第五节
病理性抗凝物质检验

一、血浆肝素浓度测定

（一）检测原理

发色底物法：在AT和FⅩa均过量的反应中，肝素对FⅩa的抑制速率与其浓度成正比，用特异性FⅩa发色底物法检测剩余FⅩa的活性，发色强度与血浆肝素浓度呈负相关。

（二）标本要求和质量控制

1.采血与离心必须细心，以避免血小板激活，导致血小板第4因子（PF ₄ ）释放，后者可抑制肝素活性。

2.反应中温育时间和温度均应严格遵循要求，否则将影响检测结果。

3.严重黄疸患者检测中应设自身对照。

4.制作标准曲线的肝素制剂应与患者使用的一致。

5.采血时间必须与用药时间紧密对应，使检测结果可以指导临床的药物剂量调整。

6.肝素治疗个体差异较大，过量用药可以导致出血，用药不足无法避免血栓形成。肝素浓度的检测可以有效地提供药动学信息，指导临床合理调整药物的剂量。

（三）结果分析与解读

正常人用本法检测肝素为0，根据抗凝治疗的强度不同，本检测值有相应变化。本法检测肝素的范围是0~0.8U/ml。

（四）临床应用

在过敏性休克，使用氮芥或放疗后，严重肝病或DIC，肝叶切除后或肝移植术后等患者血浆中肝素增多。主要应用于肝素治疗的监测。

二、狼疮抗凝物的检测

（一）检测原理

用蛇毒试剂激活FⅩ，加入Ca ²⁺ 和低浓度磷脂，观察血浆发生凝固的时间，称为Russell蝰蛇毒时间（Russell viper venom time，RVVT），作为狼疮抗凝物（lupus anticoagulant，LA）的过筛试验。

若RVVT明显延长时，提示有凝血因子缺陷或存在LAC。加入正常血浆后，RVVT缩短，为凝血因子缺陷；若RVVT仍延长，表明存在LAC。加入高浓度的磷脂中和LAC后，可使延长的RVVT缩短或恢复正常，确证血浆中存在LAC，称为LAC确认试验（LAC confirm）。

通过计算LAC screen或LAC confirm与正常人血浆RVVT的比值，得到LAC过筛试验比值（screen ratio，SR）和确认试验比值（confirm ratio，CR），用筛查除以确认比值，得到标准化LAC比值（normalized LAC ratio，NLR），根据NLR的大小，判断待测血浆中有无LAC。

（二）标本要求与质量控制

本试验对狼疮抗凝物检测的敏感性和特异性均较高。检测系统内磷脂的含量至关重要。要求待检血浆中尽量去除血小板成分，以避免血小板磷脂参与反应而影响检测结果。

（三）结果分析与解读

NLR：正常人<1.2；>2.0为强阳性；1.5~2.0为中度阳性；1.2~1.5为弱阳性。

（四）临床应用

LAC是一组抗磷脂或磷脂与蛋白（如β-2-glycoprotein1和凝血因子）复合物的抗体，可以干扰磷脂依赖的止血反应和体外凝血试验（如APIT、SCT、RVVT等）。血浆LAC阳性，可见于自身免疫性疾病（如系统性红斑狼疮）、病毒感染、骨髓增生性疾病、复发性流产等，有24%~36%患者可发生血栓形成。

三、凝血因子Ⅷ抑制物测定（Bethesda法）

（一）检测原理

通常采用Bethesda法进行检测。将患者血浆梯度稀释后与正常血浆混合，然后应用一期法APTT检测凝血因子活性。将可中和正常血浆凝血因子活性50%的抑制物含量定义为1个Bethesda单位。

（二）标本要求与质量控制

1.与针对凝血因子Ⅸ的抗体不同，凝血因子Ⅷ的抑制物存在异质性。部分抗体抑制凝血活性呈时间依赖性，因此，标本通常需要37℃孵育2h后测定。

2.同凝血因子Ⅷ：C测定 当筛查试验如APTT纠正试验出现阳性结果时，患者有血友病A史或因子Ⅷ活性下降，用Bethesda法可以定量反映抑制物的水平，用于血友病A患者产生因子Ⅷ抑制物或获得性血友病A的诊断与疗效的监测。该检测是一种经典的方法。

（三）结果分析与解读

正常人体内无抑制物。

（四）临床应用

本法多用于血友病A患者出现抗因子Ⅷ：C抗体者，获得性血友病A者；也可用于测定其他凝血因子所产生的抗体。

（陶 玲） hmzIGon9AWqAtUY/2+cZWQ0tvIPI0SwObyOQRKpCmx3GnczkWhTwIU9oothQ714J