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①学会双目生物显微镜的使用和保养。
②能正确识别真菌的营养体和繁殖体的形态类型。
③学会用临时制片法观察真菌的病组织和病原形态。
④能正确识别鞭毛菌亚门、接合菌亚门、子囊菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门中常见的经济林病原菌。
经济林木病害微生物病原的新鲜材料、实物标本、各种病原微生物的玻片标本、照片及多媒体课件。
制片工具、双目生物显微镜、放大镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸、解剖刀、刀片、挑针、镊子、蒸馏水、纱布、搪瓷盘等。
显微镜的类型很多，虽有单目显微镜、双目显微镜、自然光源显微镜、电光源显微镜之分，但其基本结构相同，都是由镜座、镜臂、镜体、目镜、物镜、调焦螺旋、紧固螺丝和载物台等组成，其中3个物镜镜头分别为4倍、10倍、40倍（油镜100倍）。常用的有XSP-3CA显微镜。
①拿取或移动显微镜。用右手把持镜臂，左手托住镜座拿取或移动，勿使其震动。
②放置。显微镜应放在身体左前方的平面操作台上。镜座距台边3～4 cm，镜身倾斜度不大。
③检查。用前应检查部件是否完整，镜面是否清洁，若有问题需及时调换或修理。
④调光。先用低倍镜调光。若用自然光源，光线强可用平面反光镜，光线弱可用凹面反光镜。检查不染色标本时宜用弱光，可将聚光器降低或光圈缩小；检查染色体标本时宜用强光，可将聚光器升高或光圈放大。
⑤观察标本。将玻片标本放在载物台上，用弹簧夹固定，先用低倍镜找出适宜视野，然后转换为高倍镜观察。要求姿势端正，两眼同时睁开，左眼观察，右眼绘图。
⑥用后整理。显微镜用后应提高镜筒，取出标本，将镜头旋转呈“八”字形，放下镜筒，检查无误后放入箱内锁好。
①显微镜必须置于干燥、无灰尘、无酸碱蒸气的地方，特别应做好防潮、防尘、防霉、防腐蚀的保养工作。
②轻拿轻放，按规程操作。使用后清洁镜体，按要求放入镜箱内。
③透镜表面有灰尘时，切勿用手擦，可用吹气球吹，或用擦镜纸轻轻擦。透镜表面有污垢时，可用脱脂棉蘸少许乙醚与酒精的混合液或二甲苯轻轻擦净。
（1）真菌营养体的观察
分别挑取腐霉菌（或黑根霉菌）和炭疽菌菌丝少许制成待检玻片，镜下观察菌丝体，比较无隔菌丝和有隔菌丝的形态特征。
植物病原真菌的营养体
（2）真菌菌丝体变态类型观察
菌核、菌索、菌膜和子座均属菌丝的变形体。观察苗木茎腐病的菌核、伞菌的菌索、腐朽木材上的菌膜和国槐腐烂病或竹赤团子病标本上的子座（需做待检切片），各有何特征。
（1）无性孢子的观察
分别从炭疽菌和黑根霉的纯培养菌落中，以及白粉病的菌丝体上挑取少许孢子、菌丝和小球状物，制成待检玻片，依次观察厚垣孢子、孢囊孢子、分生孢子的形态特征。
（2）有性孢子的观察
挑取腐霉菌水培材料中的菌丝体，制成待检玻片观察藏卵器内的卵孢子；观察黑根霉接合孢子玻片标本；观察盘菌的切片标本，子囊为一长筒形囊状物，排列成1层，每个子囊中有8个椭圆形的孢子；观察伞菌子实体的切片标本，子实层中有棒状的担子，每个担子顶端有4个小柄，每个小柄上生有1个担孢子。
挑取白粉菌的闭囊壳制成待检玻片镜检：闭囊壳呈球形，无孔口，内藏子囊和子囊孢子。
在显微镜下观察国槐腐烂病有性型切片标本：子囊壳球形或扁球形，颈细长，端部有孔口，子囊壳内含棒状子囊，每个子囊内有8个子囊孢子。
观察林木上腐生的子囊盘纵剖面：外面的保护组织张开呈盘状，盘上有1层子实层，排列有若干子囊。
观察腐朽菌的子实体：子实体的下方有许多微孔或木质的褶片，在微孔的内壁上有担子和担孢子。
植物病原真菌分类
观察各供试标本，辨别它们各属于什么亚门。
（1）腐霉菌
丝状、裂瓣状、球状或卵形的孢子囊着生在菌丝上，孢子囊顶生或间生，无特殊分化的孢囊梗。游动孢子肾脏形，凹处有2根鞭毛。卵孢子厚壁，球形，萌发形成芽管和孢子囊。
（2）根霉菌
菌丝分化出匍匐丝和假根，孢囊梗单生或丛生，与假根对生，顶端着生球状孢子囊，孢子囊成熟破裂后散放大量孢囊孢子。
（3）白粉菌
菌丝体无色透明，大多生长在林木表面，菌丝体上形成分生孢子梗，上面形成单个或成串的分生孢子。子囊果为闭囊壳，上面长有球针状或叉丝状或钩丝状或菌丝状的附属丝。闭囊壳内有1个或多个子囊，呈卵形、椭圆形或圆筒形，其中有2～8个子囊孢子。
（4）煤炱菌
菌丝表生，暗褐色，多呈念珠状或结合成束；子囊座表生，圆形或长烧瓶状；分生孢子类型较多，有的分生孢子器也呈长颈烧瓶状。引起的病害似被一层黑色煤层覆盖，故称煤污病。
（5）黑腐皮壳菌
子座发达，埋在基物中，圆锥形，嘴部凸出。子囊壳埋生在子座内，有长茎伸出子座。子囊孢子单细胞，无色，香蕉形。其常引起各种花木的腐烂病。
（6）核盘菌
菌核块状或不规则形，菌核萌发可产生漏斗状子囊盘。子囊棍棒形排列成栅状，子囊孢子单细胞，椭圆形，无色。引起林木菌核病。
（7）胶锈菌
冬孢子双细胞，浅黄色至暗褐色，具有长柄。冬孢子柄无色，遇水膨胀胶化。冬孢子堆舌状或垫状，遇水胶化膨大，近黄色至深褐色。锈孢子器长管状，锈孢子串生，近球形，黄褐色。引起林木锈病。
（8）丝核菌
不产生分生孢子，只产生不孕菌丝及菌核。菌核较少，形状多样，菌核表面粗糙，呈褐色至黑色，结构疏松，生于菌丝中，彼此间由菌丝形成的丝状体相连。菌丝在分枝处多成直角，并有显著缢缩现象。引起幼苗猝倒或立枯。
（9）镰刀菌
分生孢子梗无色，生于由菌丝体形成的子座上。分生孢子有两种：大型孢子多细胞，镰刀形；小型孢子单细胞，少数双细胞，卵圆形或椭圆形，单生或串生。引起幼苗猝倒或立枯。
（10）炭疽菌
分生孢子盘平坦，上面敞开，下面略埋在基质内；分生孢子自茁壮的梗上顶生。分生孢子单细胞，无色，长椭圆形或弯月形。
（11）壳囊孢菌
分生孢子器着生在瘤状或球状子座组织内，分生孢子器内腔不规则地分为数室。分生孢子香蕉形。引起花木腐烂病。
①将采集到的新鲜真菌病害标本放在胸前桌上，选好病原体。
②取一载玻片用纱布擦净横放在胸前桌上，在载玻片中央滴1滴蒸馏水。
经济林木其他病原生物形态观察
③将解剖针（或解剖刀）尖蘸点蒸馏水，右手持解剖针（或解剖刀）向一个方向挑取或刮取病原体。
④将挑取的病原体移入载玻片的水滴中，如病原体带色，载玻片下应放白纸以便观察。
⑤用镊子或手指取一干净载玻片，先将一侧与载玻片上的水滴接触，然后慢慢落下，以防产生气泡。
⑥将临时制片放在显微镜载物台上观察。
①选取病部，切成3～5小块，若组织坚硬，可先以水浸软再切。
②将病组织小块置于小木片上，左手食指拧紧材料，右手持刀片像切面条那样，把材料切成薄片。
还可将病组织夹入通心草的切缝中，然后用左手拇指和食指捏紧通心草，右手持刀片，从左向右把材料切成薄片，并移入培养皿中的蒸馏水内后再选薄片标本制片镜检。
③在载玻片上滴1滴蒸馏水。
④将切好的病组织薄片放入蒸馏水滴中，从一侧放盖玻片。
⑤置于显微镜下观察。
注意事项：
用通心草夹病组织切片时要注意控制用刀方向以防切手。
病害种类繁多，各类病害标本的采集方法不同。
（1）叶部病害
一般将病叶连同小枝一同采下，很容易缩卷曲的叶子，应随采随压制，或用小塑料袋装好，封上口，或用湿布包好。对孢子容易散落的锈菌、黑粉菌，最好用纸包好，先放进标本箱，以免污染其他病害标本。
（2）果实病害
一般病果可采摘后放入标本箱中，柔软多汁或败坏的果实宜用纸包裹放入标本箱中。
（3）枝干病害
木质化枝条不易损坏，采取比较方便。枝干过于粗大，可锯取一部分。寄生性种子植物应连同寄主一同采集。如果草体长在枝干上，则连同寄主或寄主的一部分一同采下。肉质蕈体采集后不易保存，应用远红外烘器烘干或及时观察、绘图、拍照。
（4）根部病害
有的病原菌由根部侵入，应把根部挖出来切成一段，放入标本箱中。
采集的标本要随即挂标签，以免错乱。标签上注明采集地点、日期、寄主、采集人、采集号等。
（1）干燥标本的制作和保存
①叶和茎标本可用标本夹压制，标本纸要勤换勤翻；最初3～4天，每日换纸1～2次，以后2～3天换纸一次直至全干，压制后的标本应不变色，不好霉。
②幼嫩多汁的花和幼苗，可夹在两层脱脂棉中压制，也可在30～45℃下加温烘干。
③肉质蕈类和子囊菌不能压制，可放在烘箱中烘干或用干燥箱干燥。
④木质类蕈类和木质化枝条可以阴干。
标本可装入纸袋、标本签中保存，标本柜要清洁干燥，防止标本生霉和虫蛀。
（2）浸渍标本的制作和保存
为了保持标本的形状和色泽，防止其腐烂，可采用浸渍法制作和保存标本。
①防腐浸渍液：福尔马林 50 mL；酒精（75%）300 mL；水2 000 mL。
②保存绿色浸渍液：将标本放在5%硫酸铜溶液中，浸6～24 h，取出后用清水漂洗数次，然后保存在亚硫酸溶液（含5%～6% SO2的亚硫酸溶液15 mL加水1 000 mL）中，标本瓶用蜡密封。
注意事项：
①标本要有典型性。病症是鉴定真菌、细菌等病害的重要根据，采集的标本应具有典型症状。真菌病害标本应带有成熟子实体。
②标本要完整。完整的病害标本应包括不同时期、不同部位的典型症状。有些病害在叶、果和枝梢等部位表现出不同症状，因此都应采集，真菌病害的无性阶段和有性阶段应在不同时期进行采集。
③对不认识的寄主，应注意采上枝、叶、花、果等部分以便鉴定。
本任务评价表如表1-9所示。
表1-9 “病害症状类型的识别”任务评价表
