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本品为雉科动物家鸡 Gallus gallus domesticus Brisson的干燥砂囊内壁经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。
取鸡内金饮片8 000g，加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏（干浸膏出膏率为3.0%～6.0%），加入辅料适量，干燥（或干燥，粉碎），再加入辅料适量，混匀，制粒，制成1 000g，即得。
本品为类白色至黄白色的颗粒；气微腥，味苦。
（1）取本品1.5g，研细，加乙醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取鸡内金对照药材0.2g，加水10ml，煮沸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣自“加乙醇30ml”起，同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》2020年版通则0502）试验，吸取供试品溶液8µl、对照药材溶液15µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（3∶3∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
（2）取本品适量，研细，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加1%碳酸氢铵溶液25ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷后用1%碳酸氢铵补足减失重量，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液1ml，加胰蛋白酶溶液100μl（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含1mg的溶液，临用时配制），摇匀，37℃恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取鸡源多肽1、鸡源多肽2对照品适量，精密称定，加1%碳酸氢铵溶液分别制成每1ml含2μg的混合对照品溶液。照高效液相色谱法-质谱法（《中国药典》2020年版通则0512和通则0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7～1.9μm）；以乙腈为流动相A，0.1%甲酸水溶液为流动相B，按表7-4-1中规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml，采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）379.21（双电荷）→571.36和m/z 379.21（双电荷）→ 385.26，m/z 785.41（双电荷）→ 941.51 和 m/z 785.41（双电荷）→ 245.08作为检测离子对进行检测，色谱峰的信噪比均应大于3∶1。
表7-4-1 梯度洗脱表
吸取供试品溶液2μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。以质荷比（m/z）379.21（双电荷）→571.36和m/z 379.21（双电荷）→ 385.26，m/z 785.41（双电荷）→941.51和m/z 785.41（双电荷）→245.08离子对提取的供试品离子流色谱中，应同时呈现与对照品色谱保留时间一致的色谱峰。
应符合颗粒剂项下有关的各项规定（《中国药典》2020年版通则0104）。
取本品研细，取约2g，精密称定，精密加入乙醇100ml，照醇溶性浸出物测定法（《中国药典》2020年版通则2201）项下的热浸法测定，不得少于8.0%。
照高效液相色谱法（《中国药典》2020年版通则0512）测定。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm）；以乙腈-0.1mol/L醋酸钠溶液（用醋酸调节pH值至6.5）（7∶93）为流动相A；以乙腈-水（4∶1）为流动相B，按表7-4-2中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为40℃；检测波长为254nm。理论板数按丙氨酸峰计算应不低于4 000。
取鸡内金对照药材适量，约0.1g，精密称定，置于氨基酸水解管中，精密加入6mol/L盐酸溶液10ml，置于150℃烘箱中水解3小时，放冷，取出，滤过，滤液移至蒸发皿中，水解管与滤渣再用水10ml分次洗涤，滤过，滤液并入蒸发皿中，蒸干，残渣加0.1mol/L盐酸溶液溶解，转移至25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为鸡内金对照药材参照物溶液。
另取［含量测定］项下的对照品溶液，作为对照品参照物溶液。
取苏氨酸对照品、酪氨酸对照品、缬氨酸对照品、异亮氨酸对照品、亮氨酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml含苏氨酸95μg、酪氨酸140μg、缬氨酸100μg、异亮氨酸95μg、亮氨酸140μg的混合溶液，作为对照品参照物溶液。
取本品适量，研细，取约0.1g，精密称定，置于氨基酸水解管中，精密加入6mol/L盐酸溶液10ml，置于150℃烘箱中水解3小时，放冷，取出，滤过，滤液移至蒸发皿中，水解管与滤渣再用水10ml分次洗涤，滤过，滤液并入蒸发皿中，蒸干，残渣加0.1mol/L盐酸溶液溶解，转移至25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，即得。
精密量取上述参照物溶液和供试品溶液各5ml，分别置25ml量瓶中，各加0.1mol/L异硫氰酸苯酯（PITC）的乙腈溶液、1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加50%乙腈至刻度，摇匀。取10ml，加正己烷10ml，振摇，放置10分钟，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
供试品色谱中应呈现11个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的11个特征峰保留时间相对应，其中9个峰应分别与相应对照品参照物峰保留时间相对应，与脯氨酸参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应该在规定值的±10%范围之内［规定值为：1.07（峰5）、1.48（峰 8）］（图 7-4-1）。
图7-4-1 鸡内金配方颗粒对照特征图谱
色谱仪：Waters Acquity Arc高效液相色谱仪；色谱柱：Thermo Acclaim C 18
照高效液相色谱法（《中国药典》2020年版通则0512）测定。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm）；以乙腈-0.1mol/L醋酸钠溶液（用醋酸调节pH值至6.5）（7∶93）为流动相A；以乙腈-水（4∶1）为流动相B，按表7-4-2中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为40℃；检测波长为254nm。理论板数按丙氨酸峰计算应不低于4 000。
表7-4-2 梯度洗脱表
取甘氨酸对照品、丙氨酸对照品、脯氨酸对照品、苯丙氨酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml含甘氨酸90μg、丙氨酸50μg、脯氨酸75μg、苯丙氨酸70μg的混合溶液。
取本品适量，研细，取约0.1g，精密称定，置于氨基酸水解管中，精密加入6mol/L盐酸溶液10ml，置于150℃烘箱中水解3小时，放冷，取出，滤过，滤液移至蒸发皿中，水解管与滤渣再用水10ml分次洗涤，滤过，滤液并入蒸发皿中，蒸干，残渣加0.1mol/L盐酸溶液溶解，转移至25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，即得。
精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各5ml，分别置25ml量瓶中，各加0.1mol/L异硫氰酸苯酯（PITC）的乙腈溶液、1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加50%乙腈至刻度，摇匀。取10ml，加正己烷10ml，振摇，放置10分钟，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含甘氨酸（C 2 H 5 NO 2 ）应为6.0～19.0mg、丙氨酸（C 3 H 7 NO 2 ）应为5.0～12.5mg、脯氨酸（C 5 H 9 NO 2 ）应为7.0～19.0mg、苯丙氨酸（C 9 H 11 NO 2 ）应为7.0～18.0mg。
每1g配方颗粒相当于饮片8.0g。
密封。
本研究以大生产三批鸡内金配方颗粒样品进行质量研究，根据国家药品监督管理局《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》的要求，参考《中国药典》2020年版一部鸡内金药材质量标准，《天津市中药配方颗粒质量标准》鸡内金配方颗粒项下质量标准，以及前期鸡内金标准汤剂的质量标准，建立符合标准汤剂质量要求的鸡内金配方颗粒质量标准。
药品名称：鸡内金配方颗粒
汉语拼音：Jineijin Peifangkeli
本品为雉科动物家鸡 Gallus gallus domesticus Brisson的干燥砂囊内壁经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。
鸡内金配方颗粒的研究以标准汤剂为对照，以出膏率、指标成分含量和转移率、特征图谱的一致性为考察指标，通过单因素实验，确定了提取、固液分离、浓缩、干燥、成型工艺，通过三批中试的验证，考察了鸡内金中间体及成品制备过程中的量值传递和物料平衡，最终确定了鸡内金配方颗粒的制备工艺。
根据三批鸡内金配方颗粒样品的实际性状描述，暂定本品性状为：本品为类白色至黄白色的颗粒；气微腥，味苦（图7-4-2）。
图7-4-2 3批鸡内金配方颗粒性状图
金的化学成分主要为蛋白质、多糖、氨基酸和微量元素。本研究参照《天津市中药配方颗粒质量标准》的鸡内金【鉴别】项下方法制定，按本节标准草案鉴别项下方法操作，结果供试品在与对照品相应位置上有对应斑点；经试验验证，方法重现性好，因此将该方法收入正文（图7-4-3）。
前期鸡内金标准汤剂的研究，选用鸡源多肽1（GESVLPR）和鸡源多肽2（IDEASIPELQEIGR）两个肽段作为鸡内金配方颗粒的特征多肽，按照与标准汤剂相同的供试品制备方法和条件对鸡内金配方颗粒进行测定，结果显示，以质荷比（m/z）379.21（双电荷）→ 571.36 和 m/z 379.21（双电荷）→ 385.26，m/z 785.41（双电荷）→ 941.51 和 m/z 785.41（双电荷）→245.08离子对提取的鸡内金配方颗粒供试品溶液离子流色谱中，均能呈现与对照品保留时间一致的色谱图峰，且所检测出的离子对测定的MRM色谱峰信噪比均大于3∶1（图7-4-4～图7-4-5），表明鸡内金标准汤剂质谱鉴别方法和条件同样适用于鸡内金配方颗粒。通过对方法供试品溶液制备中的提取方式和胰蛋白酶用量进行考察，并对方法的专属性、溶液稳定性以及耐用性进行方法学验证，表明该方法专属性且耐用性良好，因此列入标准正文。
图7-4-3 3批鸡内金配方颗粒薄层色谱
1.鸡内金配方颗粒（JNJ-C-01）8μl；2.鸡内金配方颗粒（JNJ-C-02）8μl；3.鸡内金配方颗粒（JNJ-C-03）8μl；4.鸡内金对照药材15μl；5.阴性样品 8μl。
图7-4-4 鸡内金配方颗粒质谱鉴别MRM质谱图（鸡源多肽1，m/z =379.21）
图7-4-5 鸡内金配方颗粒质谱鉴别MRM质谱图（鸡源多肽2，m/z =785.41）
《中国药典》2020年版通则0104颗粒剂项下规定，对鸡内金配方颗粒的粒度、水分、溶化性、装量差异、微生物限度进行了检查，规定如正文。
（1）重金属及有害元素：
按《中国药典》2020年版通则2321铅、镉、砷、汞、铜测定法（电感耦合等离子体质谱法）操作，采用电感耦合等离子体质谱仪对本品样品三批进行铅、镉、砷、汞、铜的测定，结果见表7-4-3。
表7-4-3 重金属及有害元素测定结果表
根据《中国药典》2020年版对中药材重金属及有害元素的一般规定，除矿物、动物、海洋类以外的中药材中，铅不得过5mg/kg；镉不得过1mg/kg；砷不得过2mg/kg；汞不得过0.2mg/kg；铜不得过20mg/kg。由表7-4-3可见，三批鸡内金配方颗粒重金属及有害元素镉≤1mg/kg、铜≤20mg/kg、铅≤5mg/kg、砷≤2mg/kg、汞≤0.2mg/kg。暂不纳入标准正文中。
（2）有机氯农药残留量：
按《中国药典》2020年版通则2341农药残留量测定法（第一法有机氯类农药残留量测定法-色谱法）中9种有机氯类农药残留量测定法操作，采用气相色谱仪对本品三批样品进行9种有机氯类农药残留量进行测定，测定结果见表7-4-4。
表7-4-4 有机氯类农药残留量测定结果表
结果：根据《中国药典》2020年版对中药材有机氯类农药残留量的一般规定，六六六（总BHC）不得过0.2mg/kg；滴滴涕（总DDT）不得过0.2mg/kg；五氯硝基苯（PCNB）不得过0.1mg/kg。由表7-4-4可见，三批鸡内金配方颗粒中有机氯农药残留未超过《中国药典》2020年版限度，暂不纳入标准正文中。
按《中国药典》2020年版通则2201浸出法测定项下醇溶性浸出物测定法的热浸法测定，对三批鸡内金配方颗粒进行测定，测定结果为20.74%、19.75%、20.57%。本研究仅测定了三批样品，缺乏样品的代表性，有待后续积累更多数据进行完善。因此参考广东一方制药有限公司的历史数据和本品大生产三批数据，暂定鸡内金配方颗粒醇溶性浸出物不得少于8.0%。
参照鸡内金标准汤剂特征图谱标准，对鸡内金配方颗粒特征图谱进行研究。
取三批鸡内金配方颗粒，按正文色谱条件，测定三批鸡内金配方颗粒特征图谱，结果见表7-4-5、图7-4-6、图7-4-7。
图7-4-6 3批鸡内金配方颗粒特征图谱叠加图
表7-4-5 3批鸡内金配方颗粒特征图谱（相对保留时间）
将三批鸡内金配方颗粒HPLC 特征图谱使用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”2012年版进行匹配，生成对照图谱，建立鸡内金配方颗粒对照特征图谱（图7-4-6）。
图7-4-7 鸡内金配方颗粒对照特征图谱
峰1：甘氨酸；峰2：苏氨酸；峰3：丙氨酸；峰4（S）：脯氨酸；峰6：酪氨酸；峰7：缬氨酸峰9：异亮氨酸；峰10：亮氨酸；峰11：苯丙氨酸。
前期研究在鸡内金标准汤剂的研究中建立了以甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸及苯丙氨酸为含测指标的质量控制方法，并规定了标准汤剂中甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸及苯丙氨酸的含量限度；本次研究参考标准汤剂的方法，建立鸡内金配方颗粒中甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸及苯丙氨酸的含量测定，并开展方法学验证。根据18批标准汤剂的研究结果，确定配方颗粒成品中甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸及苯丙氨酸的含量限度。
取所制备的3批鸡内金配方颗粒，按照【含量测定】项下供试品制备方法制备供试品溶液，按正文项下色谱条件进行测定，测定3批鸡内金配方颗粒，结果见表7-4-6。
表7-4-6 鸡内金配方颗粒的含量测定结果表
结合鸡内金药材、饮片质量及鸡内金标准汤剂氨基酸含量测定结果，暂定本品每1g含甘氨酸（C 2 H 5 NO 2 ）应为 6.0～19.0mg、丙氨酸（C 3 H 7 NO 2 ）应为 5.0～12.5mg、脯氨酸（C 5 H 9 NO 2 ）应为 7.0～19.0mg、苯丙氨酸（C 9 H 11 NO 2 ）应为 7.0～18.0mg。
本品为黄白色至棕黄色的颗粒；气微腥，味苦。
按照制法中制成总量计算出每1g配方颗粒相当于饮片8.0g。
根据颗粒剂易吸潮特点以及稳定性试验结果，包装应密封。
本研究以鸡内金标准汤剂作为参照物，以衡量鸡内金配方颗粒与传统汤剂的一致性。首先通过18批不同产地样品建立了鸡内金标准汤剂的三大质量指标，即出膏率，甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸和苯丙氨酸含量和转移率，以及特征图谱标准；并以标准汤剂质量指标为基准，指导鸡内金配方颗粒生产工艺过程的质量控制，建立了与鸡内金标准汤剂质量指标一致的原料、中间体和配方颗粒的质量标准。
鸡内金的主要成分包括蛋白质、多糖、氨基酸和微量元素等，其中以氨基酸成分为主。鸡内金饮片中含有甘氨酸、丙氨酸等鲜味氨基酸，以及苯丙氨酸等必需氨基酸。具有调节肠胃运动、调节消化液分泌、调节血糖血脂、改善乳腺增生等作用。因此，鸡内金配方颗粒质量标准的建立，以标准汤剂质量标准为依据，针对氨基酸类成分作为含量测定指标成分，采用HPLC法，测定本品中甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸和苯丙氨酸含量；分别建立药材、饮片、标准汤剂、中间体、成品的特征图谱，选取了11个共有峰，并对全过程进行量值传递分析，以确保鸡内金配方颗粒的整体性质量控制。采用TLC法，选择鸡内金对照药材为对照进行专属性鉴别。此外还建立了其质谱鉴别方法，选用鸡源多肽1（GESVLPR）和鸡源多肽2（IDEASIPELQEIGR）两个肽段作为鸡内金配方颗粒的特征多肽，以质荷比（m/z）379.21（双电荷）→571.36和m/z 379.21（双电荷）→ 385.26，m/z 785.41（双电荷）→941.51和m/z 785.41（双电荷）→245.08离子对提取的鸡内金配方颗粒供试品溶液离子流色谱中，均能呈现与对照品保留时间一致的色谱图峰。除了进行定性定量分析外，还采用ICP-MS进行重金属及有害元素的测定、采用GC进行9种有机氯农药残留量的测定、采用《中国药典》2020年版所载方法进行二氧化硫残留量控制原料、产品质量，以期积累数据纳入药材内控质量标准，确保本品临床使用的安全性。经方法学考察，检测方法均符合要求，检测数据稳定可靠。三批大生产的中间体、成品之间各项关键指标均在规定质量范围内，即三批大生产量值传递过程与标准汤剂均一致。说明鸡内金配方颗粒与鸡内金标准汤剂物质基础一致，与鸡内金标准汤剂“形不同，但质相同”。
所建立的质量标准，能定性、定量评价鸡内金配方颗粒的质量，为临床配方提供了符合传统汤剂质量，剂量合理、准确，工艺规范、统一，质量安全、优良且稳定的鸡内金配方颗粒。