1.掌握血涂片的制作方法。
2.观察血细胞的形态及在不同环境下的反应。
3.学习鉴别血型的方法,观察红细胞凝集现象。
血涂片显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法,在临床上被广泛应用,血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。涂片技术是制备血液样品最常用的技术,血涂片制备和染色不好,会导致细胞鉴别困难。血涂片制备是将血液样品制成单层细胞的涂片标本,要求厚薄适宜,分布均匀,染色良好,染色后可对血液中各种细胞进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。
血型是指红细胞膜上特异性抗原类型,是根据存在于红细胞膜外表面的特异性抗原来确定的,这种抗原是由遗传基因决定的。血清中的抗体可与红细胞膜上的不同抗原结合,产生凝集反应,最后发生红细胞的溶解。
ABO血型系统根据受试者红细胞上是否含有凝集原和凝集原的种类,将血型分为A、B、O及AB型。ABO血型鉴定是将受试者红细胞分别加入标准A型血清、标准B型血清中进行鉴定。
1.仪器、用具:显微镜、医用一次性采血针、消毒牙签、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片、盖玻片。
2.材料:人血。
3.试剂:标准抗A血清、标准抗B血清、瑞氏染液、0.9%NaCl溶液、去离子水等。
(1)消毒与采血:按摩指腹部位,保证血流通畅,用70%酒精消毒表面,干燥后用采血针刺破指腹,使血液自然流出(第一滴血不要),挤出第二滴血,滴在载玻片一端,注意手指持载玻片的边缘,不触及表面,也不能使载玻片接触取血部位的皮肤。
(2)推片:另取一块载玻片作推片,置于血滴前方,向后移动到接触血滴,推片与载玻片呈45°角使血液均匀分散,向另一端平稳地推出血液薄膜,迅速在空气中摇,使之干燥。
(3)染色:将瑞氏染色液滴在血膜上,至染液淹没全部血膜,染色1~3min。然后加等量去离子水与染色液混合后再染色5min。最后用蒸馏水把染色液洗掉,用吸水纸吸干,自然干燥后,即可观察。
(4)封片:经染色的涂片完全干燥后,用中性树胶封片保存。
(5)显微镜观察:显微镜下观察血涂片,血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。
红细胞:小而圆,没有细胞核,在血涂片中最多,常被染成淡红色,细胞的边缘厚,中间薄,使细胞边缘的颜色比中间得深。
血小板:为不规则的细胞质小块或碎片,形状像雪花,在血小板中有细小的紫蓝色颗粒。血小板常聚集在红细胞之间。
白细胞:分为有粒白细胞和无粒白细胞,有粒白细胞包括嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞和嗜中性白细胞;无粒白细胞包括淋巴细胞和单核细胞。
(1)将载玻片洗干净,擦干,不能留有水分,以防溶血。
(2)用酒精棉球消毒无名指,等酒精挥发后,用采血针采血,将血液分别滴入血清中,再用牙签混合,室温下静置10~15min,观察凝集现象。
(3)实验结果观察
①只在抗A血清中有凝集反应,则血型为A型。
②只在抗B血清中有凝集反应,则血型为B型。
③在抗A及抗B血清中均有凝集反应,则血型为AB型。
④在抗A及抗B血清中均无凝集反应,则血型为O型。
1.新载玻片有游离碱质,要用10%盐酸浸泡24小时,再用清水和去离子水清洗。使用玻璃片时只能手持边缘,切忌触及玻片表面,以保持玻片清洁、干燥、无油腻。
2.血涂片制好后,立即固定染色,以免细胞溶解和发生退行性变化。血膜必须要干燥,以免在染色过程中脱落。
3.推片时两张切片呈45°角,推片要匀速,连续进行,中途不要中断。
4.染色时间应视具体情况而定。染色与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染色液浓度越淡,室温越低,细胞越多,所需要的染色时间越长,或适当增加染色液。
1.说明红细胞在不同渗透环境中的变化情况并讨论原因。
2.如果没有标准血清,已知某人血型为A型,能否用来鉴定其他人的血型,若能,如何鉴定?