第一节
红细胞溶血筛查的检验

红细胞溶血是以红细胞寿命缩短、血红蛋白直接在血液循环中释放、红细胞代偿性生成增加等现象并存为特征，可采用网织红细胞计数及血浆游离血红蛋白、血清结合珠蛋白、尿含铁血黄素检测等筛查，作为红细胞在血管内破坏的证据，以鉴别红细胞溶血发生的部位。

一、网织红细胞计数

（一）检测原理

网织红细胞（reticulocyte，Ret）是尚未完全成熟的红细胞，其胞质内尚有嗜碱性的RNA物质，经新亚甲蓝或煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色网状结构。

（二）标本要求与质量控制

1.标本应在4h内进行处理。置于清洁的棕色瓶中保存，染色液应无沉淀。

2.新亚甲蓝染料为WHO所推荐，着色强且稳定，背景清晰，利于计数；室温<15℃时，放37℃恒温水箱；用Wright-Giemsa染液复染后，可使Ret计数结果减少。

（三）结果分析与解读

1.网织红细胞比例

成年人：0.005~0.015；新生儿：0.03~0.06；儿童：0.005~0.015。

2.网织红细胞绝对数

成年人（24~84）×10 ⁹ /L。

3.网织红细胞生成指数（reticulocyte production index，RPI）

正常人 2.0。

（四）临床应用

1.Ret增加 表示骨髓造血功能旺盛。见于各类增生性贫血，溶血性贫血增加尤为显著；巨幼红细胞贫血、缺铁性贫血分别应用维生素B ₁₂ 、叶酸或铁剂治疗后显著增多，表示有治疗效果；也是放疗和化疗后以及骨髓移植和促红细胞生成素治疗后骨髓造血功能恢复的指标。

2.Ret减少 常见于骨髓增生受抑制、再生障碍性贫血和纯红细胞再生障碍性贫血。

3.RPI>3时，提示溶血性贫血或急性失血性贫血；RPI<2时，则提示红细胞生成减少所致的贫血。

二、血浆游离血红蛋白检测

（一）检测原理

血管内溶血时，血浆游离血红蛋白浓度增高。血红蛋白中亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用，催化过氧化氢释放新生态氧，使无色的邻-甲联苯胺氧化而显蓝色，加酸后呈较稳定的黄色，吸收峰为435nm。采用比色法可知其含量。

（二）标本要求与质量控制

动物实验证明，急性血管内溶血发生后2h，其血浆中游离Hb含量可减低一半。因此本检测应于溶血后即时取样进行，且应注意采样及分离血浆过程不得发生溶血。

（三）结果分析与解读

参考区间：0~40mg/L。正常情况下，血浆中血红蛋白大部分与结合珠蛋白结合，仅有微量游离血红蛋白。测定血浆游离血红蛋白可判断红细胞的破坏程度。

（四）临床应用

1.游离血红蛋白明显增高是判断血管内溶血的指征。蚕豆病、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、阵发性寒冷性血红蛋白尿、冷凝集素综合征、溶血性输血反应等明显增高；自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻到中度增高。

2.血管外溶血、红细胞膜缺陷时游离血红蛋白不增高。

三、血清结合珠蛋白检测

（一）检测原理

结合珠蛋白（haptoglobin，Hp）能与游离血红蛋白结合，生成Hb-Hp复合物，在血红蛋白降解代谢过程中具有重要作用。在待测血清中加入一定量的血红蛋白，使之与待测血清中的结合珠蛋白形成Hb-Hp复合物，通过电泳法将已结合的Hb-Hp复合物与未结合的Hb分开，以比色反应测定两条区带中血红蛋白的含量，Hp对Hb的结合量能间接反映血液中Hp的含量，用mgHb表示。

（二）标本要求与质量控制

1.标本切勿溶血，否则结果偏低。电泳时温度过高时区带分辨效果欠佳。

2.宜做2份平行试验。当Hb-Hp区带难以观察时，将另一张醋酸纤维素薄膜用联苯胶染色后辅助判别。Hp降低的标本Hb-Hp区带色泽很浅而细；溶血性贫血时Hb-Hp区带可以消失；当严重血管内溶血时，在Hb-Hp区带位置前面可能出现一条呈暗红色的高铁血红素白蛋白区带，则需慎重确认。

3.Hp含量受内分泌影响，女性患者最好在非月经期进行；Hp为急性时相反应蛋白，检测结果宜结合临床表现综合分析。

4.醋酸纤维素薄膜电泳法属经典方法，现可采用免疫散射比浊法定量检测Hp，操作规程见厂家试剂盒说明书。

（三）结果分析与解读

参考区间：

0.5~1.5gHb/L。正常情况下，血浆中的血红蛋白与结合珠蛋白结合形成复合物，在单核巨噬细胞系统和肝内被消除。溶血时血浆中的血红蛋白与Hp结合增多，使血清中结合珠蛋白减少，测定血清中结合珠蛋白的含量可反映溶血的情况。

（四）临床应用

1.减低

常见于各种溶血，尤其是血管内溶血。严重肝病、先天性无珠蛋白血症、传染性单个核细胞增多症等Hp也明显减低，此时不能以此指标判断有无溶血。

2.增高

常见于感染、创伤、系统性红斑狼疮、恶性肿瘤、类固醇治疗、妊娠、胆道堵塞等（Hp为急性期反应蛋白）。此时如Hp正常，不能排除合并溶血的可能。

四、尿含铁血黄素检测

（一）检测原理

尿含铁血黄素试验又称Rous试验。当血管内红细胞被大量破坏时，血红蛋白可直接通过肾脏滤过，部分铁离子以含铁血黄素的形式沉积于上皮细胞，并随尿液排出。尿中含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合体，其中的高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下产生蓝色的亚铁氰化铁沉淀。

（二）标本要求与质量控制

1.宜取患者晨尿，以提高阳性率。

2.标本在放置时，建议以封口膜封口以免污染。

3.所有器材必须不含铁，否则可能造成假阳性结果。

4.分析中同时应作阴性对照。

（三）结果分析与解读

加盖片后，以油镜观察：有分散或成堆蓝色颗粒（直径1~3μm，尤其存在于细胞内），为阳性。正常人为阴性。

（四）临床应用

阳性结果主要见于慢性血管内溶血，如阵发性睡眠性血红蛋白尿症。也见于溶血性输血反应、机械性红细胞损伤、烧伤、药物性溶血和重型血红蛋白病等。血管内溶血初期，上皮细胞内尚未形成可检出的含铁血黄素，可呈阴性反应。

（陶 玲） E3A4n8Rcw9VWEMnDWTuBeES/ajQM77YtLS6Ho6HdbowE54vzvb2KnMjP56DJ1W5E