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为蝉科昆虫黑蚱 Cryptotympana pustulata Fabricius的若虫羽化时脱落的皮壳（图3-3-1），具有抗惊厥、镇静止痛、镇咳、祛痰、平喘等功效，经查阅大量文献，发现乙酰多巴胺二聚体是蝉蜕中具有活性且较具专属性的小分子化合物，经传统分离纯化方法分离其中的成分：取蝉蜕（3.5kg），粉碎，10倍重量85%甲醇超声30分钟，过滤，减压浓缩，经C 18 柱色谱分离，乙腈/0.1%甲酸水体系梯度洗脱，得到单体。经高分辨质谱（ESI-HRMS）检测，［M+H］ + ：387.154 88（理论值：387.155 61）（图 3-3-2），分子式为 C 20 H 22 N 2 O 6 。
分离得到的化合物用二甲基亚砜（DMSO）溶解后经核磁共振仪核磁共振检测其氢谱及碳谱，氢谱（ 1 H NMR）及碳谱（ 13 C NMR）数据归属及光谱图如图3-3-3、图3-3-4、表3-3-1：
图3-3-1 蝉蜕药材图片
图3-3-2 化合物质谱图
图3-3-3 化合物核磁共振氢谱
图3-3-4 化合物核磁共振碳谱
1 H NMR（500MHz，DMSO） δ 8.98（d， J = 8.8Hz，2H），8.86（d， J = 9.6Hz，1H），7.85（t， J = 5.5Hz，1H），6.82（d， J = 8.2Hz，1H），6.79（d， J = 2.1Hz，1H），6.78（d， J = 2.1Hz，1H），6.72（d， J = 6.0Hz，1H），6.71（d， J = 6.2Hz，1H），6.69（dd， J = 8.2，1.9Hz，1H），5.56（dd， J = 9.6，7.4Hz，1H），4.73（d， J = 7.3Hz，1H），3.22（dd， J = 13.6，6.7Hz，1H），2.60（t， J = 7.3Hz，2H），1.78（s，1H），1.77（s，1H）.
13 C NMR（126MHz，DMSO） δ 169.40，169.00，145.73，145.04，142.51，140.46，132.82，126.87，121.82，118.96，116.65，116.46，115.26，114.79，76.59，76.22，40.19，34.40，22.57.
表3-3-1 化合物核磁数据归属表
该核磁数据与文献报道一致，此外，在其NOESY图谱（图3-3-5）中可以发现，H-2与H-3有相关信号，说明，2位H与3位H空间靠近，处于同一平面，故该化合物为［ N -（2（（2S，3S）-2-acetamido-3-（3，4-dihydroxyphenyl）-2，3-dihydrobenzo［b］［1，4］dioxin-6-yl）ethyl）acetamide］（图3-3-6）。据文献报道，乙酰多巴胺二聚体具有抗炎和抗氧化活性，因此该成分可作为质量控制的指标之一。
图3-3-5 化合物NOESY图谱
图3-3-6 乙酰多巴胺二聚体结构图
为水蛭科动物蚂蟥 Whitmania pigra Whitman、水蛭 Hirudo nipponica Whitman或柳叶蚂蟥 Whitmania acranulata Whitman的干燥全体（图3-3-7），具有抗凝血、抗血栓、抗肿瘤、降血脂及抗炎作用等。水蛭的主要成分为大分子化合物，主含蛋白质，还含有糖脂类、蝶啶类、甾体类等小分子类化合物。根据文献报道，水蛭胺A、水蛭胺B、水蛭胺C为水蛭中具有抗缺氧活性的蝶啶类杂环化合物，为得到标准对照品，采用传统提取分离纯化手段对该三个成分进行提取分离：取水蛭（4kg），粉碎，20倍重量50%甲醇回流1小时，过滤，减压浓缩，经C 18 柱色谱分离，甲醇/0.1%三氟乙酸水体系梯度洗脱，得到化合物1。
图3-3-7 水蛭药材图片
化合物 1 经高分辨质谱（ESI-HRMS）检测，［M+H］ + ：327.021 79（理论值：327.022 17），分子式为C 11 H 11 N 4 O 4 S 2 （图3-3-8）。
图3-3-8 化合物1核磁共振质谱图
分离得到的化合物DMSO溶解后经核磁共振仪核磁共振检测其氢谱及碳谱，氢谱（ 1 H NMR）及碳谱（ 13 C NMR）数据归属及光谱图如图3-3-9、图3-3-10、表3-3-2。
图3-3-9 化合物1核磁共振氢谱
图3-3-10 化合物1核磁共振碳谱
1 H NMR（500MHz，DMSO） δ 11.97（s，1H），11.70（s，1H），5.31（t， J = 5.6Hz，1H），3.59（d， J = 5.4Hz，2H），2.56（s，3H）.
13 C NMR（126MHz，DMSO） δ 160.95，157.00，153.21，149.75，145.91，145.24，125.73，121.42，69.58，66.02，17.29.
表3-3-2 化合物1核磁数据归属表
核磁共振氢谱、碳谱数据结合文献数据，发现核磁数据与文献报道一致，最终确定化合物 1 为水蛭胺 B（水蛭乙素，hirudonucleodisulfide B）（图 3-3-11）。
图3-3-11 化合物2结构图
为保证水蛭（蚂蟥）配方颗粒的质量安全、有效、稳定与可控，对其原料，在《中国药典》2020年版水蛭药材与饮片标准的基础上，增加水蛭胺1（水蛭乙素，hirudonucleodisulfide B）含量测定及特征图谱项目，以健全质控标准。