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第三节
艾叶多糖成分和分析方法

植物多糖是由10 个以上的单糖组成糖苷键连接聚合而成的高分子化合物。艾叶多糖最主要的生物活性是调节免疫,包括活化补体、增强巨噬细胞的功能以及CD4+、CD8+和T淋巴细胞的数量等,并利用其免疫增强作用发挥抗肿瘤、抑制腹泻等作用。已经报道的关于艾叶多糖的其他功能有抗氧化、抑菌、降血糖等。

一 艾叶多糖的分离

艾叶多糖分离的一般过程是:①乙醇回流去除叶绿素;②水提醇沉得到粗多糖成分;③去除蛋白和色素;④离子交换柱分离不同的艾叶多糖组分;⑤凝胶色谱柱进一步分离得到均一多糖组分。

为了获得更多的艾叶粗多糖成分,研究人员对传统的水提醇沉法进行了改进。利用响应面分析法优化水提醇沉的参数,获得最佳提取条件为料水比1∶18,浸提温度97℃,浸提时间1.2小时,浸提3次,提取率可达1.521%。超声波和微波也有利于提高艾叶粗多糖的得率。超声波提取35 分钟、温度70℃、水料比40∶1的条件下野艾草多糖平均得率为6.44%。设定微波功率400W,水料比20∶1,85℃下浸提20分钟,艾叶多糖的得率为2.74%。在超声波提取的基础上,使用2%纤维素酶处理艾叶2小时,可进一步将超声波提取的得率提高56.75%。

艾叶粗多糖可经过三氯乙酸法或sevag法脱蛋白,使用活性炭吸附或者ADS-7大孔吸附树脂去除色素,再次醇沉后得到艾叶精制多糖。暨南大学生物医药研究开发基地在研究中发现ADS-7大孔吸附树脂可同时进行脱蛋白和脱色处理,脱蛋白率为84.58%,脱色率平均值为90%,多糖保留率为38.81%。

二 艾叶多糖的结构分析

艾叶多糖是高分子化合物的混合物,通过色谱柱的分离纯化可形成分子量在一定范围的均一组分。对艾叶多糖的结构分析主要包括单糖组分分析、分子量大小测定、红外光谱分析和核磁共振光谱分析等。

包小丽等利用DEAE-sepharose fast flow离子交换柱在不同浓度NaCl溶液的洗脱下,得到艾叶多糖的0.2M NaCl溶液的洗脱组分,命名为FAAP-02。通过高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定FAAP-02 的平均分子量为5 169Da。单糖组分分析显示艾叶多糖FAAP-02中主要的单糖组成是N-D-葡萄糖胺,其次为葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和核糖。红外光谱和核磁共振分析共同表明FAAP-02 是以吡喃型半乳糖为主链,呋喃型阿拉伯糖为侧链,同时存在α-和β-糖苷键的多糖。

吴桂花以DEAE-52纤维柱分离艾叶多糖,不同NaCl溶液洗脱得到4个组分,选取水洗脱组分和0.2M NaCl组分命名为WAYSP00 和WAYSP02,高效凝胶过滤色谱法得到WAYSP00平均分子量为5 220Da,WAYSP02平均分子量为2 636Da。核磁共振波谱和红外光谱分析共同证明WAYSP00和WAYSP02都为β-糖苷键链接的吡喃糖。

目前的研究结果显示,艾叶多糖是结构复杂的大分子杂多糖,目前对艾叶多糖结构的表征信息还不够充分,艾叶多糖中是否存在重复的单元结构,糖苷键的链接方式,以及扫描电镜或原子力显微镜下的形貌特征都需要进一步的研究。 rskybVcEqv7bKzzVN2H6KnslvBMEa5PxMHeC9ykP65BuFEewkd+hX3YP9VCmthCm

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