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实验十二
实验动物安全规范及鲫鱼的解剖

一、实验目的

1.学习硬骨鱼解剖方法。

2.了解硬骨鱼类的主要特征及适应水生生活的形态结构特征。

3.了解实验动物安全规范。

二、实验原理

鱼类是最低等的有颌、变温脊椎动物。具有比圆口类动物更为进步的机能结构,主要表现在:出现了能咬合的上下颌;出现了成对的附肢(偶鳍);骨骼为软骨或硬骨;脊柱代替了脊索成为身体的主要支持结构;头骨更加完整,脑和感觉器官更发达。鱼类因适应水生生活而发展出许多特有的结构,主要表现为:身体分为头、躯干和尾;体形多为流线型,体表被以骨质鳞片或盾鳞;体表富黏液;具侧线;以鳃为呼吸器官;血液循环为单循环;以鳔或脂肪调节身体比重获得水的浮力;靠躯干分节的肌节的波浪式收缩传递和尾部的摆动获得向前的推进力;有良好的调节体内渗透压的机制。

三、实验器材与试剂

1.仪器、用具:显微镜、解剖盘、解剖针、培养皿、载玻片、刷子、胶布、棉球、直尺、手术剪、手术刀、中式剪、镊子。

2.材料:活鲫鱼。

四、实验步骤

1.观察鲫鱼的外部形态

鲫鱼身体可区分为头、躯干和尾3部分,整体呈纺锤形,背部灰黑色,腹部近白色。

头部:头部自吻端至鳃盖骨后缘。口位于头部前端(口端位),鲫鱼无触须。吻背面有鼻孔1对,眼1对,位于头部两侧,形大而圆,无眼睑,眼后头部两侧为宽扁的鳃盖。

躯干部和尾部:自鳃盖后缘至肛门为躯干部;自肛门至尾鳍基部最后一枚椎骨为尾部。躯干部和尾部体表被以覆瓦状排列的圆鳞,鳞外覆有一薄层表皮。躯体两侧从鳃盖后缘到尾部,各有1条由鳞片上的小孔排列成的点线结构,此即侧线,被侧线孔穿过的鳞片称侧线鳞。体背和腹侧有背鳍1个,较长,约为躯干的3/4;臀鳍1个,较短;尾鳍末端凹入分成上下相称的2叶,为正尾型;胸鳍1对,位于鳃盖后方左右两侧;腹鳍1对,位于胸鳍之后,肛门之前,属腹鳍腹位;肛门紧靠臀鳍起点基部前方,紧接肛门后有1泄殖孔。

2.鲫鱼的解剖

将活鲫鱼置于解剖盘上,腹部向上,用手术刀在肛门前与体轴垂直方向切一小口。使鱼侧卧,左侧向上,将手术剪尖端插入切口向背方剪开体壁到脊柱,再用中式剪沿脊柱下方向前剪至鳃盖后缘,然后沿鳃盖后缘剪至胸鳍之前。左手持镊自切口处揭起体壁肌肉,右手持镊子将该体壁肌肉与体腔腹膜分开,然后掀开左体壁,使心脏和内脏暴露。将中式剪剪刀尖插入口腔,从左侧口角开始,沿眼睛后缘将鳃盖剪去,使鱼鳃暴露出来。用棉花拭净器官周围的血迹及组织液。

3.鲫鱼的内部观察

原位观察:在胸腹腔前方、最后1对鳃弓的腹方,有一小腔为围心腔,它借横膈与腹腔分开。心脏位于围心腔内,心脏背上方有头肾。在胸腹腔里,脊柱腹方是白色囊状的鳔,覆盖在前、后鳔室之间的三角形暗红色组织,为肾脏的一部分。鳔的腹方是长形的生殖腺,在成熟个体,雄性为乳白色的精巢,雌性为黄色的卵巢。胸腹腔腹侧盘曲的管道为肠管,在肠管之间的肠系膜上,有暗红色、散漫状分布的肝胰脏,体积较大。在肠管和肝胰脏之间有一细长红褐色器官为脾脏。

(1)生殖系统:由生殖腺和生殖导管组成。生殖腺:生殖腺外包有极薄的膜。雄性有精巢1对,性未成熟时往往呈淡红色,性成熟时纯白色,呈扁长囊状;雌性有卵巢1对,性未成熟时为淡橙黄色,呈长带状,性成熟时呈微黄红色,呈长囊形,几乎充满整个腹腔,内有许多小型卵粒。生殖导管:生殖腺表面的膜向后延伸的短管,即输精管或输卵管。左右输精管或输卵管在后端汇合后通入泄殖窦,泄殖窦以泄殖孔开口于体外。观察毕,移去左侧生殖腺,以便观察消化器官。

(2)消化系统:包括口腔、咽、食管、肠和肛门组成的消化管及肝胰脏和胆囊等消化腺体。此处主要观察食管、肠、肛门和胆囊。食管:肠管最前端接于食管,食管很短,其背面有鳔管通入,并以此为食管和肠的分界点。肠:用圆头镊子将盘曲的肠管展开。肠为体长的2~3倍,肠的前2/3段为小肠,后部为大肠,最后一部分为直肠,直肠以肛门开口于臀鳍基部前方。但肠的各部外形区别不明显。胆囊:为一暗绿色的椭圆形囊,位于肠管前部右侧,大部分埋在肝胰脏内,掀动肝脏,从胆囊的基部观察胆管如何通入肠前部。观察完毕,移去消化管及肝胰脏,以便观察其他器官。

(3)鳔:位于腹腔消化管背方的银白色胶质囊,从头后端一直伸展到腹部后端,分前后2室,后室前端腹面发出一细长的鳔管,通入食管背壁。观察毕,移去鳔,以便观察排泄器官。

(4)排泄系统:包括肾脏、输尿管和膀胱。肾脏:紧贴于腹腔背壁正中线两侧,1对,为红褐色狭长形器官,在鳔的前、后室相接处,肾脏扩大使此处的宽度最大。肾的前端体积增大,向左右扩展,进入围心腔,位于心脏的背方,为头肾。输尿管:肾最宽处各通出1细管,即输尿管,沿腹腔背壁后行,在近末端处2管汇合通入膀胱。膀胱:输尿管后端汇合后稍扩大形成的囊即为膀胱,其末端开口于泄殖窦。用镊子分别从臀鳍前的2个孔插入,观察它们进入直肠或泄殖窦的情况,由此可在体外判断肛门和泄殖孔的开口。

(5)循环系统:主要观察心脏,血管系统从略。心脏位于2胸鳍之间的围心腔内,由1心室、1心房和静脉窦等组成。心室:淡红色,其前端有一白色壁厚的圆锥形小球体,为动脉球,自动脉球向前发出1条较粗大的血管,为腹大动脉。心房:位于心室的背侧,暗红色,薄囊状。静脉窦:位于心房背侧面,暗红色,壁很薄,不易观察。

(6)消化系统:口腔与咽:将剪刀伸入口腔,剪开口角,除掉鳃盖,以暴露口腔和鳃。口腔:口腔由上、下颌包围而成,颌无齿,口腔背壁由厚的肌肉组成,表面有黏膜,腔底后半部有一不能活动的三角形舌。咽:口腔之后为咽部,其左右两侧有5对鳃裂,相邻鳃裂间生有鳃弓,共5对,第5对鳃弓特化成咽骨,其内侧着生咽齿。观察鳃的步骤完成后,将外侧的4对鳃除去,暴露第5对鳃弓,可见咽齿与咽背面的基枕骨腹面角质垫相对,能夹碎食物。鳃:鳃是鱼类的呼吸器官。鲤鱼的鳃由鳃弓、鳃耙、鳃片组成,鳃膈退化。鳃弓:位于鳃盖之内,咽的两侧,共5对。鳃弓内缘凹面生有鳃耙;第1~4对鳃弓外缘并排长有2列鳃片,第5对鳃弓没有鳃片。

鳃耙:为鳃弓内缘凹面上成行的三角形突起。第1~4对鳃弓各有2行鳃耙,左右互生,第1对鳃弓的外侧鳃耙较长,第5对鳃弓只有1行鳃耙。鳃片:薄片状,鲜活时呈红色。每个鳃片称半鳃,长在同一鳃弓上的2个半鳃合称全鳃。剪下1个全鳃,放在盛有少量水的培养皿内,置体视显微镜下观察。可见每1鳃片由许多鳃丝组成,每1鳃丝两侧又有许多突起状的鳃小片,鳃小片上分布着丰富的毛细血管,是气体交换的场所。横切鳃弓,可见2个鳃片之间退化的鳃膈。

(7)神经系统:从两眼眶下剪,沿体长轴方向剪开头部背面骨骼,再在两纵切口的两端间横剪,小心地移去头部背面骨骼,用棉球吸取银色发亮的脑脊液,脑便显露出来。从脑背面观察:

端脑:由嗅脑和大脑组成。大脑呈小球状,分左右2个半球,位于脑的前端,其顶端各伸出1条棒状的嗅柄,嗅柄末端为椭圆形的嗅球,嗅柄和嗅球构成嗅脑。中脑:位于端脑之后,较大,受小脑瓣所挤而偏向两侧,各成半月形突起,又称视叶。用镊子轻轻托起端脑,向后掀起整个脑,可见在中脑位置的颅骨有1个陷窝,其内有一白色近圆形小颗粒,为内分泌腺脑垂体。用小镊子揭开陷窝上的薄膜,可取出脑垂体,用于其他研究。小脑:位于中脑后方,呈圆球形,表面光滑,前方伸出小脑瓣突入中脑。延脑:是脑的最后部分,由1个面叶和1对迷走叶组成,面叶居中,其前部被小脑遮蔽,只能观察到其后部,迷走叶左右成对,较大,在小脑的后两侧。延脑后部变窄,连接脊髓。

4.学习动物实验操作规范

第一条,实验动物管理人员、实验操作人员、饲养人员必须善待动物,尽量减少动物的痛苦,不得戏弄、虐待或随意处死动物。

第二条,与实验动物饲养、动物实验无关的人员不得接触实验动物。

第三条,实验人员必须避免人和动物之间的交叉感染,人员患传染性疾病期间尽量避免和动物接触,对动物的操作尽可能在超净工作台上进行。

第四条,实验人员在达到实验目的的前提下,应合理使用实验动物,尽量优化动物实验设计,减少实验动物使用数量。

第五条,如实验人员对科学的动物实验操作不熟练,应向动物室管理人员咨询,并由其进行指导操作,不得随意进行使动物处于痛苦等非自然状态。

第六条,饲育人员和兽医应保证动物处于良好的生活环境和健康状态。

第七条,所有人员操作动物时要轻柔,并尽可能用镊子夹取动物,避免惊吓动物。

第八条,实验动物的垫料、饲料、饮水更换由动物饲养人员负责,保证动物的正常生长,如果实验对其有特别要求必须通知管理人员并在标识卡片上注明。

第九条,如被实验动物咬伤或抓伤应及时做消毒处理,必要时和专业防疫人员联系并进行相应处理。

第十条,处死动物时,必须采用脱颈椎或其他安乐死的方法。动物尸体和脏器应当用垃圾袋装好放入冰箱保存,不得随意丢弃。

第十一条,如动物发生不明原因的死亡,应通知实验人员和动物室管理人员,以便及时查明原因,并立即处理动物尸体。

第十二条,实验全部结束后,实验人员应及时通知动物室负责人,以便做清理消毒和进一步的安排,不得无故拖延实验动物的使用时间。

第十三条,由于不可预料或不可抗拒的事故发生导致动物死亡和实验失败,相关人员应互相谅解并协商解决。

第十四条,在实际操作过程中,各相关人员可以随时对本规范提出异议和意见。

五、实验注意事项

1.剪开体壁时,剪刀尖不要插入太深,应向上翘,以免损伤内脏。

2.实验结束后,认真清洗实验用具,包括镊子、剪刀、托盘内侧和外侧,清洗干净后,沥干多余的水,放回原处。

六、作业

1.绘制鲫鱼内部结构原位观察图。

2.描述鲫鱼消化系统、循环系统。

3.总结鱼类适于水生生活的形态结构特征?

4.鱼体呈纺锤形,略侧扁,背部灰黑色,腹部近白色。体色与其生活环境有何适应关系? C53a0rFmtGUd2ikm3hkTJIx/eS8yIJA8gZAjfVt8J3qnDbGJpAh8dTbNJy9eE7uK

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