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第四节
抗凝系统检验

一、抗凝血酶测定

(一)检测原理

1.抗凝血酶活性(antithrombin activity,AT:A)测定

采用发色底物法。受检血浆中加入过量肝素和FⅩa,使AT与FⅩa形成复合物,剩余的FⅩa水解发色底物,释放发色基团,颜色的深浅与剩余FⅩa的量呈正相关,与血浆中AT:A呈负相关。

2.抗凝血酶抗原(antithrombin antigen,AT:Ag)测定

采用酶联免疫吸附法。

(二)标本要求与质量控制

1.进行AT:Ag测定的样本应采用枸橼酸钠抗凝而不能用肝素抗凝血浆。

2.保存待检血浆从冰箱中取出后应立即置37℃水浴中融冻,但不能反复冻融。

3.AT:A和AT:Ag同时测定,有助于AT缺乏症分型。

(三)参考区间

血浆AT:A 为(108.5±5.3)%,AT:Ag为(290±30.2)mg/L。

(四)临床应用

1.先天性AT缺陷 按AT:Ag及AT:A测定结果分为两型:交叉反应物质(cross reaction material,CRM)阴性型(CRM - ),AT:Ag与 AT:A均减低;CRM阳性型,AT:Ag 正常而 AT:A 减低。

2.获得性AT缺乏见于肝脏疾病、弥散性血管内凝血、应用肝素等。

二、血浆蛋白C测定

(一)检测原理

1.蛋白C活性(protein C activity,PC:A)测定

采用发色底物法。向受检血浆中加入PC,PC被激活为活化蛋白C(APC),后者作用于特异性发色底物,释放显色基团,颜色的深浅与受检血浆PC的活性呈正相关。

2.蛋白C抗原(protein C antigen,PC:Ag)测定

采用免疫火箭电泳法。在含抗人PC抗体的琼脂板中,加入一定量的受检血浆(抗原)于检测孔中,定向抗原在电场中向正极泳动,在一定时间内形成火箭样沉淀峰,峰的高度与抗原浓度成正比。

(二)标本要求与质量控制

检测PC:A时,如果存在活化蛋白C抵抗(activated protein C resistance,APC-R)时,可出现血浆凝固时间假性缩短,将待测血浆用缺乏PC的基质血浆进行1:2、1:4等适当比例稀释后可以纠正。

(三)参考区间

PC:A为(100.24±13.18)%,PC:Ag为(102.5±20.1)%。

(四)临床应用

1.先天性PC缺陷

Ⅰ型者PC:Ag与PC:A均降低,Ⅱ型者PC:Ag正常而PC:A降低。

2.获得性PC减少

可见于DIC、肝功能不全、手术后及口服双香豆素抗凝剂等。

三、血浆蛋白S测定

(一)检测原理

1.血浆游离蛋白

S 活性(free PS:axtivity,FPS:A) 血浆总 PS(TPS)包括游离 PS(FPS)和与补体C 4 结合蛋白结合的PS(C 4bp -PS),前者约占40%,后者约占60%,只有FPS能辅助APC发挥灭活因子Ⅴa、Ⅷa功能。在待测血浆中加入组织因子、钙离子、磷脂和APC,测定其PT,通过标准曲线可计算出相当于正常血浆FPS:A的百分率。

2.血浆蛋白

S抗原(free PS:antigen,PS:Ag) 采用免疫火箭电泳法。血浆总 PS(TPS)包括游离PS(FPS)和与补体C 4 结合蛋白结合的PS(C 4bp -PS)。火箭电泳法在琼脂板上可同时检测TPS和FPS。在待测血浆中加入一定量聚乙二醇6000,则C 4bp -PS会沉淀下来,上清部分即为FPS。

(二)标本要求和质量控制

1.游离PS标本,制备好的上层血浆应当天检测,否则会影响实验结果。

2.同一份标本,同时做TPS和FPS,加样时可以单孔为TPS样本;双孔为FPS样本,以便分析结果。

3.血浆中约60%为C 4bp -PS,40%为FPS。只有FPS辅助APC发挥灭活FⅤa和FⅧa功能。故检测FPS更有临床价值。

(三)参考区间

血浆 FPS:A(63~135)%;TPS:Ag(77~116)%。

(四)临床应用

1.先天性PS缺陷

PS作为PC的辅助因子,对因子Ⅴa、Ⅷa有加速灭活作用,测定FPS更有临床价值。先天性PS缺陷者常伴发严重的深静脉血栓栓塞。

2.获得性PS缺乏

见于肝功能障碍、口服双香豆素类抗凝药物。

四、血浆组织因子途径抑制物

(一)检测原理

1.组织因子途径抑制物活性(tissue factor pathway ingibitor activity,TFPI:A)

待检血浆与过量的TF-FⅦa和FⅩ作用,剩余的TF-FⅦa水解发色底物,释放出对硝基苯胺(pNA)发色基团,通过颜色深浅检测其活性。

2.组织因子途径抑制物抗原(TFPI:antigen,TFPI:Ag)

应用双抗夹心法定量检测血浆TFPI抗原含量。

(二)标本要求与质量控制

采集空腹血,用枸橼酸钠(血液与抗凝剂比例为9:1)抗凝。

(三)参考区间

血浆 TFPI:A(78~154)%;TFPI:Ag44.3~151μg/L

(四)临床应用

1.TFPI缺乏

多为获得性缺乏,可引起血液高凝状态。如DIC、脓毒血症、大手术等。

2.TFPI增多

见于致死性败血症、慢性肾衰竭等。老年人和妊娠期间,TFPI可增多。

(陶 玲 袁小庚) Aw+DJgfUVxHeko0tJOZVIb0HxVRsn5AkctO0GNtx0m2yjz6zSOTCJExa9nlR7/in

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