下载掌阅APP，畅读海量书库
立即打开
流式细胞术（FCM）检测的是单个细胞悬液，首先是要制备合格的单个细胞悬液样本并进行细胞计数；其次是单个细胞悬液与免疫荧光抗体孵育，使细胞标记上荧光抗体；最后上机检测、采集数据并分析。上机检测时需注意仪器的质控、模板建立、仪器设置、采集数据由专业人员进行分析。
FCM的检测从标本采集一直到数据分析、审核报告，涉及临床医师、护理人员、标本运送人员、检测人员和报告审核人员，任何环节中的人为因素均会影响检测结果。因此，各个环节的质量控制至关重要，包括如何采集合格的标本以及标本的运送，可分为实验前、实验中、实验后三个阶段。
1.可用于FCM检测的标本有外周血、骨髓、组织块、体液、培养细胞等。标本信息需包括患者基本信息、采集时间、标本类型、唯一识别码。申请单需填写详细的检测项目和相关临床信息，同时核对标本信息和申请单信息要一致。
2.抗凝剂的选择 采集物不同抗凝剂的选择也不同，不同的抗凝剂稳定性也有差别。血液标本（外周血、骨髓血）可选择EDTA、枸橼酸-枸橼酸钠-葡萄糖（ACD）或肝素抗凝，如果标本需要进行白细胞计数和分类，应选择EDTA抗凝。体液标本（脑脊液、胸腔积液等）抽取后肝素（1U/ml）抗凝。新鲜组织学标本（淋巴结等）需置于生理盐水、磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）或细胞培养液中。
3.保存方法 EDTA抗凝标本，常温（15~25℃）下12~24h可保持稳定，肝素钠和ACD抗凝标本48h内可保持稳定。标本若不能及时处理，需保存于4℃冰箱中，并尽快检测。
4.标本运送 原则上标本采集后应立即送检，如果路途较远，送检温度的控制非常重要，当温度过高或过低时会影响标本的质量，通常4~8℃环境下尽快送检，避免标本冻结和过热。
5.标本质量 当标本出现变性、损坏或严重溶血、有凝块时，需弃之，做好记录并与临床医师进行沟通。标本过多或过少也会影响检测结果。
实验中阶段主要包括制备合格的单个细胞悬液标本、细胞计数、免疫荧光染色、流式细胞仪的性能调整等。
1.标本制备和细胞计数 外周血、骨髓血和体液标本是天然的单细胞悬液。组织标本需要用机械法去除细胞间的连接而收获单个细胞，不能用甲醛、乙醇固定组织或用酶、表面活性剂处理，其目的是保证细胞的抗原活性。单细胞悬液标本制备好以后，需依据最适的细胞荧光抗体标记效果及获取细胞数的需要，将单细胞悬液的细胞浓度调整为（0.2~2.0）×10 6 个/管，一般每管的体积为100μl。
2.免疫荧光染色 将适量荧光素标记的单克隆抗体加入待测样本中，与待测细胞混匀后室温下避光孵育，这是进行免疫表型分析的关键步骤。免疫荧光标记时需注意荧光染料的特性和量效关系、抗体的特异性和效价关系、染料浓度的控制，依据不同的检测目的，选择合适的抗体组合和用量。最适的抗体加入量、细胞数的量效关系需进行滴定曲线确定。另外温度、pH、溶血剂、固定剂等均会影响荧光染色的效果。
3.流式细胞仪的性能调整 标本上机检测前，需要将流式细胞仪的各项性能指标调整到最佳状态，包括仪器的校准、电压、荧光分辨率及荧光补偿的调节、设置对照、性能的评估（包括准确度、特异度、灵敏度和精确度）、软件程序的校准等，建立标准的质控程序。
4.注意控制实验室的温度、湿度和空气飘浮物，以免影响检测结果。
实验后阶段主要包括检测后样本的保存及处理、检测结果的审核与发出、与临床医师的沟通三个方面。流式细胞免疫表型检测结果的解释应充分结合临床资料、形态学、细胞遗传学和分子生物学等内容，综合分析，协助诊断和疗效评估，预后判断等。
（袁小庚）