第一节
血管壁和血管内皮细胞相关检验

初期止血（又称一期止血），与血管壁和内皮细胞的功能密切相关。目前主要的检测内容包括出血时间、血管性血友病因子及血管内皮损伤标志物。

一、出血时间测定

（一）检测原理

出血时间（bleeding time，BT）是指皮肤受特定条件的外伤出血后，出血自行停止所需要的时间。BT反映了皮肤毛细血管与血小板的相互作用，包括皮肤毛细血管的完整性与收缩功能、血管内皮细胞的功能、血小板的数量与功能，血管周围结缔组织成分等。与这些反应相关的血管和血液成分，如血管性血友病因子（vWF）和纤维蛋白原含量（Fg）等有缺陷时，BT也可出现异常。通常用WHO推荐的模板法（template bleeding test，TBT）或出血时间测定器法测定。

（二）标本要求与质量控制

1.采血部位应保暖，血液应自动流出。

2.滤纸吸去流出血液时，应避免与伤口接触。

3.试验前一周应停用抗血小板药物，如阿司匹林、氯吡格雷等。

4.BT测定实验操作较为复杂、皮肤切口稍大，临床开展受到一定限制，一般不作为常规筛查试验。对临床有皮肤及黏膜出血表现、疑为初期止血缺陷的患者，可检查BT。

5.BT测定是筛查血管与血小板相互作用有无异常较为敏感的试验，由于试验条件要求较高，皮肤切口的长度和深度固定，测定结果较为准确。

（三）参考区间

6.9±2.1min。

（四）临床应用

1.BT延长

常见于：①血小板数量异常，如血小板减少症；②血小板质量缺陷，如先天性和获得性血小板病和血小板无力症等；③一些凝血因子缺乏，如血管性血友病（vWD）和弥散性血管内凝血（DIC）等；④血管疾病，如遗传性出血性毛细血管扩张症等。

2.BT正常

并不能完全除外初期止血缺陷。如果有出血家族史，而且又无凝血因子异常，应进一步做其他有关实验检查。

3.BT缩短

见于一些严重的血栓前状态和血栓性疾病。

二、血管性血友病因子测定

（一）检测原理

血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）是一种多聚体大分子蛋白，具有与胶原、肝素、FⅧ轻链、GPⅠb和GPⅡb-Ⅲa、瑞斯托霉素等结合的多个功能区。vWF检测包括含量、活性、功能、多聚体等多个指标的检测。

1.血浆vWF抗原检测（vWF：Ag）

常用乳胶颗粒增强的免疫比浊法（LPEITA）快速定量检测血浆中的vWF：Ag，结果以对照血浆的百分比表示。

2.血浆vWF活性（vWF：activity，vWF：A）

用抗vWF的血小板结合位点（GPⅠb受体）的单克隆抗体包被的乳胶颗粒与待测血浆中的vWF反应，乳胶颗粒发生凝集的程度与vWF活性成比例关系，通过全自动凝血分析仪快速测定vWF：A活性，结果以对照血浆的百分比表示。

3.vWF的功能分析

包括血浆vWF瑞斯托霉素辅因子（vWF：ristocetin cofactor，vWF：RC）检测、瑞斯托霉素诱导的血小板聚集试验（ristocetin-induced platelet agglutination test，RIPA）、vWF的胶原结合能力、vWF的FⅧ结合能力（vWF：FⅧ BC）检测。

4.vWF多聚体分析

用SDS琼脂糖凝胶电泳检测vWF的功能多聚体，然后通过放射自显影或Western blotting，鉴定和分析多种多聚体区带。

5.基因诊断

应用PCR和突变分析检测vWF的基因缺陷。

（二）标本要求与质量控制

1.在vWF检测中，vWF：Ag的定量最常用，以前多采用免疫火箭电泳，现已较少用。ELISA也可用于定量检测vWF：Ag，但以胶乳颗粒增强的免疫比浊法最为简便、快速。

2.本试验若以EDTA抗凝，测定结果不准。

3.试管和注射器均应涂硅或使用塑料制品。

4.vWF：Rco和瑞斯托霉素诱导的血小板凝集试验（RIPA）是最常用的vWF功能试验，vWF多聚体分析是诊断vWD最为特异的试验，但检测方法难度较大，一般实验室难于常规检测。对一些疑难病例，在有条件时可进行基因诊断。

（三）参考区间

1.血浆vWF：Ag（比浊法） 41.1%~125.9%（O 型），61.3%~157.8%（A、B、AB 型），O 型人群明显低于A、B、AB型人群。

2.血浆vWF：A（比浊法） 38.0%~125.2（O 型），49.2%~169.7%（A、B、AB 型），O型人群明显低于A、B、AB 型人群。

3.血浆vWF：RC 70%~150%；RIPA RIS（0.5g/L）<20%，RIS（1.5g/L）>60%；vWF：CBc 2.1%~40.5%；vWF：FⅧ BC 924±216U/L。

（四）临床应用

1.血管性血友病诊断与分型

vWF抗原、vWF活性及多聚体分析是诊断血管性血友病（von Willebrand disease，vWD）和对vWD分型的重要依据。vWF：Ag浓度减低是诊断vWD的重要指标。

2.血栓性疾病

vWF：Ag升高，见于周围血管病变、缺血性心脑血管疾病、糖尿病、尿毒症、肺部疾病、妊娠高血压综合征等。

3.急性时相反应

vWF作为一种急性时相反应蛋白，在大手术后、恶性肿瘤、血管炎、器官移植后等，可显著升高。

三、血浆血栓调节蛋白

（一）检测原理

血浆血栓调节蛋白（thrombomodulin，TM）包括抗原含量（TM：Ag）和活性（TM：A）检测。

1.血浆血栓调节蛋白抗原含量（TM：Ag）测定

应用放射免疫分析法（RIA）检测，以抗人凝血酶调节蛋白（TM）单克隆抗体或抗血清包被聚苯乙烯放免小杯，样品中的TM结合于包被的放免小杯上，加入 ¹²⁵ Ⅰ-抗人TM单抗，根据结合的 ¹²⁵ Ⅰ放射性强度计算样品中TM：Ag的含量。

2.血浆血栓调节蛋白活性（TM：A）测定

TM可加速凝血酶激活蛋白C的速率，所以，加入一定浓度的凝血酶，活化蛋白C（APC）的生成量与待测血浆中的TM活性成比例关系。APC分解发色底物S-2336释放出黄色对硝基苯胺（pNA），pNA的最大吸收峰在405nm处，通过自动凝血分析仪动态监测吸光度的变化量可检测TM的活性（TM：A）。

（二）标本要求与质量控制

采集空腹血，用枸橼酸钠（血液与抗凝剂比例为9：1）抗凝。

（三）参考区间

血浆TM：Ag（RIA法）20~35µg/L。

血浆TM：A（发色底物法）68%~120%。

（四）临床应用

TM：Ag是血管内皮损伤的最佳标志物之一，通常作为首选，结合TM：A有助于与TM缺乏症相鉴别。

1.血浆TM增高

常见于累及血管内皮损伤的疾病，如糖尿病、系统性红斑狼疮（SLE）、肾小球疾病、弥散性血管内凝血（DIC）、脑梗死、急性心肌梗死等，TM增高与vWF升高呈正相关。

2.血浆TM减低

常见于TM缺乏症，其血栓性疾病的发病率增高。

（陶 玲 袁小庚） Dhfp1DvhifM3qSZ9gtkXRrwOKYBmV78dot2rwy+XOHB9D3DGGOvGpitck6KuZE6O