板）备用。
3.PLT 吸取0.38mL血小板稀释液于一试管中，用血红蛋白吸管吸取20μL血液并立即加入血小板稀释液中，充分摇匀后将此混合液用滴管吸取一小滴滴入计数板，静置15min。用高倍镜计数，计数5个中方格内的血小板数，以10 9 /L表示，如兔的正常范围为（300～600）×10 9 /L。
4.P试液 称取200mg兔脑粉，与5mL生理盐水充分搅匀后，置于水浴箱中37℃水浴60min，每15min充分搅拌一次。1000r/min离心5min，取上清液，加入等量0.025mol/L氯化钙溶液并混匀，用作PT试验。
5.PT试验
（1）将0.1mL被测血浆置于试管内并放入37℃水浴箱中。
（2）加入0.2mL P试液，开始计时，10s后从水浴箱中取出试管，轻轻侧动至液体呈停止流动胶冻态或出现白色颗粒时，即为凝固终点。
（3）重复操作2～3次，取平均值（兔的正常范围：6～8s）。
6.Fbg
（1）将0.5mL被测血浆置于试管内（12mm×100mm），加入4.5mL饱和氯化钠溶液并充分混匀后，放入水浴箱中37℃水浴3min，取出后再次混匀，于分光光度计中进行比色，测定光密度。
（2）对照组则以生理盐水取代饱和氯化钠溶液，操作同上。
（3）以对照组调零，在520nm波长下测定光密度，纤维蛋白原含量为测定管光密度×100/0.5=______g/L。
7.3P试验 将0.9mL被测血浆置于试管内，与0.1mL 1%鱼精蛋白注射液混匀，室温下放置30min。观察终点前轻轻晃动试管，有白色纤维或凝块为阳性，无白色纤维且均匀混浊为阴性。