第五节
阵发性睡眠性血红蛋白尿症的检验

阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）是一种获得性造血干细胞基因突变，生成的红细胞膜上缺乏灭活意外被活化的补体的物质，导致血管内溶血的发生。临床常用酸化溶血试验和蔗糖溶血试验对PNH进行筛查。

一、酸化溶血试验

（一）检测原理

酸化溶血试验又称Ham试验。PNH患者的红细胞对补体敏感性增高，在酸化的血清中（pH 6.6~6.8），经37℃孵育，易溶血。此法较敏感。如血清经56℃加热30min，使补体灭活，患者红细胞即不溶解。

（二）标本要求与质量控制

1.血清酸化后用塞盖好，避免CO ₂ 逸出而降低血清的酸度，导致溶血程度减低。

2.脱纤维血制备时，通常需旋转摇动玻璃10~15min，此时应注意摇动要轻，切勿造成溶血。

3.一切用具要干燥，避免溶血。

（三）结果分析与解读

正常人为阴性。

（四）临床应用

阳性主要见于PNH患者。伴有缺铁的患者有时可呈假阴性，但经铁剂治疗纠正后又可出现阳性。某些自身免疫溶血性贫血发作严重时也可阳性。

二、蔗糖溶血试验

（一）检测原理

蔗糖溶液离子浓度低，经温育后可促进补体与红细胞膜的结合，使对补体敏感的红细胞膜上形成小孔，蔗糖水进入红细胞内引起红细胞膜破裂，发生溶血。

（二）标本要求与质量控制

1.所用器材应清洁干燥，以免溶血造成假阳性。

2.每次实验应同时作正常对照。

（三）结果分析与解读

正常人为阴性。

（四）临床应用

蔗糖溶血试验阳性见于PNH。部分自身免疫溶血性贫血、巨幼红细胞贫血和遗传性球形红细胞增多症呈弱阳性。

三、CD55、CD59和FLAER测定

（一）检测原理

PNH患者的血细胞膜出现多种GPI锚蛋白异常或缺失表达，如C3转化酶衰变加速因子（CD55）及反应性溶血膜抑制物（CD59）等，因此采用荧光素标记的抗CD55抗体、抗CD59抗体及GPI锚蛋白结合蛋白气单胞菌溶素（FLAER）相关标志，通过流式细胞术可以检测中性粒细胞和红细胞上CD55和CD59表达及单核细胞和中性粒细胞上FLAER表达情况。

（二）标本要求与质量控制

1.首选EDTA抗凝外周血，标本采集后24~48h内处理。

2.FLAER是目前检测PNH粒细胞克隆的最佳指标，CD55和CD59不适用检测PNH微小克隆细胞。

3.B细胞和网织红细胞上CD55和CD59的表达变化与红细胞和中性粒细胞基本一致，但需要联合使用B系抗原如CD19及网织红细胞染料，不作为常规推荐。

4.淋巴细胞CD55和CD59的表达不能作为诊断PNH的指标。

（三）结果分析与解读

1.健康人外周血红细胞和中性粒细胞CD55和CD59表达完全阳性，单核细胞和中性粒细胞FLAER表达完全阳性。而PNH患者这几类表达均出现缺失。

2.红细胞CD55和CD59均出现缺失，具有诊断意义；否则需检测其他GPI相关抗原，如CD16、CD24或者CD66。

（四）临床应用

可以帮助诊断PNH及鉴别其他原因引起的贫血。缺陷型PNH细胞所占比例，可以帮助判断PNH预后并反映PNH的克隆情况。

（陶 玲） y1ECw2/vuaTiB3HlbRYk8zEmDPF5SwqdfD0WjB1MclB+9XYGaqlK2OgYrpjrFeay