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闭经只是一种症状，诊断时首先必须寻找引起闭经的原因，不同病因必然有其特定规律，应该按照以下步骤进行逐步深入的检查。
1.了解患者自幼生长发育过程，有无先天性缺陷或其他疾病，以及家族史。
2.详细询问患者的月经史，包括初潮年龄、第二性征发育情况、月经周期、经期、经量等。已婚妇女则需注意其生育史及产后并发症。
3.询问患者的闭经时间及伴随症状，发病前有无任何导致闭经的诱因，比如精神因素、环境改变、体重增减、剧烈运动、各种疾病及用药影响等。
检查全身发育状况，有无畸形；测量体重、身高、血压、脉搏、腰围、臀围、四肢与躯干比例；观察五官生长特征、精神状态、智力发育、营养和健康情况。
妇科检查应注意内、外生殖器的发育，有无先天性缺陷、畸形，腹股区有无肿块，第二性征如毛发分布、乳房发育情况，有无乳汁分泌等。
雌二醇、孕酮及睾酮测定：若雌、孕激素浓度低，提示卵巢功能异常或衰竭；若睾酮升高，提示有多囊卵巢综合征、卵巢男性化肿瘤或雄激素不敏感综合征等疾病可能。
催乳素及垂体促性腺激素测定：PRL升高时应进一步测定TSH，TSH升高为甲状腺功能减退；TSH正常，而PRL>100μg/L者行头颅CT或MRI检查，排除垂体肿瘤。
促性腺激素测定：若FSH>40U/L，提示卵巢功能衰竭；若LH升高而FSH值正常、LH/FSH>3应高度怀疑多囊卵巢综合征；若LH/FSH均<5，提示垂体功能减退，病变可能在垂体或下丘脑。
特别提示：肥胖、多毛、痤疮患者还需测定雄激素（血睾酮、硫酸脱氢表雄酮、尿17-酮等），口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test，OGTT）、胰岛素释放试验等，以确定是否存在胰岛素抵抗、高雄激素血症或先天性21-羟化酶功能缺陷等。Cushing综合征可通过测定24小时尿皮质醇或小剂量地塞米松抑制试验排除。
该试验为评估内源性雌激素水平的简单、快速方法。可选用以下方案之一：黄体酮注射液，每天肌内注射20mg，连续5天；微粒化黄体酮，200mg/d，连服10天；地屈孕酮，10~20mg/d，连服10天；醋酸甲羟孕酮，10mg/d，连服10天。
诊断：停药后2周内出现撤药性出血（阳性反应），提示体内有一定量内源性雌激素水平，为Ⅰ度闭经；若孕激素试验无撤药性出血（阴性反应），说明患者体内雌激素水平低下，为Ⅱ度闭经或子宫病变所致闭经，应进一步作雌、孕激素序贯试验。
嘱患者每晚睡前服结合雌激素1.25mg，或戊酸雌二醇2mg，连续21天。为使停药后子宫内膜脱落完全，后10天加用微粒化黄体酮、地屈孕酮或醋酸甲羟孕酮。
诊断：停药后2周内发生撤药性出血为阳性，提示子宫内膜功能正常，排除子宫性闭经；无撤药性出血为阴性，应重复一次试验，若仍无出血，可诊断为子宫性闭经。
又称GnRH刺激试验，用以了解垂体对GnRH的反应性。肌内注射GnRH-a 25~50μg，30秒钟内快速注入肘静脉内。注射前及注射后30、90分钟分别采取静脉血测定LH、FSH值。
诊断：
注射后30、90分钟LH值较注射前高2~4倍，FSH高峰值可比基础值高2~3倍。
若经多次重复试验，注射后30分钟LH、FSH值仍无升高或增高不足2倍，提示垂体功能减退，起因于垂体或下丘脑。
30分钟时LH高峰值比基值升高4倍以上，根据FSH峰值鉴别多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）和卵巢功能衰退。卵巢功能衰退时LH、FSH反应均亢进（30分钟、90分钟FSH峰值>20U/L）；多囊卵巢综合征时LH反应亢进，但FSH反应低下（30分钟、90分钟FSH峰值 <10U/L）。
可观察有无子宫、子宫形态大小及内膜厚度、卵巢排卵、盆腔包块等情况。
了解子宫腔形态、大小及输卵管情况，用以诊断生殖系统发育不良、畸形、结核及宫腔粘连等病变。
了解子宫性闭经的性质。
观察子宫形态、卵巢活检、了解输卵管及盆腔腹膜的病变。
疑有垂体肿瘤时应行蝶鞍部CT或MRI检查，以早期发现垂体微腺瘤（直径 <1cm）。
对原发闭经和有先天性发育异常者，应进行染色体核型分析。
重点提示：闭经的诊断应根据第二性征的发育情况进行分类，详细询问病史及体格检查，初步除外妊娠和器质性病变，然后按图所示的诊断步骤进行，血HCG测定应作为最先检查的项目。原发闭经和继发闭经的诊断步骤分别见图3-1和图3-2。
图3-1 原发闭经的诊断步骤
图3-2 继发闭经的诊断步骤
注：？代表怀疑为该病，但诊断还需结合病史等