下载掌阅APP，畅读海量书库
立即打开
纸色谱（纸上层析）属于分配色谱的一种，主要用于含多官能团或高极性化合物如糖、氨基酸等的分析分离。通常用特制的滤纸作为固定相——水的支持剂，流动相则是含有一定比例水的有机溶剂，通常称为展开剂。
纸色谱装置如图3-8所示，其操作是先将色谱滤纸在展开溶剂的蒸气中放置过夜，在滤纸一端2cm左右处用铅笔画好起始线，然后将要分离的样品溶液用毛细管点在起始线上，待样品溶剂挥发后，将滤纸的另一端悬挂在层析缸的玻璃勾上，使滤纸下端与展开剂接触，展开剂由于毛细作用沿纸条上升，当展开剂前沿接近滤纸上端时，将滤纸取出，记下溶剂的前沿位置，晾干。若被分离物中各组分是有色的，则滤纸条上会有各种颜色的斑点显出，如图3-9所示。分离无色的混合物时，通常将展开后的滤纸风干后，置于紫外灯下观察是否有荧光，或者根据化合物的性质，喷上显色剂，观察斑点位置，它与薄层色谱显色方法相似。纸色谱比移值R f 的计算与薄层色谱的相同。
利用氨基酸在特定展开剂中分配系数的不同，采用不同样品的试样在同一张色谱纸上进行展开。在相同条件下，经展开剂展开，比较它们的R f 值，以达到分离和鉴定氨基酸的目的。
图3-10 色谱纸点样图
（1）准备色谱纸。取新华一号滤纸，用干净小刀裁成5cm×14cm的纸条作为色谱纸，在离底边1.5cm处用铅笔画一直线作为始线，在起始线上点a、b、c三个点，各点之间的距离为1cm，a、c两点分别离色谱纸边为1.5cm，在起始线7cm处画一直线作为溶剂前沿线（见图3-10）。
（2）点样。分别用0.5mm的毛细管，在色谱纸的a点上点0.5%甘氨酸水溶液，在b点上点0.5%谷氨酸水溶液，在c点上点0.5%亮氨酸水溶液，样点的直径约2mm。
（3）展开。将30mL展开剂（正丁醇∶甲酸∶水=5∶3∶2）倒入层析缸中，盖上盖子，饱和20min后，再将点好样品的色谱纸上端用回形针别住，悬挂在层析缸盖的钩上，使色谱纸的底边浸入展开剂约5mm，如图3-8所示。展开剂到达前沿线后，展开完毕，取出色谱纸，晾干或红外灯下烘干。
（4）显色。将烘干的色谱纸，用喷雾器喷洒显色剂（0.1%茚三酮乙醇溶液），再到红外灯下烘到显色为止。
（5）计算各氨基酸的R f 值。用笔画出斑点，找出斑点的中心，并量出起始线至斑点中心的距离，依薄层色谱中的公式计算各氨基酸的Rf值。
（1）预习实验原理和操作步骤。
（2）请利用互联网查出下列主要药品的物理常数，并写到预习报告中。
（3）滤纸使用前，应在烘箱中干燥，具体方法为100℃的温度下，烘干1～2h；否则会产生拖尾现象。
（4）画线时只能使用铅笔，不能使用其他笔。其他笔的颜色为有机染料，在有机溶剂中染料溶解，颜色会产生干扰。
（5）无论是画线还是点样，不能用手接触层析纸前沿线以下的任何部位，因为手指上有相当量的氨基酸，并足以在本实验方法中检出干扰实验。
（6）纸色谱必须在密闭容器中展开。加入展开剂后，必须等20min左右，使层析缸内形成展开剂的饱和蒸汽。
（7）显色剂喷洒应均匀，喷洒的量应适当，不能流淌。
（8）喷有显色剂的色谱纸，在烘干时应注意温度的控制。温度太高，不但氨基酸会产生颜色，茚三酮也会产生颜色干扰实验现象。
（9）R f 值随被分离化合物的结构、固定相与流动相的性质、温度以及纸的质量等因素的变化而变化。当温度、滤纸等实验条件固定时，比移值就是一个特有的常数，因而可作为定性分析的依据。