第三节
组织分布研究

通过对隔山消吸收特性的研究已经了解了丁香酸、东莨菪内酯、白首乌二苯酮、告达亭、青阳参苷元和去酰基萝藦苷元的吸收特性，其中丁香酸、告达亭在血中含量较低或可能不入血。因此，本部分实验将通过建立的UPLC-MS/MS分析方法测定隔山消提取物灌胃给药后东莨菪内酯、白首乌二苯酮、青阳参苷元和去酰基萝藦苷元4种成分在大鼠体内心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠和胃组织中的药物含量，考察4种成分的分布特点，为隔山消的归经研究奠定基础。

一、色谱条件

Acquity UPLC BEH C 18 色谱柱（2.1mm×50mm，1.7μm）；Waters Van Guard BEH C 18 保护柱（2.1mm×5mm，1.7μm）；流动相为0.2%甲酸水溶液（A）-0.2%甲酸乙腈（B）；柱温40℃；进样体积为1μL。梯度洗脱条件见表3-8。

二、质谱条件

电喷雾离子源（ESI），毛细管电压1kV，离子源温度120℃，去溶剂气（氮气）流速1000L/h，去溶剂气温度400℃，碰撞气（氩气）150L/h；扫描方式为多反应离子监测（MRM）模式，各成分监测离子见表3-9。

三、组织样品的收集

随机选取SD大鼠，实验前不禁水，禁食12h。按照0.1g/100g（相当于生药量16.13g/100g）的剂量灌胃隔山消提取物，每个时间点6只大鼠，于给药前及给药后0.17h、0.5h、1h、2h、4h处死大鼠并解剖取出各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠和胃组织，用生理盐水洗净组织表面血液，以及小肠、胃内的内容物，用滤纸吸干液体，所有组织均放在-80℃冰箱保存，备用。临用前解冻并称取各组织样品，加生理盐水（胃和小肠 v ∶ w = 4∶1；其他组织 v ∶ w = 2∶1），剪刀剪碎并用组织匀浆机研磨得到各组织匀浆液。

四、样品处理方法

取上述各组织匀浆液300μL（胃及小肠组织稀释3倍后取300μL）置于2mL离心管中，分别加入20μL葛根素（201.10ng/mL）、30μL 1%的甲酸水，涡混3min，再加入1.2mL乙腈沉淀蛋白，涡混5min，超声10min，-20℃冰箱中冷冻30min后，14000rpm离心10min，转移上清液用氮吹仪在37℃下吹干。干燥残留物加入200µL 50%甲醇水，超声复溶，14000rpm离心10min，上清液于UPLC-MS/MS进样分析。

五、组织分布数据处理

运用Phoenix WinNonLin 8.2数据处理软件中的非房室模型（NCA）分析方法拟合青阳参苷元等4种成分在组织中的 AUC 0→t 参数。实验结果用 ±SD表示，用独立样本t检验进行组间比较， P ＜0.05为有统计学意义。

六、各成分在大鼠体内的组织分布情况

对大鼠口服隔山消提取物后在各时间点心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、脑组织中的分布情况应用已建立的UPLC-ESI-MS/MS分析方法测定，见图3-4～3-7和表3-10～3-13，结果以每1g组织中含有被测成分的量（ng）表示，采用Phoenix WinNonLin 8.2软件计算各成分在各组织中的 AUC 0→t 参数，见图3-8。

（一）东莨菪内酯在大鼠体内的组织分布情况

大鼠在口服隔山消提取物后东莨菪内酯在各组织中的分布情况见图3-4、表3-10和图3-8。结果显示，灌胃隔山消提取物后，10～30min时东莨菪内酯在各组织中含量即达到峰值，提示东莨菪内酯在给药后能迅速分布到各组织中；在给药4h后，各组织中药物基本清除完毕；东莨菪内酯在胃组织中的含量最高，其次是小肠组织，心组织中含量最低，提示其和胃组织的亲和力较高，胃组织可能是其主要的靶器官。东莨菪内酯的结构包含内酯及甲氧基，脂溶性较高，应易透过血脑屏障，但脑组织中未检出，可能是因为东莨菪内酯本身含量较低，且具有广泛的代谢途径，而口服给药生物利用度低，因而在脑组织中未检测到。

（二）白首乌二苯酮在大鼠体内的组织分布情况

大鼠在口服隔山消提取物后白首乌二苯酮在各组织中的分布情况见图3-5、表3-11和图3-8。结果显示，灌胃隔山消提取物后，0.17～1h时白首乌二苯酮在各组织中含量即达到峰值，提示白首乌二苯酮在给药后能迅速分布到各组织中；给药4h后，白首乌二苯酮在各组织中基本清除完毕；白首乌二苯酮在肺组织中的含量最高，在心组织中含量最低，提示其和肺组织的亲和力较高。

（三）青阳参苷元在大鼠体内的组织分布情况

大鼠在口服隔山消提取物后青阳参苷元在各组织中的分布情况见图3-6、表3-12和图3-8。结果显示，灌胃隔山消提取物后，在10～30min时青阳参苷元在各组织中含量即达到峰值，提示给药后青阳参苷元能迅速分布到各组织中；给药4h后，青阳参苷元在各组织中基本清除完毕；青阳参苷元在小肠、胃、肝组织中的含量最高，在脑组织中含量最低，提示其和小肠、胃及肝组织的亲和力较高，小肠、胃组织可能是其主要的靶器官。

（四）去酰基萝藦苷元在大鼠体内的组织分布情况

大鼠在口服隔山消提取物后去酰基萝藦苷元在各组织中的分布情况见图3-7、表3-13和图3-8。结果显示，灌胃隔山消提取物后，10～30min时去酰基萝藦苷元在各组织中含量即达到峰值，提示去酰基萝藦苷元在给药后能迅速分布到各组织中；给药4h后，去酰基萝藦苷元在各组织中基本清除完毕。去酰基萝藦苷元在胃及小肠组织中的含量最高，提示其和胃、小肠组织的亲和力较高，胃及小肠组织可能是其主要的靶器官；其次是肝和肾组织，提示其可能主要通过尿液的方式排出体外；脑组织中含量最低。

七、讨论

药物吸收入血后，需随血液循环系统分布到相应的靶细胞、靶器官、靶组织以发挥药效，可见药物分布是药效产生的一个关键过程，考察药物有效成分在体内的组织分布至关重要。组织分布的规律有助于揭示药物在体内的分布规律和药物作用的靶向性，是指导临床应用的重要环节，也是阐明中药归经的必要途径。此外，组织分布对药物的毒理学研究、评价药物的长期毒性、新药的安全性评价等均具有重要的意义。

大鼠的组织分布情况结果显示，东莨菪内酯在各组织中4h的 AUC 0→t 从高到低依次为：胃＞小肠＞肾＞肝＞肺≈脾＞心。白花蛇舌草中东莨菪内酯的组织分布结果与本研究相似。白首乌二苯酮在各组织中4h的 AUC 0→t 从高到低依次为：肺＞脾＞肾＞肝＞胃≈脑＞小肠＞心。青阳参苷元在各组织中4h的 AUC 0→t 从高到低依次为：小肠＞肝＞胃＞肾＞心＞肺＞脾＞脑。去酰基萝藦苷元在各组织中4h的 AUC 0→t 从高到低依次为：胃＞小肠＞肝＞肾＞心≈脾＞肺＞脑。可见，除白首乌二苯酮外，其余3种成分主要分布于胃、小肠组织，提示胃肠组织是隔山消的主要靶器官。

FD的重要发病因素之一是胃肠运动障碍。胃肠内分泌细胞分泌的激素紊乱和中枢肠神经系统释放的神经递质调节异常，均可严重影响胃肠道的运动功能。GAS和MTL均属于胃肠激素，GAS主要由G细胞分泌，大多存在于胃窦、胃底及十二指肠近端黏膜，受迷走神经兴奋性调节，能促进盐酸、胃蛋白酶原分泌，保护胃肠黏膜，增强胃肠道的运动能力；MTL由Mo细胞分泌，可直接作用于胃平滑肌的特异性受体，释放乙酰胆碱，促进胃强力收缩和小肠分节运动，促进胃排空。有研究发现FD患者的这两项胃肠动力激素均较低。青阳参苷元等成分在大鼠的胃及小肠组织中的含量较高，提示胃肠组织可能是隔山消抗FD的主要靶器官，其通过降低胃肠激素GAS和MTL含量发挥抗FD作用。 1yEBERkwzt44kWXt70PR75lNMhiym5Nv5cRfFxbJmxbQy/Gf60Nk+drTQrFLuk1G