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第二节
鸡内金酶活性的测定

中医传统上将鸡内金作为消食药入药,具有健胃消食的功效,用于消化不良、食积不化,小儿疳积等。有研究报道鸡内金主要成分中还有胃蛋白酶、淀粉酶等活性酶,胃蛋白酶能水解食物中的蛋白质,淀粉酶能分解食物中的淀粉类物质,但目前对鸡内金消食作用的机制尚不明确,是否与上述成分有关尚待研究。

本研究是对鸡内金、炒鸡内金饮片及其对应的标准汤剂中3种消化酶进行活性检测,从测定结果分析出这三种消化酶由鸡内金饮片到炒鸡内金饮片以及由饮片到标准汤剂之间的传递规律。具体方法和结果分析如下:

一、测定方法

(一) α -淀粉酶活性测定
1.样本前处理

称取约0.05g样本,加0.5ml蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取15分钟,每隔5分钟振荡1次,使其充分提取;6 000g,室温离心10 分钟,吸取上清液即为淀粉酶原液。

2.测定步骤

(1)酶标仪预热30分钟以上,调节波长到570nm,蒸馏水调零。

(2)将淀粉标准液用蒸馏水稀释为 0.4mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml、0.012 5mg/ml、0.006 25mg/ml的标准溶液。

(3)按以下操作表依次加入各试剂

(二) β -淀粉酶活性测定
1.样本前处理

称取约0.05g样本,加0.5ml蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取15分钟,每隔5分钟振荡1次,使其充分提取;6 000g,常温离心10 分钟,吸取上清液即为淀粉酶原液。

2.测定步骤

(1)酶标仪预热30分钟以上,调节波长至570nm。

(2)将淀粉标准液用蒸馏水稀释为 0.4mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml、0.012 5mg/ml、0.006 25mg/ml的标准溶液。

(3)按以下操作表依次加入各试剂

混匀后吸取100μl于96孔板中测定570nm下的吸光度,从左到右分别记为A1、A2、A3、A4、A5和A6,计算ΔAα=A5-(A1-A2),ΔA总=A5-(A3-A4),ΔA标准=A6-A7。

(三)胃蛋白酶酶活性测定
1.样本前处理

称取0.05g样本加入0.5ml提取液进行冰浴匀浆。10 000rpm 4℃离心10分钟,取上清液,置冰上待测。

2.测定步骤

(1)酶标仪预热30分钟以上,调节波长至275nm。

(2)按以下操作表依次加入各试剂

注意:对照管后加样本,而测定管先加样本。

二、结果

(一) α -淀粉酶

测定结果见表6-2-1和图6-2-1。

表6-2-1 α -淀粉酶测定结果(折算为1g饮片量)

图6-2-1 鸡内金、炒鸡内金饮片与标准汤剂的α-淀粉酶活性

(二) β -淀粉酶:

测定结果见表6-2-2、图6-2-2、图6-2-3。

表6-2-2 β -淀粉酶测定结果(折算为1g饮片量)

图6-2-2 鸡内金、炒鸡内金饮片与标准汤剂的β-淀粉酶活性

图6-2-3 鸡内金、炒鸡内金饮片与标准汤剂的β-淀粉酶活性(局部放大图)

(三)胃蛋白酶

测定结果见表6-2-3、图6-2-4。

表6-2-3 胃蛋白酶测定结果(折算为1g饮片量)

图6-2-4 鸡内金、炒鸡内金饮片与标准汤剂的胃蛋白酶活性

三、分析与讨论

结果显示,鸡内金、炒鸡内金饮片经煎煮后,其标准汤剂中的三种消化酶(β-淀粉酶、α-淀粉酶、胃蛋白酶)仍然保持一定的活性。鸡内金饮片经过炮制成炒鸡内金后,三种消化酶的活性普遍都有所下降,尤其是β-淀粉酶活性下降明显,而α-淀粉酶和胃蛋白酶的活性降低幅度相对较小,有部分批次还有稍微的增加,表明鸡内金经过砂烫后,α-淀粉酶和胃蛋白酶仍然保持较好的活性,这与此两种酶在干品状态下有较高的耐热性相符。对比标准汤剂测定结果可知,鸡内金标准汤剂和炒鸡内金标准汤剂中三种消化酶的活性相对于饮片都有大幅度的下降,表明三种消化酶在煎煮过程中的转移率较低;根据β-淀粉酶的测定结果可知,不同批次的鸡内金饮片β-淀粉酶的活性差异较大。 cejIjvnL2uFZo67+LfAXT56qAwKbsjBUdDfp/p2kEnOkXrBq77vnxz60nhY+RDMP

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