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特殊染色技术主要是利用组织和细胞对染料亲和力等物理特性的差异，对相应的成分进行染色，以便了解与明确组织或细胞中正常结构或病理过程中出现异常物质、病变或病原体等的病理学技术。首先，鉴别各种组织成分。如胶原纤维与肌纤维、癌与肉瘤、血管内皮瘤与血管外皮瘤、神经节细胞神经纤维瘤与神经鞘瘤等的鉴别。其次，鉴别各种异常物质或正常物质。如糖原、黏液物质、淀粉样物质、脂类物质等正常或异常物质的鉴别。再者，识别与诊断某些病原体或微生物。如采用抗酸染色、PAS、GMS等识别结核分枝杆菌、真菌。在2020年WHO全球癌症报告中，肺癌的发病率和死亡率分别排名第二和第一，因此，明确诊断肺癌病理类型对帮助临床分期至关重要，其中特殊染色技术具有一定的作用。
弹力纤维（elastic fiber）广泛分布于全身各处，特别以肺泡壁、动脉壁和皮肤处最为丰富。新鲜时呈黄色，折光性强；有时呈单条出现，如见于真皮；有时呈膜样结构，如见于大动脉壁。在疏松结缔组织内，弹力纤维比胶原纤维细，直径为0.2~1 μm，纤维分支，交织成网。在光镜下，弹力纤维由两种成分组成，即集合成束的弹力微原纤维（由糖蛋白形成）和均质状的弹力蛋白。弹力微原纤维浸没于弹力蛋白中构成弹力纤维。电镜下弹力微原纤维直径为10~12 nm，没有周期性横纹。
弹力纤维具有一定的弹性，在外力牵拉下卷曲的弹性蛋白分子伸展拉长，去除外力后迅速复原。动脉壁和肺泡壁的弹力纤维对保持动脉和肺的弹力起着重要作用。对沸水、弱酸和碱性物质有一定的抵抗力，但可被胃液、胰液等消化。
在HE染色标本中，弹力纤维和胶原纤维相似，均被染成红色，量少时二者较难区别。若用特殊染色法就能够使弹力纤维清晰地显示出来。最近的研究认为，弹力纤维仅是属于弹力纤维系统的一种纤维。事实上，弹力纤维系统由弹力纤维、前弹力纤维和耐酸纤维三种纤维构成。这三种纤维的分布、走行和组织化学均不相同。耐酸纤维用一般的弹力纤维染色法染色后着色很淡，前弹力纤维着色也不够深，但经强氧化处理后用醛品红或间苯二酚品红则可使弹力纤维系统中的三种纤维很好地显示出来。常见的弹力纤维染色法有间苯二酚品红法、醛品红法和地衣红法。
弹力纤维染色在肺癌中可用于识别或判断脏层胸膜的侵犯情况、血管是否被侵犯等。目前认为脏层胸膜主要由四层结构组成：间皮细胞层、间皮下结缔组织层、弹力纤维层、结缔组织层（分隔弹力纤维和肺实质）。根据第七版国际肺癌TNM分期标准，将肺癌侵犯脏层胸膜分为T2期，对于肿瘤直径＜3 cm、无淋巴结转移及远处转移的病例，肿瘤是否侵犯胸膜成为判断非小细胞肺癌患者是否需要进行后续化疗的重要指标。目前在病理学中根据Hammer分级将肿瘤突破脏层胸膜弹力层定义为侵犯胸膜。2004年，Shimizu等报道了将1 653例肺癌T1、T2、T3期患者术后按日本肺癌学会（JLCS）标准细分为三类：PL0为肿瘤侵犯未超过弹力纤维层；PL1为肿瘤侵犯超过弹力纤维层但未累及脏层胸膜；PL2为肿瘤侵犯到达脏层胸膜表面。同时其研究结果发现PL1、PL2患者的5年生存率明显低于PL0患者。因此，通过弹力纤维染色判断肿瘤侵犯胸膜的层次至关重要，因为侵犯胸膜是肺癌的独立预后因素，并且有相关胸膜侵犯可以作为T2期肺癌患者需要术后辅助化疗的指标之一。
此外，肺癌侵犯血管也是一种预后不良的表现。弹力纤维主要由平滑肌细胞、成纤维细胞、软骨细胞、内皮细胞、肺泡细胞、肌纤维细胞等组成，分布于皮肤、肺、动静脉、结缔组织及韧带、弹性软骨等结构中，尤以肺和大动脉最为常见。在血管壁中弹力纤维主要位于血管中层和内膜，因此根据弹力纤维染色可以更有效地判断肿瘤是否侵犯血管壁。
间苯二酚品红液实际上是由碱性品红的间苯二酚色淀形成的一种复合物，这种复合物与弹力纤维结合使弹力纤维被染成蓝黑色。其结合的原理尚不清楚，可能是因弹力纤维中的某些成分与间苯二酚的酚基团形成氢键而结合。
（1）30%三氯化铁液：三氯化铁30 g，蒸馏水100 mL。
（2）Van Gieson氏染液包含A液（1%酸性品红水溶液）、B液（约1.2%苦味酸饱和水溶液）。A、B两液分瓶盛放。临用前以1∶9比例混合均匀后使用。
（3）间苯二酚品红液：碱性品红1 g，间苯二酚2 g，蒸馏水100 mL，30%三氯化铁液12.5 mL，95%乙醇100 mL，浓盐酸2 mL。准备一个容量为300 mL的烧杯，放入碱性品红、间苯二酚和蒸馏水，用玻璃棒搅拌，加热煮沸后，再慢慢加入30%三氯化铁液，在不断搅拌下煮沸3~5 min，冷却后过滤，去掉滤液，将滤纸和沉淀物一同放回烧杯内，置入干燥箱内烘干，取出后加入95%乙醇100 mL，在水浴锅内加热并不断搅拌至沉淀物完全溶解后取出滤纸，冷却后过滤，并补足因蒸发失去的乙醇至100 mL，最后加入浓盐酸2 mL，混合均匀后即可使用。
10%中性福尔马林固定的正常肺组织。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4μm，65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至95%乙醇。
（3）浸入间苯二酚品红液1~2 h。
（4）取出组织切片直接用95%乙醇洗去多余染液并分化至无余色时脱下，此时在显微镜下观察，如染色弥漫不清晰，可用1%盐酸乙醇稍分化。
（5）用自来水冲洗，用Van Gieson氏液复染约30 s。
（6）用95%乙醇分化，用无水乙醇脱水，用二甲苯透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
弹力纤维呈深蓝黑色，胶原纤维呈红色，肌纤维和红细胞呈黄色。
（1）间苯二酚品红液应用小口砂塞瓶盛装，于4 ℃下保存，临用前取出恢复常温后使用。此液在4 ℃下可保存3~6个月，如存放过久，需要延长染色时间，但由于选染能力下降，其他成分容易共染。染色时需加盖密封。
（2）如将此配方中的碱性品红替换为结晶紫1 g，并加入糊精（dextrin）1 g，弹力纤维可被染成绿色。
（3）切片脱蜡至水洗后，经酸化的高锰酸钾液氧化5 min，稍用水清洗，用2%草酸液漂白1~2 min，用流水冲洗，然后加入间苯二酚品红液染色，能将弹力纤维系统的三种纤维都清晰染色。
（4）如需染细胞核，可以在Van Gieson氏液复染前，于Mayer氏苏木精中染5~10 min，水洗后用盐酸乙醇分化，流水冲洗后再用Van Geison氏液复染。或者仅用1%中性红或者核固红液复染细胞核5~10 min而不经Van Gieson氏液复染。
醛品红是由碱性品红加入三聚乙醛和盐酸中配制而成的。盐酸作为一种酸性催化剂，可以使三聚乙醛逐渐解聚产生乙醛。乙醛有较高的活性，释出后与碱性品红染料外露的氨基起反应产生偶氮甲碱，这时溶液颜色转变为深紫色，称为成熟的醛品红染液。这种成熟的醛品红染液对特殊的蛋白质及含有硫酸根的黏多糖具有很强的亲和力，和弹力纤维结合良好。此外，其对肥大细胞颗粒、脂褐素、乙型肝炎表面抗原、胃主细胞、胰岛β细胞和脑垂体的嗜碱性细胞也能有很好的着色效果。
（1）Lugol氏碘液：碘片（iodine）1 g，碘化钾（potassium iodide）2 g，蒸馏水100 mL。先取碘化钾溶于20 mL蒸馏水，再加入碘片，摇动至碘片溶解，再把余下的蒸馏水加入。
（2）5%硫代硫酸钠水溶液：硫代硫酸钠（sodium thiosulfate）5 g，蒸馏水100 mL。
（3）橙黄G染液：橙黄G（orange G）2 g，蒸馏水100 mL，磷钨酸（phosphotungstic acid）5 g。将三者混合后稍摇动数分钟，使其尽量溶解，静置一夜，取上清液使用。
（4）醛品红染液：碱性品红0.5 g，70%乙醇100 mL，浓盐酸1 mL，三聚乙醛1 mL。将碱性品红溶于70%乙醇，然后加入浓盐酸和三聚乙醛，轻轻摇动使混合均匀，于室温下静置1~2 d（有时需3~4 d），待变为深紫色即为成熟的醛品红染液。过滤于小口砂塞瓶中，于4 ℃下保存备用。
10%中性福尔马林固定的正常肺组织。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水清洗。
（3）用Lugol氏碘液处理5 min，稍用水清洗。
（4）用5%硫代硫酸钠处理5 min，流水冲洗5 min。
（5）用70%乙醇稍洗，放入醛品红液10 min。
（6）用70%乙醇浸洗2次，每次30 s，至切片不再脱色为止。
（7）稍用水清洗，用橙黄G液滴染1 s。
（8）稍用水清洗，常规脱水、透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
弹力纤维呈深紫色，底色为不同程度的黄色。
（1）醛品红染液可用小口砂塞瓶盛放，成熟后置于4 ℃下保存，临用前取出恢复至室温后再使用。染液要加盖密封，可保存3~6个月。如染液试剂保存时间过长，则染色时间亦要加长，但由于其选染能力下降，会出现共染现象。
（2）切片脱蜡至水洗后，不经Lugol氏碘液和5%硫代硫酸钠水溶液处理，而用酸化高锰酸钾液氧化，用草酸漂白，流水冲洗后用70%乙醇稍洗再放入醛品红液中染色，这样经强氧化处理后能使弹力纤维系统的三种纤维有区别地显示出来。
（3）醛品红染液除能使弹力纤维染上颜色外，也可使肥大细胞颗粒、乙型肝炎表面抗原染上颜色。如将染色时间延长20~30 min，可使硫酸化黏液物质和胰岛β细胞染上颜色，如延长至1 h以上，可使脑垂体的嗜碱性细胞染上颜色。
（4）橙黄G液要淡染，若过染则会掩盖弹力纤维的深紫色而使区别不够明显。
使用地衣红给弹力纤维染色是一种古老的经典方法，其染色原理尚不清楚，可能是地衣红对弹力纤维有很强的选择性亲和力。
地衣红乙醇液：地衣红（orcein）1 g，70%乙醇100 mL，浓盐酸1 mL。将地衣红溶于70%乙醇，然后加入浓盐酸，放置1~2 d后即可使用。
10%中性福尔马林固定的正常肺组织。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至70%乙醇清洗。
（3）加入地衣红乙醇液染色3 h。
（4）用70%乙醇浸洗2次，每次30 s，至染液不再脱出为止。
（5）用95%乙醇、无水乙醇脱水，用二甲苯透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
弹力纤维呈深棕红色。
（1）地衣红原本是一种天然染料，现已能人工合成，但各厂家制品不同，染色深浅不一，需要进行预试验掌握染色时间。
（2）地衣红乙醇液可用小口砂塞瓶盛装，成熟后于4 ℃下保存，临用前取出恢复至室温后使用，用后加盖密封，此染液可保存3~6个月。
（3）地衣红染色也可用Van Gieson氏染液或橙黄G液复染。
弹力纤维染色在病理切片上用以观察组织内弹力纤维是否增生或被破坏、断裂和崩解，从而帮助诊断。
（1）弹力纤维增生症常见于原发性或继发性高血压的小动脉、皮肤的弹力纤维瘤、老年弹力纤维增生症、心内膜弹力纤维增生症和乳腺癌的弹力纤维增生等。
（2）弹力纤维断裂和崩解常见于老年性肺气肿、主动脉粥样硬化、梅毒性主动脉炎和皮肤的环状肉芽肿等。
（3）针对肺的干酪样坏死病灶，弹力纤维染色如能显示出原有的肺泡结构，则干酪样坏死病灶是继发于渗出性结核病灶的；如不显示原有的肺泡结构，则是继发于增生性结核病灶的。
动物和人体的各种细胞、腺体、组织和器官都能产生或分泌黏液物质，根据黏液物质中含酸基的不同分为中性黏液物质、酸性黏液物质和混合性黏液物质，也可称为中性黏多糖、酸性黏多糖和混合性黏多糖。
中性黏多糖内含有氨基乙糖基，但不含有任何酸根，多见于胃黏膜的表面上皮、十二指肠腺、颌下腺、前列腺上皮和结肠的杯状细胞等。酸性黏多糖中含有氨基己糖基，并含有各种酸根和部分不含酸根的成分。酸性黏多糖可以分为硫酸化和非硫酸化两类：强硫酸化黏多糖主要见于皮肤、动脉和肺、软骨、角膜及肥大细胞；弱硫酸化黏多糖多见于颌下腺、结肠、气管和支气管的杯状细胞。混合性黏多糖是在部分组织中介于中性与酸性之间的另一种不同的混合性物质。
在肺癌中主要是对黏液成分进行染色。根据2021年发布的《世界卫生组织（WHO）肺部肿瘤组织学分类（第5版）》，黏液成分包括黏液性、非黏液性及混合性。此外，肺部肿瘤也可发生黏液表皮样癌，对黏液表皮样癌的诊断中，主要包括黏液分泌细胞、鳞状细胞及中间型细胞；根据黏液分泌细胞的多少，分为高分化、中分化及低分化。综上所述，通过黏液染色在一定程度上可以协助病理医师对肺癌进行分类并诊断黏液表皮样癌。
过碘酸是一种氧化剂，可以把多糖中葡萄糖分子的两个相邻的带有羟基的—C—C—键打开，生成醛基后再与染色剂结合。Schiff液中的碱性品红是一种混合物，经亚硫酸和二氧化硫的作用，其醌式结构的双键因被破坏而消失，成为无色品红，无色品红液与经氧化后的醛基结合，被染成紫红色。
（1）5%高碘酸氧化液：高碘酸0.5 g，蒸馏水100 mL，完全溶解后4 ℃下保存备用。
（2）Schiff液：碱性品红1 g，1 mol/L盐酸20 mL，重亚硫酸钠2 g，重蒸馏水200 mL。先将200 mL重蒸馏水煮沸，稍有火焰即加入1 g碱性品红，再煮沸1 min。冷却至50 ℃后加入20 mL的1 mol/L盐酸，待35 ℃时加入2 g重亚硫酸钠。置于室温2 h之后见稍有红色，5 h后变成无色液体，盛于棕色瓶内4 ℃下保存备用。
95%乙醇固定的肝组织。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水清洗。
（3）将于4 ℃下保存的5%高碘酸氧化液自然恢复至室温。
（4）滴加5%高碘酸氧化液，于室温下孵育10~20 min，用蒸馏水洗2次。
（5）吸干组织切片中的组织水分，将组织切片浸入装有Schiff液的Coplin染色缸，于暗处反应10 min。
（6）流水冲洗5 min。
（7）用Mayer氏苏木精复染细胞核1~2 min。
（8）用0.5%盐酸乙醇液分化，用自来水冲洗，至细胞核变蓝为止。
（9）用无水乙醇脱水，用二甲苯透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
阳性对照组织肝细胞内糖原PAS反应呈阳性，胞浆呈颗粒状红色，细胞核呈蓝色。
（1）配制Schiff液的重亚硫酸钠必须质量优良，不能使用陈旧无硫的刺激性试剂。
（2）染色用的Schiff液必须恢复室温，当室温＜15 ℃时可用37 ℃水浴或延长反应时间以加强染色。
（1）先天遗传缺陷引起的糖原贮积病和糖尿病器官、组织、细胞中的糖原颗粒沉着。
（2）肿瘤组织如肝细胞癌，横纹肌、平滑肌和软骨肉瘤，汗腺瘤和化学感受器瘤等，均有糖原存在。
（3）区分骨的尤因肉瘤和骨的淋巴瘤。骨的尤因肉瘤细胞质内有糖原颗粒，PAS反应呈阳性；骨的恶性淋巴瘤细胞中不含糖原，PAS反应呈阴性。
Southgate胭脂红用铝做媒染剂，胭脂红与铝形成复合物，再与黏液内的酸性基团结合形成玫瑰红色。
（1）Weigert氏铁苏木精液包含A液［苏木精1 g，无水乙醇（absolute alcohol）100 mL］、B液（30%三氯化铁液4 mL，蒸馏水95 mL，纯盐酸1 mL）。A、B两液分瓶存放，A液配制后数天即可使用，不宜配制过多，保存时间过长则染色不良，需密封保存。B液配置后立即可用。临用前将A、B两液等量混合均匀。
（2）Southgate氏贮备液：胭脂红1 g，无水乙醇50 mL，蒸馏水50 mL，氢氧化铝1 g，无水氯化铝0.5 g。准备一个三角烧瓶，将无水乙醇和蒸馏水混合均匀，依次加入胭脂红、氢氧化铝和无水氯化铝，用玻璃棒搅拌混合均匀，于水浴中煮沸3 min，并不断搅动。自然冷却至室温后过滤，并用50%乙醇加至100 mL。用小口砂塞瓶盛装，于4 ℃下保存。
（3）Southgate氏稀释液：贮备液与蒸馏水以1∶4比例稀释，临用前配制。
（4）马休黄液：马休黄（Martius yellow）0.5 g，95%乙醇100 mL，磷钨酸2 g。先把马休黄溶于95%乙醇，再加入磷钨酸，完全溶解后可用。
10%中性福尔马林固定的结肠黏膜。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水清洗。
（3）用Weigert氏铁苏木精液于室温下孵育5~10 min，用流水稍冲洗。
（4）用1%盐酸乙醇液分化，流水冲洗10 min。
（5）用Southgate氏稀释液孵育30 min，用流水稍冲洗。
（6）用马休黄液复染15~60 s，用流水稍冲洗。
（7）常规脱水、透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
酸性黏液物质呈红色或深玫瑰红色，细胞核呈蓝褐色，其他组织成分呈黄色。
（1）避免使用Ehrlich氏苏木精，因为该染液能把黏液物质淡染，妨碍胭脂红着色。
（2）Southgate氏贮备液较稳定，于4 ℃下保存，可使用3~4个月。稀释液仅于当天使用。
（3）用马休黄液复染不可过度，否则易遮盖黏液的红色，也可省去不染。
（1）新型隐球菌荚膜可被Southgate氏稀释液染成红色至深红色。
（2）此染色对上皮组织黏液的诊断有较高价值，而对来源于结缔组织的黏液性病变显示不佳。
（1）爱先蓝（alcian blue）染色液：爱先蓝8GX 1 g，0.1 mol/L盐酸水溶液。
（2）0.1 mol/L盐酸水溶液：纯盐酸0.84 mL，蒸馏水加至100 mL。
（3）核固红染液：核固红0.1 g，硫酸铝5 g，蒸馏水100 mL。将硫酸铝溶于蒸馏水内，放入核固红染色剂煮沸，冷却后使用。
10%中性福尔马林固定的结肠黏膜。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水冲洗。
（3）滴加爱先蓝染色液，于室温下静置20~30 min。
（4）用0.1 mol/L盐酸水溶液稍冲洗。
（5）不经水洗，用滤纸吸干多余盐酸。
（6）常规脱水、透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
硫酸黏液物质呈蓝色，非硫酸化酸性黏液物质不着色。
用0.1 mol/L盐酸水溶液稍冲洗后，不再经水洗，否则会改变染液的pH，引起非特异性的染色出现。
（1）爱先蓝染色液：爱先蓝8GX 1 g，蒸馏水97 mL，冰醋酸3 mL，麝香草酚（thymol）50 mg。
（2）核固红染液：核固红0.1 g，硫酸铝5 g，蒸馏水100 mL。将硫酸铝溶于蒸馏水内，放入核固红染液煮沸，冷却后使用。
番红染液：番红0.1 g，蒸馏水99 mL，冰醋酸1 mL。
10%中性福尔马林固定的结肠黏膜。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水清洗。
（3）滴加爱先蓝染色液，于室温下放置20~30 min，用流水稍冲洗。
（4）用核固红染液复染5~10 min，或用番红染液复染2~3 min。
（5）稍用水冲洗。
（6）常规脱水、透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
唾液酸及弱硫酸化黏液物质以及一般黏液物质呈蓝色，各种强硫酸化黏液物质不着色或淡染，细胞核呈红色。
（1）爱先蓝染色液（pH 2.5）含有3%冰醋酸，其pH值相当于2.5，该染色液配制后于4 ℃下可保存数月，麝香草酚作为防腐剂可防止真菌滋生。
（2）如果没有爱先蓝8GX，也可使用爱先蓝8GS。
（3）如果没有核固红染液，可用番红染液复染。
（1）鉴别黏液肉瘤和脂肪肉瘤，黏液肉瘤呈阳性而脂肪肉瘤呈阴性。
（2）新型隐球菌荚膜可被爱先蓝染色液（pH 2.5）染成蓝色。
爱先蓝分子中带正电荷的盐键能够与酸性黏液物质中带负电荷的酸性基团进行结合，再与PAS进行复合染色，最后显示三种不同的黏液物质成分。
爱先蓝染色液：爱先蓝8GX 1 g，蒸馏水97 mL，冰醋酸 3 mL。在溶液中加入麝香草酚50 mg防腐。pH值范围为2.6~3.0。
10%中性福尔马林固定的结肠黏膜。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水冲洗。
（3）浸入3%醋酸液中3 min。
（4）滴加爱先蓝染色液，于室温下放置30 min。
（5）浸入3%醋酸液3 min，用蒸馏水冲洗3次。
（6）用0.5%过碘酸氧化10 min，用自来水冲洗，用蒸馏水浸洗2次。
（7）浸入Schiff液中10~20 min，流水冲洗2~5 min，用蒸馏水浸洗2次。
（8）用无水乙醇脱水，用二甲苯透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
中性黏液物质呈红色，酸性黏液物质呈蓝色，混合性黏液物质呈紫红色。
（1）爱先蓝染色时，所使用的载玻片不能是涂有白胶和火棉胶的防脱玻片，因为这些胶体中含有糖类物质，容易与染色试剂结合，产生背景着色。
（2）Schiff液使用后，于4 ℃下保存备用。染色采用滴染法时，对已经使用过的试剂，不能回收再利用，防止影响染色效果。
肠型胃癌细胞分泌酸性黏液物质，呈蓝色；胃型胃癌细胞分泌中性黏液物质，呈红色。
胶原纤维（collagen fiber）是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，主要由成纤维细胞产生的一种胶原蛋白交联而成，在皮肤、巩膜和肌腱中最为丰富。胶原纤维韧性大，抗拉力强。此种纤维新鲜时呈白色，有光泽，粗细不等，直径为1~20 μm，有分支，交织成网。电镜下可见胶原纤维是由更细的直径为20~200 nm的胶原原纤维集合成束的，胶原原纤维有明暗交替的周期性横纹，横纹周期约为64 nm。胶原纤维在HE染色的切片中呈嗜酸性，显浅红色，难与其他纤维相区别。胶原纤维分子中含有碱性氨基酸，能与酸性染料结合并发生反应，由于酸性染料具有不同程度的扩散性，小分子染料（如苦味酸）因扩散性高而容易进入结构致密的狭孔组织（如肌纤维）间隙，大分子染料（如丽春红）因扩散性低而只能浸润结缔组织疏松的宽孔组织（如胶原纤维）间隙。
（1）Weigert氏铁苏木精液包含A液（苏木精1 g，无水乙醇100 mL）、B液（30%三氯化铁液4 mL，蒸馏水95 mL，纯盐酸1 mL）。A、B两液分瓶存放，A液配制后数天即可使用，不宜配制过多，保存时间过长则染色不良，需密封保存。B液配置后即可使用。临用前将A、B两液等量混合均匀。
（2）Southgate氏贮备液：胭脂红1 g，无水乙醇50 mL，蒸馏水50 mL，氢氧化铝1 g，无水氯化铝0.5 g。准备一个三角烧瓶，将无水乙醇和蒸馏水混合均匀，依次加入胭脂红、氢氧化铝和无水氯化铝，用玻璃棒搅拌混合均匀，于水浴中煮沸3 min，并不断搅动。自然冷却至室温后过滤，并用50%乙醇加至100 mL。用小口砂塞瓶盛装，于4 ℃下保存。
（3）Van Gieson氏染液包含A液（1%酸性品红水溶液）、B液（约1.2%苦味酸饱和水溶液）。A、B两液分瓶盛放。临用前以1∶9比例混合均匀后使用。
（4）1%盐酸乙醇液：70%乙醇液99 mL，纯盐酸1 mL。
10%中性福尔马林固定的肌肉组织。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水冲洗。
（3）用Weigert氏铁苏木精液染色5~10 min，用流水稍冲洗。
（4）用1%盐酸乙醇液迅速分化，用流水冲洗5~10 min。
（5）用Van Gieson氏染液染1~2 min，倒去染液，直接用95%乙醇分化和脱水。
（6）用无水乙醇脱水，用二甲苯透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
胶原纤维呈鲜红色，肌纤维、细胞质及红细胞呈黄色，细胞核呈蓝褐色。
（1）Weigert氏铁苏木精分为A、B两液，临用前将二者等量混合均匀，如预先混合易发生氧化沉淀而逐渐失去染色能力。如需混合以备随时使用，则须用砂塞瓶盛装，于4 ℃下存放，这样可以使用数周。也可以用天青石蓝-Mayer氏苏木精代替Weigert氏铁苏木精。
（2）Van Gieson氏染液也分A、B两液，临用前以1∶9比例混合配制。如组织含胶原纤维较少，则以1∶7比例混合为宜。如两液预先混合，放置一段时间后，酸性品红不易着色。
（3）Van Gieson氏染液的酸性品红容易被水洗脱，苦味酸的黄色易被95%乙醇洗脱。因此，切片经Van Gieson氏染液染色后经过水或95%乙醇时应迅速。
（4）切片经Van Gieson氏染液染色后，可不经水洗，滴入95%乙醇分化，然后经无水乙醇快速脱水。这样二者色泽均较鲜明艳丽。如出现分化不均，可迅速用水洗一下后，用95%乙醇迅速分化。
（5）用Van Gieson氏染液染色容易褪色，如改用丽春红S（poncean S）代替酸性品红，则不容易褪色。
软组织的梭形细胞肿瘤，既可以是纤维性的，也可以是肌源性的。在HE染色切片中有时很难区别。用改良Van Gieson氏染液染色，纤维性的呈红色，肌源性的呈黄色。
（1）Weigert氏铁苏木精包含A液（苏木精1 g，无水乙醇100 mL）、B液（30%三氯化铁液4 mL，蒸馏水95 mL，纯盐酸1 mL）。A、B两液分瓶存放，A液配制后数天即可使用，不宜配制过多，保存时间过长则染色不良，需密封保存。B液配置后即可使用。临用前将A、B两液等量混合均匀。
（2）丽春红酸性品红液：丽春红0.7 g，酸性品红0.3 g，蒸馏水99 mL，冰醋酸1 mL。
（3）1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1 g，蒸馏水100 mL。
（4）2%苯胺蓝液：苯胺蓝2 g，冰醋酸2 mL，蒸馏水100 mL。
（5）亮绿液：亮绿1 g，蒸馏水99 mL，冰醋酸1 mL。
Bouin氏液或Zenker氏液固定的肌肉组织。
（1）组织经Bouin氏液或Zenker氏液固定后，用流水冲洗过夜，常规脱水石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水冲洗。
如用Zenker氏液固定者，应进行除汞处理，步骤如下：
① 切片脱蜡后于0.5%碘乙醇作用10 min，稍用水冲洗。
② 用5%硫代硫酸钠作用5 min，流水冲洗10 min。
（3）用Weigert氏铁苏木精染色5~10 min，用流水稍冲洗。
（4）用1%盐酸乙醇分化，流水冲洗3~5 min。
（5）用丽春红酸性品红液染色5~10 min，用蒸馏水稍冲洗。
（6）用1%磷钼酸水溶液处理5~10 min，无需水洗，直接用苯胺蓝液或亮绿液复染5 min。
（7）用1%冰醋酸处理1 min，用95%乙醇脱水多次。
（8）用无水乙醇脱水，用二甲苯透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
胶原纤维呈蓝色（2%苯胺蓝液复染）或者绿色（亮绿液复染），细胞质、肌纤维和红细胞呈红色，细胞核呈蓝褐色。
（1）组织使用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%中性福尔马林固定，组织切片可在脱蜡后再放入Bouin氏液作用一晚或者置于37 ℃水浴箱内1~2 h，然后用流水冲洗至黄色消失再染色。
（2）Weigert氏铁苏木精分为A、B两液，临用前将二者等量混合使用，如预先混合易发生氧化沉淀而逐渐失去染色能力。如需混合以备随时使用，则须用砂塞瓶盛装于4 ℃下存放，这样可以使用数周。也可以用天青石蓝-Mayer氏苏木精代替Weigert氏铁苏木精。
（3）如果没有丽春红染料，可把酸性品红加至1 g来配制。
（4）用1%磷钼酸水溶液处理时可在显微镜下控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。
（1）天狼星红苦味酸饱和液：0.5%天狼星红10 mL，苦味酸饱和液90 mL。
（2）天青石蓝液：天青石蓝B 1.25 g，铁明矾1.25 g，蒸馏水250 mL。溶解煮沸，待冷却过滤后，加入甘油30 mL，再加入浓盐酸0.5 mL。
10%中性福尔马林固定的肌肉组织。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水冲洗。
（3）加入天青石蓝液染色5~10 min，用蒸馏水冲洗3次。
（4）用天狼星红苦味酸饱和液染色15~30 min，用无水乙醇直接分化与脱水。
（5）用二甲苯透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其他呈黄色。
（1）细胞核复染如果用Harris氏苏木精，容易在Van Gieson氏染液染色后变红，所以需要使用Weigert铁苏木精或者天青石蓝液染色。
（2）染色封固后的切片必须及时使用偏光显微镜进行观察和照相，以保证鲜艳的色彩。
在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维。
Ⅰ型胶原纤维：紧密排列，显示很强的双折光性，见黄色或红色的纤维。
Ⅱ型胶原纤维：显示弱的双折光性，呈多种色彩的疏松网状分布。
Ⅲ型胶原纤维：显示弱的双折光性，见绿色的细纤维。
Ⅳ型胶原纤维：显示弱的双折光性，见淡黄色的基膜。
通过观察组织中胶原纤维的变化，判断各种组织炎症的修复情况与纤维化程度。
网状纤维（reticular fiber）是网状结缔组织内的一种纤维，由网状细胞产生。网状纤维纤细且有分支，交织成网，直径为0.2~1 μm，没有弹性，有韧性，能抵抗胃液消化和弱酸腐蚀。它的主要成分是Ⅲ型胶原蛋白，常伴有其他类型的胶原蛋白、蛋白多糖和糖蛋白，电镜下也可见具有64 nm周期性横纹的胶原原纤维。HE染色下的网状纤维一般不易辨识，具有嗜银性，经银氨溶液浸染，纤维能变成黑色，故又称嗜银纤维。其染色的基本原理是组织蛋白与银化合物结合，经甲醛还原成为金属银而沉淀于组织内及表面。
网状纤维分布广泛，常以网状结缔组织形式分布，即有网状纤维和网状细胞同时存在。网状纤维多分布在造血器官和淋巴器官，如脾脏、淋巴结、扁桃体和胸腺，消化道和呼吸道管壁的淋巴组织内；也可以单独存在，没有伴随网状细胞，见于上皮的基底膜，以及平滑肌、脂肪细胞、毛细血管和神经纤维。
（1）Gordon-Sweets氏银氨液：用小量杯盛10%硝酸银（silver nitrate）水溶液2 mL，先逐滴滴入氢氧化铵（ammonium hydroxide），边滴边摇动容器，开始出现沉淀物，继续滴入氢氧化铵至所形成的沉淀物恰好溶解。然后加入3%氢氧化钠（sodium hydroxide）水溶液2 mL，再次形成沉淀。继续滴入氢氧化铵，直至沉淀物又恰好溶解。最后加入蒸馏水至40 mL，配好后用棕色砂塞瓶盛装，于4 ℃下保存，用前取出恢复到室温。
（2）酸化高锰酸钾水溶液包含：A液，即0.5%高锰酸钾水溶液［高锰酸钾（potassium permanganate）0.5 g，蒸馏水100 mL］；B液，即0.5%硫酸水溶液［硫酸（sulfuric acid）0.5 mL，蒸馏水99.5 mL］。A、B两液分瓶盛装，临用前以1∶1比例混合均匀。
（3）2%草酸水溶液：草酸（oxalic acid）2 g，蒸馏水100 mL。
（4）2%硫酸铁铵水溶液：硫酸铁铵2 g，蒸馏水100 mL。
（5）10%中性甲醛液：浓甲醛10 mL，蒸馏水90 mL。
（6）核固红染液：核固红0.1 g，硫酸铝5 g，蒸馏水100 mL，麝香草酚50 mg。先把硫酸铝放入蒸馏水中溶解，然后加入核固红，稍加温溶解，冷却后过滤，最后加入麝香草酚。
10%中性福尔马林固定的淋巴结或肝组织。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水冲洗。
（3）把切片平置在染色架上，滴入酸化高锰酸钾水溶液，氧化5 min，稍用水冲洗。
（4）用2%草酸水溶液漂白1~2 min，稍用水冲洗。
（5）用2%硫酸铁铵水溶液媒染5 min，稍用水冲洗，用蒸馏水再洗一次。
（6）将组织切片浸没于盛有Gordon-Sweets氏银氨液的Coplin染色缸中作用1~2 min，用蒸馏水稍冲洗。
（7）用10%中性甲醛液还原1 min，流水冲洗5~10 min。
（8）用核固红染液复染5~10 min，或用HE复染，稍用水冲洗。
（9）常规脱水、透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
网状纤维呈黑色，细胞核呈红色（核固红复染）或蓝色（苏木精复染），胶原纤维呈黄棕色，细胞质呈淡红色（伊红复染）。
（1）10%硝酸银水溶液要在4 ℃下保存。Gordon-Sweets氏银氨液在使用时，尽量采用浸染的方式，防止银污染组织，银氨液染色后用蒸馏水浸洗较好。
（2）二氨银离子带正电荷，能够被具有嗜银性的网状纤维吸收，经甲醛还原形成金属银，因此甲醛液要新鲜配制，不能用陈旧性溶液，以防止银化合物不能被还原成金属银。
（1）Gomori氏银氨液配制法：用小量杯盛10%硝酸银水溶液3份，加入10%氢氧化钾（potassium hydroxide）水溶液1份，立即产生棕黑色颗粒沉淀，观察此溶液的总量并记录，加入约10倍体积的蒸馏水洗涤沉淀物，然后倒去上层清液，再加入蒸馏水反复洗涤3次，最后加蒸馏水至原来记录的总量。然后滴入氢氧化铵并不断摇荡，直至沉淀物完全溶解。再次加入数滴10%硝酸银至溶液稍变混浊，再加入氢氧化铵数滴，至溶液再次变澄清。最后按原总量加蒸馏水进行10~15倍稀释。平时于4 ℃下保存，临用前取出恢复至室温。
（2）0.25%高锰酸钾水溶液：高锰酸钾0.25 g，蒸馏水100 mL。
（3）2%草酸水溶液：草酸2 g，蒸馏水100 mL。
（4）2%硫酸铁铵水溶液：硫酸铁铵2 g，蒸馏水100 mL。
（5）10%中性甲醛液：浓甲醛10 mL，蒸馏水90 mL。
10%中性福尔马林固定的淋巴结或肝组织。
（1）10%中性福尔马林固定石蜡包埋组织切片，厚度4 μm，于65 ℃下烤片15~30 min。
（2）常规二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10 min，使用梯度乙醇至蒸馏水冲洗。
（3）把切片平置在染色架上，滴入0.25%高锰酸钾水溶液，氧化5 min，稍用水冲洗。
（4）用2%草酸水溶液漂白1~2 min，稍用水冲洗。
（5）用2%硫酸铁铵水溶液媒染5 min，稍用水冲洗，用蒸馏水再洗一次。
（6）将组织切片浸没于盛有Gomori氏银氨液的Coplin染色缸中作用2~5 min，用蒸馏水稍洗。
（7）用10%中性甲醛液还原1 min，流水冲洗5~10 min。
（8）常规脱水、透明，滴加中性树胶，盖玻片封片。
网状纤维呈黑色，胶原纤维呈黄或黄棕色，细胞核呈灰褐色。
（1）实验过程中所使用的玻璃器皿必须用洗液浸泡并冲洗干净，配制银氨液的蒸馏水要纯，所用的化学试剂的质量要纯，如用优级纯（GR）或分析纯（AR）级，纯度越高，反应越敏感。
（2）配制Gomori氏银氨液时滴加氢氧化铵要适当，边加边摇动，使沉淀物溶解至肉眼仅能见到一些微粒为止。
（3）组织切片经2%硫酸铁铵水溶液和Gomori氏银氨液作用后水洗时间要恰当。时间过长会减弱银的还原性，导致网状纤维不够黑；时间过短又会使银的还原不够均匀。一般以数秒为宜。
（4）配制好的Gomori氏银氨液受光或空气作用易析出银盐，故宜用棕色玻璃瓶盛装并密封避光保存，于4 ℃下可保存数天至数周，如见银盐析出，应重新配制。
（5）经10%中性甲醛液还原和流水冲洗后，可在显微镜下观察。如浸银过度，可用高锰酸钾水溶液短时处理再经流水冲洗；如浸银不足，可在自来水稍冲洗后，再用蒸馏水洗一次，然后浸入Gomori氏银氨液中，时间比第一次稍短，最后用蒸馏水冲洗，用10%中性甲醛液还原，有时可获得满意效果，但以另取切片重新染色为佳。
（1）鉴别癌和肉瘤：癌巢周围有网状纤维包绕，巢内癌细胞之间没有网状纤维；肉瘤的瘤细胞之间往往可见不等量的网状纤维分散包绕单个肉瘤细胞。
（2）鉴别原位癌或原位癌早期浸润：肿瘤只局限于上皮层，未突破基底膜，网状纤维染色见基底膜完整，考虑为原位癌；癌细胞突破基底膜，网状纤维染色见基底膜断裂崩解，则考虑为原位癌早期浸润。
（3）鉴别血管内皮瘤和血管外皮瘤：血管内皮瘤可见网状纤维包绕瘤细胞小团，显示瘤细胞在血管壁基底膜内；而血管外皮瘤的瘤细胞位于血管基底膜外，网状纤维穿插于瘤细胞之间。