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在前期研究的基础上，本实验选择白首乌二苯酮、去酰基萝藦苷元、青阳参苷元3种主要成分作为PK makers（东莨菪内酯无法绘制完整药时曲线），开展其在大鼠体内的药代动力学研究，并通过分析获得其药动学参数，以揭示3种成分在大鼠体内的经时变化规律。同时，通过比较白首乌二苯酮等3种成分的药动学差异，为隔山消的深入开发和利用提供参考依据。
Acquity UPLC BEH C 18 色谱柱（2.1mm×50mm，1.7μm）；Waters Van Guard BEH C 18 保护柱（2.1mm×5mm，1.7μm）；流动相为0.1%甲酸水溶液（A）- 0.1%甲酸乙腈（B），流速0.35mL/min；柱温40℃；进样量2μL。液相梯度洗脱条件见表3-15。
表3-15 色谱条件
采用电喷雾离子源（ESI）；毛细管电压1kV；离子源温度120℃；去溶剂气（氮气）流速1000L/h，去溶剂气温度400℃；碰撞气（氩气）150L/h；扫描方式为多反应离子监测模式（MRM）。白首乌二苯酮等3种成分及内标的监测离子见表3-16。
表3-16 白首乌二苯酮等3个指标成分及内标的质谱条件
取6只SPF级雄性SD大鼠，体质量为230～250g。单次灌胃给予隔山消提取物溶液10mL/kg，于给药后0.033、0.083、0.16、0.25、0.33、0.5、0.75、1、2、4、8、12、24、48h经尾静脉取血约0.3mL，置于涂有肝素的离心管中，4500rpm离心15min，分离血浆，置于-20℃冰箱保存，备用。
取大鼠血浆100µL置于1.5mL离心管中，加入1%甲酸水10µL，涡混，加入201.1ng/mL葛根素10µL，加入400µL乙腈沉淀蛋白，涡混5min，超声10min，14000rpm离心10min，转移上清液用氮吹仪在37℃下吹干。吹干样品加入150µL初始流动相溶解，超声10min，14000rpm离心10min，取上清液UPLC-MS/MS进样分析。
采用Phoenix WinNonLin 8.2数据处理软件中的非房室模型（NCA）分析方法拟合各药动学参数。采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，实验结果用
±SD表示，用独立样本t检验进行组间比较，
P
＜0.05为有统计学差异。
应用建立的UPLC-MS/MS分析方法测定大鼠口服隔山消提取物后各时间点的血药浓度，得到的数据见表3-17和表3-18，平均血药浓度-时间曲线见图3-12。采用Phoenix WinNonLin 8.2软件计算药动学参数，并对药物在大鼠体内的动力学过程进行非房室模型拟合，其相关药动参数见表3-17和表3-18。
灌胃给予隔山消提取物后，大鼠血浆中白首乌二苯酮在15min左右达到最大血药浓度，去酰基萝藦苷元在30min左右达到最大血药浓度，青阳参苷元在15min左右达到最大血药浓度。
表3-17 白首乌二苯酮等3个成分的血药浓度测定结果（
±
s
，
n
=6）
表3-18 大鼠口服隔山消提取物后体内的主要药动学参数（
±
s
，
n
=6）
图3-12 大鼠口服隔山消提取物后的
C
-
t
药时曲线（
±
s
，
n
=6）
A.白首乌二苯酮；B.去酰基萝藦苷元；C.青阳参苷元。
由于血浆样品中内源性杂质多、样品浓度低、样品量受限等因素，因此血浆样品的处理方法在药动学的研究中至关重要。在样品制备方面，实验考察了液-液萃取（乙酸乙酯、正丁醇）和有机溶剂（甲醇、乙腈）蛋白质沉淀等方法对含药血浆进行前处理，然后进样检测，结果显示，经乙腈沉淀法处理的血浆样品能检测到的成分最多，峰形较好且响应高，故采用乙腈沉淀法作为本实验样品的处理方法。此外，由于待测成分为苯乙酮、C 21 甾体和酚酸类化合物，因其主要为极性较大的弱酸性化合物，在酸性条件下处于非解离状态，有利于被测成分的提取，因此本实验对在血浆样品处理中是否加甲酸及加入甲酸的比例进行考察。结果显示，加入甲酸后明显有利于被测成分的提取，且加入1%的甲酸水后各成分响应较好，因而最终确定血浆样品的处理方法为先用1%的甲酸酸化，再加入乙腈进行蛋白沉淀处理，并及时涡混，防止形成的蛋白包裹待测成分。
隔山消提取物中白首乌二苯酮、去酰基萝藦苷元、青阳参苷元3种成分在SD大鼠体内达到最大血药浓度的时间（ t max ）为0.25～0.42h，表明这三种成分在大鼠体内的吸收速率较快。其中白首乌二苯酮的达峰时间（ t max ）为0.26±0.03h，与牛景梅等的报道基本一致， CL ［0.36±0.03 L/（h·kg）］最低，表明其在大鼠体内的消除最慢。青阳参苷元的 C max （611.37±53.33µg/L）、 AUC 0→t ［986.02±149.76（µg·h）/L］、 AUC 0→∞ ［1205.2±453.77（µg·h）/L］明显低于白首乌二苯酮和去酰基萝藦苷元，而其 CL ［8.73±2.11 L/（h·kg）］、 MRT 0→t （11.05±3.33h）、 MRT 0→∞ （18.18±9.66h）明显高于白首乌二苯酮和去酰基萝藦苷元，说明相较于其他两种成分，青阳参苷元在大鼠体内的吸收程度最低，消除较快。