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实验室分离细菌首先需要采集样本，样本采集对能否分离出致病菌至关重要。用作分离细菌的标本应尽量在用药治疗前采集，采样时应严格无菌操作，样本置于无菌密封的容器。样本采集后应立即送往实验室。如果临床样本中含有病原体微生物，会对工作人员和周围人群造成威胁，因此微生物实验室必须遵守生物安全防范措施，按照危险材料运输程序和检测样本处理程序对所有废弃物进行处理和消毒。
采样时应填写采样单，包括场名、畜种、日龄、联系人、电话、规模、采样数量、样本名称、编号、免疫情况、发病情况、临床表现等。将采样单和病史资料随样本一起送到实验室。
哺乳动物采集血样一般选用颈静脉（如猪、羊等）或尾静脉（如牛）采血。禽类一般选择翅静脉采血，也可以通过心脏采血，但是心脏采血对家禽的伤害较大甚至会造成死亡。兔可从耳背静脉或心脏进行采血；啮齿类动物可从尾尖采血，也可从眼窝内的血管丛采血；对犬类或其他毛皮类动物少量采血可穿刺耳尖外侧静脉，大量采血可在隐静脉采血。
对动物采血部位应先剃毛或拔毛，再用75%乙醇或碘酒消毒，待干燥后采血。采血一般用一次性采血器或真空管采血。
在进行血液细菌培养时，通常用全血样本，样本中应添加抗凝剂。抗凝剂可以用0.1%的肝素、阿氏液或3.8%～4.0%的枸橼酸钠。采血时应事先将抗凝剂吸入采血器中或直接将血液滴入抗凝剂中，并立即摇动，充分混合。
（1）采血物品准备：采样物品包括采样箱、采血器、塑料试管、试管架、酒精棉球、记号笔、采样单。防护物品包括防护服、乳胶手套、防护帽、一次性鞋套等物品（图2-1-1）。
图2-1-1 采样物品
（2）常见动物的采血方法
① 禽血样采集：可翅静脉或心脏采血。
a.翅静脉采血：将鸡翅膀展开露出腋窝，拔去羽毛，即可见到翼根的翅静脉。翅静脉是由翼根进入腋窝的一条较粗静脉。用75%乙醇或碘酒消毒皮肤，抽血时用左手指压迫翅静脉向心端，血管出现怒张。右手握注射器，针头由翼根向翅膀方向平行刺入静脉，针头约与皮肤呈15°角［图2-1-2（a）］。持针时手要稳，进针不宜过深。如刺穿血管，很快会引起皮下血肿，导致采血失败。
b.心脏采血：心脏采血不但对鸡的心脏损伤较大，也易伤及其他脏器而导致鸡只死亡，特别是雏鸡最易导致死亡。为了避免伤及其他脏器，采血前对心脏的位置要把握好，定位要准。心脏采血虽然较有难度，但是采血速度快、血量多，尤其适用于需要多量血液时采用。
从侧面采血时，取右侧卧保定，助手应固定好鸡的双腿和翅膀，使鸡右侧卧、左侧面向上。采血者应首先对鸡的心脏进行定位：心脏的位置自龙骨突起前缘引一直线到翅基，再由此线中点向髋关节引一直线，此线前1/3和中1/3的交界处有一凹陷，即是心脏采血进针的部位。用食指触摸该处，可感觉到心跳。将采血部位羽毛拔去，进行常规消毒，用7～9号针头的采血器从肋骨间隙垂直或稍向前方进针，一般刺入2～3cm，如不回血可调整进针深度，直至回血为止［图2-1-2（b）］。心脏采血切不可在鸡胸腔内任意调整针头方向乱刺。若刺入心脏，可在1min内采血3ml以上。
前腔采血时，取仰卧保定，助手先固定好鸡的双腿和翅膀，使鸡胸骨脊朝上，在胸骨的前端锁骨融合成“V”字形的地方（鸭、鹅两锁骨的联合处较圆），将该处羽毛拔去，常规消毒。进针时使该处皮肤紧张，要避开嗉囊斜向胸腔深部刺入，但要保持针尖向胸腔中线，不宜偏斜，直至刺入心房，即可缓慢抽取血液［图2-1-2（c）］。
图2-1-2 禽血样采集
（a）鸡翅静脉采血；（b）鸡侧面心脏采血；（c）鸡前腔心脏采血
② 猪血样采集：可前腔静脉或耳静脉采血。
a.前腔静脉采血：采用仰卧或站立保定。助手将猪保定好后，采血者先对采血部位进行定位（前腔静脉位于肩胛内侧的前腔静脉窝内），再用75%乙醇或碘酒对采血部位进行消毒。将采血器以45°～60°倾斜度朝心端刺入2～3cm［图2-1-3（a）］，回抽采血器，见有回血时可根据需要采3～5ml。
b.耳静脉采血：该方法适用于成年猪。可采用侧卧或站立保定。助手保定好猪只后，采血者一只手拉直猪耳，另一只手先用75%乙醇或碘酒对耳静脉处进行消毒，再持采血器从远心端平行耳静脉刺入［图2-1-3（b）］。采血完毕后再用灭菌棉球按压采血处约1min进行止血。
图2-1-3 猪血样采集
（a）猪前腔静脉采血；（b）猪耳静脉采血
③ 羊血样采集：颈静脉采血。助手骑在羊背上，两手抓住羊角或羊耳进行保定。采血者对羊的颈静脉沟部位剪毛、消毒，一只手按压颈静脉下端使其充盈怒张，另一只手将针头平行于颈静脉朝远心端刺入0.5～1cm（图2-1-4）。采血完毕后，先松手后拔针头，并用灭菌棉球按压采血部位约1min进行止血。
图2-1-4 羊颈静脉血样采集
④ 牛血样采集：可尾静脉、颈静脉采血。
a.尾静脉采血：助手将牛保定，采血者左手托起牛尾巴，在牛的肛门上方、距尾根5～20cm处对采血部位消毒后，由下向上垂直进针刺入牛尾腹侧中心线位置0.5～1cm（图2-1-5），见有回血即可抽血，一般采集5ml即可。采血完毕后，拔出采血针，用灭菌棉球按压约1min进行止血。
图2-1-5 牛尾血样采集
b.颈静脉采血：采血方法与羊的颈静脉采血相同。
⑤ 犬血样采集：隐静脉采血。采血部位在后肢跗骨关节外侧的上方。助手将犬侧卧保定，采血者将犬一侧的后肢拉直并在大腿部位扎上止血带，采血部位剪毛、消毒，即可暴露血管进行采血（图2-1-6）。应注意，犬此处皮下组织疏松，血管易于滑动，较难刺入血管。
图2-1-6 犬隐静脉血样采集
⑥ 兔血样采集：耳静脉采血。助手固定好兔子。采血者选择耳静脉清晰的耳朵，先剪去采血部位的被毛，用75%乙醇或碘酒进行局部消毒；再用手指轻轻摩擦兔耳，使静脉扩张；然后将针头逆血流方向刺入耳缘静脉采血（图2-1-7）。采血完毕后，用灭菌棉球压迫止血。本法为兔最常用的采血方法，可多次采集血液。
图2-1-7 兔耳静脉血样采集
（1）脓汁的采集：如果采集脓汁进行病原菌分离，应在未用药物治疗前无菌采集。采集已破口脓灶的脓汁，宜用棉拭子蘸取；未破口的脓灶，可以用注射器抽取脓汁。
（2）尿液的采集：采取尿液宜在早晨进行。当动物排尿时，用洁净容器直接接取；也可以用导尿管导尿或膀胱穿刺采集。
（3）关节积液的采集：在动物肿胀的关节部位，外表消毒后可以用注射器直接从关节囊腔抽取关节积液。死亡动物剖检，无菌打开肿胀关节，用注射器直接抽取关节积液（图2-1-8）。
图2-1-8 猪跗关节积液采集
（4）心包积液、胸腹腔积液的采集：死亡动物可以直接打开胸腹腔，用注射器抽取心包积液或胸腹腔积液（图2-1-9）。
图2-1-9 猪心包积液采集
（5）胆汁的采集：死亡动物剖开腹腔找到左侧肝叶，将肝脏翻起，露出胆囊，用注射器抽取胆汁（图2-1-10）。
图2-1-10 猪胆汁采集
（6）乳汁的采集：动物乳房先用消毒液清洗消毒，然后采集乳汁。先将最初挤出的乳汁弃去，然后再采集10ml左右乳汁置于灭菌容器中。
（7）猪口液样本的采集：将长40～60cm的棉绳系在围栏上，猪只出于好奇心喜欢咀嚼棉绳（图2-1-11），等棉绳被猪咀嚼过后，用灭菌剪刀剪下被猪咀嚼过的部分放入灭菌封口袋中，挤压棉绳，使口液聚集于封口袋底部，剪破封口袋一角将口液收集到灭菌离心管内。
（8）禽咽喉与猪鼻腔黏液样本的采集：家禽一般从咽喉或泄殖腔进行采样。咽喉采样时将棉拭子插入喉头及上颚裂处来回刮3～5次［图2-1-12（a）］，取咽喉分泌物，采好样本后放入离心管即可。
猪鼻腔黏液的采集：将棉拭子插入猪鼻腔2～3cm［图2-1-12（b）］旋转数圈后沾上鼻黏液，然后将棉拭子放入离心管即可。
图2-1-11 猪口液采集
图2-1-12 棉拭子采样
（a）鸡咽喉棉拭子采样；（b）猪鼻腔黏液棉拭子采样
采集动物粪便样本最好在使用抗菌药物之前进行，用灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔黏膜上蘸取粪便（图2-1-13），并立即放入灭菌试管内密封，贴上标签后冷藏送实验室。
图2-1-13 禽粪便采集
（1）死亡动物内脏样本采集：采集病料前，应根据临床症状或对大体剖检的情况进行初步诊断，有选择地采取病料和内容物。如肉眼难以判定时，可全面采取病料。采样原则为：先采集实质脏器，如心、肝（图2-1-14）、脾、肺、肾、淋巴结；后采集腔肠等脏器组织，如胃、肠、膀胱等。采样时必须无菌操作，病料应新鲜、无污染。
图2-1-14 猪肝脏采集
（2）活体采集扁桃体：用保定器将猪保定，再用开口器打开猪的上下颌，将扁桃体采样器的刀头对准上颚扁桃体呈70°～80°方向刺入，扣动采样器即可切下扁桃体组织（图2-1-15）。采样时要稳、准，避免多次采样而伤害猪扁桃体。
图2-1-15 猪扁桃体采集
用无菌棉拭子采集地面、围栏、料槽、墙面或家禽、家畜新鲜粪便若干份，置于装有2ml左右的无菌离心管内即可。也可以用商品化运输培养基代替棉拭子采集样品（图2-1-16）。污水采集可使用无菌容器直接从沟槽里采集，旋紧瓶盖并放在盛有冰块的保温箱内送实验室。
图2-1-16 运输培养基
装载样本的容器必须完整无损、密封不渗漏液体。容器可以是玻璃或塑料制品，但必须经过消毒处理后使用。根据检测样本的性状及检测目的的不同，应选择不同的容器。装入样本后必须加盖，然后用胶布或封箱带封好。如果选用塑料袋，则应用两层袋，分别用线扎好袋口，防止液体渗漏或污染样本。
每个样本应单独包装，并在样本袋外贴上标签，且标签应注明样本名称、编号、采样日期等。装棉拭子样本的塑料离心管应放在塑料盒内。血样应置于封口袋或包装袋、塑料盒内。
样本保持新鲜或接近新鲜状态是保证检测结果准确无误的重要条件。
（1）血样的保存：一般情况下，血样采集后应尽快送检。血样应避免高温和阳光直晒。如果样本不能及时送检，可以在4℃冰箱中暂时保存，但不能加入抗生素或防腐剂。
（2）微生物分离培养样本的保存：实质脏器或液体样本在短时间内保存时应放入装有冰块的保温瓶内或4℃冰箱保存，但不能冷冻保存。
原则上要求所采集的样本在短时间内送往实验室。在运输过程中，样本应盛放到密封的容器内并放入冰块。在运输过程中要避免样品泄露，防止试管和容器倾倒、破裂。如需寄送，则需用带螺口的容器装样本，垫上足够的缓冲材料，并用胶带或石蜡封口。
（1）血液：细菌培养时，通常用全血样本，样本中应添加抗凝剂，吸取一定量接种到专用培养瓶中用于血培养或与其他液体样本一样用接种环直接挑取样本在培养基上划线培养。
（2）棉拭子样本：接种时，用消毒过的镊子无菌取出棉拭子，将棉拭子在培养基上直接划线培养（图2-1-17）；也可以将棉拭子接触培养基表面后再用接种环划线。
图2-1-17 棉拭子接种培养基
（3）内脏样本：无菌采集的内脏，用消毒镊子夹起内脏直接在培养基上划线（图2-1-18）；如果是污染的内脏，先用烧烫的手术刀在内脏表面消毒，然后在消毒过的内脏表面用无菌医用剪刀剪开，用接种环挑取内脏接种到培养基上。
图2-1-18 肝脏划线培养
（4）口液：将采集的口液棉绳无菌挤压到灭菌容器中保存，用于接种培养基或检测病毒。
（5）粪便：粪便样本杂质较多，首先用过滤袋进行过滤，然后用过滤液接种培养基。