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【实验目的】
1.观察并比较肝素、双香豆素、枸橼酸钠的抗凝作用特点。
2.掌握肝素的药理作用，学会使用肝素的抗凝作用。
【实验原理】
肝素在体内、体外均具有强大的抗凝作用，能通过激活抗凝血酶Ⅲ来发挥作用；口服给药无效，须注射给药。双香豆素为口服的体内抗凝药，其结构与维生素K相似，能在肝脏中竞争性抑制维生素K，从而起到抗凝血的作用。枸橼酸钠为体外抗凝药，能与血液中的Ca 2+ 形成难解离的可溶性络合物，使血中Ca 2+ 浓度降低，从而起到抗凝作用；由于大剂量注射可干扰体内Ca 2+ 浓度，故不用于体内抗凝。
【实验动物】
小鼠（约20g）、家兔。
【实验条件】
0.2%肝素钠溶液、0.1%双香豆素溶液、生理盐水、0.25%肝素钠溶液、3.8%枸橼酸钠溶液、0.1%氯化钠溶液。
电子秤、1mL注射器、5号针头、烧杯、棉球、75%乙醇、小鼠灌胃器、毛细玻璃管（1mm内径）、试管、1mL吸管。
【实验方法】
（1）取小鼠3只，标记、称重。
（2）给药：甲鼠腹腔注射0.2%肝素钠溶液0.5mL，乙鼠腹腔注射生理盐水0.5mL做对照，丙鼠于实验前3天以0.1%双香豆素溶液0.5mL/10g灌胃，实验时腹腔可注射等量生理盐水（甲乙鼠也可在实验前3天灌胃等量生理盐水）。
（3）取血并记录凝血时间：给药后20分钟分别以毛细玻璃管眼眶取血，3分钟后，折断毛细玻璃管一小段，以后每隔30秒折断一次，当折断时看到有黏丝状物出现，即表示血液凝固，分别记录凝血时间。
（1）取清洁干燥试管4支，编号。
（2）分别在①号试管加入0.25%肝素钠溶液；②号试管加入0.1%双香豆素溶液；③号试管加入3.8%枸橼酸钠溶液；④号试管加入生理盐水，各0.25mL。
（3）从家兔耳缘静脉抽取血液，每试管0.5～1mL，使其充分混合。
（4）每隔30秒倾倒一次，观察各个试管内血液变化。
（5）记录各个试管凝血时间。
【实验结果】
表1-7-6-1 肝素体内抗凝实验结果
表1-7-6-2 肝素体外抗凝实验结果
【注意事项】
1.眼眶采血难度较大，注意固定小鼠头部的手指，以免被咬伤。
2.向试管中加入血液或药液时，勿滴落到试管壁上。