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2.9 嗜碱性粒细胞活化试验

嗜碱性粒细胞活化试验(basephil activation test,BAT)是流式细胞仪出现后过敏科学最重要的试验手段之一。我们知道嗜碱性粒细胞和肥大细胞是即发型过敏反应(immediate type allergic reaction)的效应细胞,过敏原和细胞表面的高亲和力受体交联,形成IgE受体-IgE(FcεRI-IgE)-过敏原复合物,从而诱发细胞脱颗粒,释放炎症因子。和血清中特异性IgE相比,BAT因其和FcεRI-IgE相关而更具有功能性意义。

20世纪90年代初有研究者发现嗜碱性粒细胞活化时CD63上调,CD63是一种膜蛋白,和组胺一样存在于细胞内溶酶体颗粒中,脱颗粒时往细胞膜迁移,能被流式细胞仪检测到,因此CD63可以作为BAT的参数。当然,组胺的释放也可以作为BAT的参数,二者相关性很好。组胺释放通常是用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测其浓度,因为甲级组胺(methylhistamine)的交叉反应,检测组胺浓度比较麻烦,血液中其他白细胞也会影响检测,相比组胺释放,CD63可能更精确。CD203c和CD63共表达(co express),因此也可以把CD203c作为BAT参数。

BAT通常采用全血(whole blood)样品,因嗜碱性粒细胞半衰期不足1周,因此采血后最好24小时内检测。患者服用抗组胺药物不影响结果,但应避免应用全身激素(systemic steroid)和环孢素A(cyclosporin A)。根据受试者的皮肤点刺试验或特异性IgE检测结果选择用什么过敏原来激发,最好选择标准化的过敏原,标准化的过敏原也方便其他人重复试验、对比数据。有些过敏原是不稳定的,特别是在水溶液中,因此每次试验都需要重新配置激发溶液,过敏原的质量可能是决定试验成败的关键。所用过敏原的浓度单位可以为μg/mL、ng/mL,甚至可能稀释到pg/mL。如果是重组抗原或纯化的单一过敏原,也可以用更精确的摩尔浓度。CD63是BAT最常用的参数,CD203c检测也越来越多。除非是标准化的商品试剂,否则自己实验室的BAT应该先得到方法学的验证。

嗜碱性粒细胞的活性通常有两种检测方式(或表达方式),一是其反应能力(basophil reactivity,在某一给定条件下嗜碱性粒细胞参加反应的最大数量),二是其灵敏度(basophil sensitivity,一半嗜碱性粒细胞参与反应时过敏原的浓度),或者将二者结合求反应能力和灵敏度共同的变化。不同的方法可能解决不同的临床问题。

在过敏诊断上,我们一般在患者症状的基础上检查皮肤点刺和特异性IgE,对于难确诊的患者可以采用过敏原激发试验,但体内过敏原激发试验耗时、昂贵、危险。BAT作为一种体外激发试验可以很好地弥补体内激发试验的不足,特别是对食物、药品和蜂毒过敏的患者,最好先做BAT,如果必要再做体内激发试验。过敏性鼻炎中有一部分患者,血清中特异性IgE检测和皮肤点刺试验都是阴性,但BAT阳性。嗜碱性粒细胞的灵敏度(sensitivity)很稳定,重复性也好,因此BAT常用来评价特异性免疫治疗(allergen specific immunotherapy,AIT)的疗效,成功的AIT使嗜碱性粒细胞的敏感度降低,这一现象在AIT治疗剂量上升阶段就可以观察到。抗IgE治疗中,也可以用BAT来筛选患者和评价疗效,而且BAT也能用来监控过敏性疾病的自然进程。

参考文献

[1]HOFFMANN H J,SANTOS A F,MAYORGA C,et al. The clinical utility of basophil activation testing in diagnosis and monitoring of allergic disease[J]. Allergy,2015,70(11):1393-1405. StUVxaK3fpSD4yT3z5IUS936kqZ4vcMYpTko7R/dYJ+pt28wYdKDItmBB8Nz74Pb

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