第二节
韧皮部

2.1韧皮部汁液的收集及计算

葡萄树的架式同第一章（图1-1和图1-2）。

韧皮部汁液的收集：参照King and Zeevaart ^[8] 的方法，略作修改。准备30个刻度试管。晴天的上午8:00~10:00，在事先选取好（挂牌）的葡萄树上，从果穗以上第一个节点以上2 cm左右剪取新梢，用去离子水洗净茎切口并用脱脂棉吸干表面水分，将其插入装有15 mL 25 mmol/L的EDTA-Na ₂ 溶液的25 mL刻度试管中（每个试管插一个新梢，8月份生长旺盛期将EDTA-Na ₂ 体积增加到 25 mL），放置于遮光密室中保存24 h，称量。计算单位时间葡萄韧皮部渗出养分的量。重复3次。

计算：

V ——单位时间葡萄韧皮部渗出养分量，g/h;

V ₁ ——装有15 mL或25 mL EDTA-Na ₂ 溶液后的刻度试管质量，g;

V ₂ ——空刻度试管质量，g;

V ₃ ——培养24 h后刻度试管质量，g;

24——培养时间，h。

2.2新梢韧皮部的透射电镜制样步骤

前固定：植物组织用4%的戊二醛固定，固定时间长于6 h;

漂洗：用0.1M/L,pH6.8的磷酸缓冲液（PBS）进行冲洗，5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min各冲洗一次；

后固定：用1%锇酸固定2 h（需放入4℃冰箱中）;

漂洗：重复步骤2;

脱水：用30%、50%的乙醇各脱一次，每次15 min，之后放在70%的乙醇中过夜，再用80%、90%的乙醇各脱一次，每次 20 min，然后用 100%的乙醇脱水两次，每次30 min，最后用100%的丙酮脱水两次，每次30 min;

渗透：胶∶丙酮=1∶3，渗透2 h；胶∶丙酮=1∶1，渗透5 h；胶∶丙酮=3∶1，渗透12 h（即封上封口膜放入摇床过夜）；然后，再用纯胶渗透两次，每次24 h;

包埋：放入30℃的烘箱进行烘干；

调换温度：将温度由30℃调换成60℃再烘24 h;

抠出胶粒，样品制备完毕。上透射电镜观察。

合阳当年的降雨情况如表4-1（数据来源于葡萄园的气象站）。