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1.因尿路上皮癌行手术治疗的患者。
2.手术时可获得足够的尿路上皮癌肿瘤组织供免疫组化分析。
存在外科手术禁忌无法获得尿路上皮癌肿瘤组织的患者。
1.恒温箱、高压锅。
2.分子分型检测所需一抗：CK5/6、CD44、CK20、GATA3抗体。
3.免疫组化所需常规试剂：免疫组化用二抗、DAB显色试剂、乙醇、二甲苯、蒸馏水、过氧化氢、抗原修复液、山羊血清、中性树胶、PBS、苏木素。
1.具有免疫组化染色经验的病理技术员。
2.具有免疫组化结果判读经验的病理科医师。
1.脱蜡 将组织切片置于60℃恒温箱中烘烤30min→二甲苯Ⅰ中浸泡10min→二甲苯Ⅱ中浸泡10min。
2.水化 无水乙醇Ⅰ中浸泡5min→无水乙醇Ⅱ中浸泡5min→95%乙醇中浸泡5min→80%乙醇中浸泡5min→蒸馏水中浸泡5min。
3.去除内源性过氧化物酶 将组织切置于新鲜配制的3%的过氧化氢溶液中，避光孵育10min。
4.PBS洗3次，每次5min。
5.抗原修复 将组织切片置于EDTA抗原修复液（pH 8.0）中，采用高压热修复法进行抗原修复。
6.室温冷却后PBS洗3次，每次5min。
7.封闭 在组织切片上滴加山羊血清封闭液，室温封闭20min，然后将多余封闭液甩去。
8.一抗孵育 滴加相应浓度的一抗50μl，室温孵育1h。
9.PBS洗3次，每次5min。
10.二抗孵育 滴加二抗50μl，室温孵育1h。
11.PBS洗3次，每次5min。
12.DAB显色 滴加适量DAB显色液显色，在显微镜下观察以掌握染色深度，及时终止反应。
13.自来水轻柔冲洗后，PBS洗3次，每次5min。
14.苏木素复染 将组织切片置于苏木精染液中1min，然后自来水冲洗反蓝5min。
15.脱水 80%乙醇中浸泡5min→95%乙醇中浸泡5min→无水乙醇Ⅰ中浸泡5min→无水乙醇Ⅱ中浸泡5min。
16.透明 二甲苯透明浸泡20min。
17.封片 滴加少量中性树胶封片。
18.由病理科医师对染色强度和着色细胞比例进行结果判定，CK5/6+、CD44+为basal亚型；CK20+、GATA3+为luminal亚型。
19.泌尿外科医师依据分子分型结果制定诊疗方案 basal亚型患者预后较差，建议采用更为积极的治疗方案并且予以更加密切的随访，可优先考虑行新辅助化疗；luminal亚型患者如有条件，可酌情行免疫治疗。
1.既往尿路上皮癌诊疗方案制定较为粗放，主要依据临床病理信息进行危险分层及治疗方案选择，难以实现个体化治疗。
2.基础研究结果显示，基因水平变化与化疗、免疫治疗、靶向治疗的敏感性相关。
3.临床前期研究结果提示分子分型有助于临床医师对尿路上皮癌患者进行预后评估及治疗方案选择。
4.与管腔样（luminal）分型患者相比，基底样（basal）分型膀胱癌患者相对预后较差，但对新辅助化疗的敏感性较高。
5.采用免疫组织化学方法对尿路上皮癌进行分子分型也许是一条可供临床实施的途径，但尚需大规模、多中心临床随机对照实验对其进行验证。
（杜依青）