七、DNA分子杂交技术

核酸杂交（nucleic acid hybridization）指序列互补单链的DNA和DNA、DNA和RNA、RNA和RNA，根据碱基配对原则，只要不同来源的核酸单链彼此之间有一定程度的互补序列就可以形成杂交双链。核酸杂交过程中，需将核酸片段从凝胶转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上进行固定，因此核酸杂交技术又称为核酸印迹技术。在核酸杂交中需要探针（probe），即能够与靶分子核酸按碱基互补原则特异性相互作用的一段已知序列的寡核苷酸或核酸。在探针上需要共价结合一些标记物来跟踪检测探针的位置，从而确定核酸靶分子所在的位置。

Southern杂交（Southern blot）是1975年由Southern创建的，常被用来进行基因组DNA特异序列的定位或目标DNA检测。Southern杂交一般过程是：①利用限制性内切酶消化基因组DNA，用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，利用NaOH溶液使其变性；②将凝胶上的DNA转移到薄膜上，从而使变性的DNA吸附并固定在薄膜上；③取下薄膜后，将薄膜与标记的探针进行杂交；④漂洗去未结合和非特异性结合的探针，放射自显影或酶反应显色，从而检测和定位特定的DNA分子（图2-9）。Southern杂交常用于鉴定外源基因是否整合到受体基因组中，并确定整合的拷贝数以及在基因组中整合的位置，同时也可用于中药的分子鉴定。