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腹腔镜手术必须有光源提供清晰明亮的腹腔内照明。目前，腹腔镜使用的光源均为冷光源。因其将隔热玻璃置于光源和灯泡之间，使进入光缆的光线强度不变，但产热少，故称之为“冷光源”。但需要注意的是，虽然冷光源导光束镜端的温度不高，但其长时间接触布类或患儿皮肤仍可引发高温燃烧或皮肤灼伤。为安全起见，在使用过程中最好将导光束连接腹腔镜后再打开冷光源。目前常用的冷光源有4种，分别为卤素灯、金属卤灯、氙气灯和低温弧光冷光源。氙气灯光源因其亮度强、光谱全、色温高（6 000K），光线更接近于自然光，而且能自动调节腹腔镜亮度，是比较理想的光源。其灯泡使用寿命可达2 000小时，可为获得腹腔内解剖结构的最佳成像质量和色彩提供最佳的照明。冷光源都装有备用灯泡，当第一只灯泡不亮时可立即切换到备用灯泡，以保证腹腔镜手术能继续安全顺利地进行。另外冷光源还具有待机模式，可以由处于无菌区的摄像头来控制，既能保护患儿和手术医生，又可延长灯泡的使用寿命。
导光束通常有玻璃纤维和液态水晶两种材质。每支玻璃纤维导光束一般直径4.8mm，是由万余根直径10～25µm的石英晶棒（光导纤维）外包低折射率的石英光学隔离层制成。由于光导纤维具有良好的全反射特性，当光线自冷光源发出，于导光束的一端射入，经由导光束内反复的全反射而由导光束的另一端射出时，光线强度不会因泄露而衰减。每种导光束须与其适用的冷光源及腹腔镜配套使用，且所有的连接处均应妥善固定，防止光线泄露及连接处滑脱。导光束应轻拿轻放，过度地弯曲或强烈地震动都可能造成石英晶棒的断裂，从而影响光线的传导，降低导光束的导光性能。当导光束内的石英晶棒折断后，可在其光线射出端出现相应的黑点。液态导光束内为液态水晶，不怕折曲，传导光线质量好而均匀，但不能采用高温高压方法消毒。