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干热灭菌器采用电阻丝或卤素电热管加热的方式加热空气，经风机使干热空气在消毒箱内循环，靠高温将箱内消毒物品中的微生物杀灭。干热灭菌的机理有干热高温使蛋白质变性、微生物受高温氧化作用而损伤、干热过程使微生物原浆中的电解质浓缩等3种学说。干热灭菌器在160℃条件下分别作用10min和40min可对嗜热脂肪杆菌（ATCC 7593株）和枯草杆菌黑色变种（ATCC 9372株）的芽孢均完全杀灭。160℃、120min，170℃、60min，180℃、30min可杀灭一般细菌芽孢。对细菌繁殖体、真菌和一般病毒，120℃、30min，干热灭菌器即可达到消毒效果。
干热灭菌器分为电热烘箱（图3-2）和干热空气灭菌箱。两者加热方法和加热器位置有所不同，前者采用底部加热和上、下层通风道，热空气对流较慢。后者采用底部和两侧加热的方法，整体风道、逆风循环、箱内壁设有热空气对流孔，热风对流迅速，升温迅速。
图3-2 干热灭菌器
根据干热灭菌器容积的大小又可将其分为不同的型号。
消毒物品不同，干热灭菌的效果不同。160℃条件下作用40min可对滑石粉、玻璃器皿、金属器械和纸等有效灭菌。
物品装量对温度升降时间和灭菌效果有影响，随物品装量增加，柜室内从室温升到所要求温度再降低的时间有所延长，从而影响消毒效果。
菌体外有机物的保护可使微生物更难于被干热杀灭。活性水是指微生物细胞或芽孢里面可利用的相对的水。如果微生物细胞或芽孢的含水量和周围环境的水分相平衡，则在理论上微生物的活性水等于外部的相对湿度。微生物的抗热力在干热（活性水<1.0）比在湿热（活性水=1.0）时强。在干热灭菌时，活性水=0.0～1.0，活性水越接近1.0，消毒效果越好。相对湿度指示微生物周围大气中水分的状况。湿热灭菌时相对湿度=100%（或1.0），干热灭菌时相对湿度<100%，可以是0%～100%之间的任何数值。相对湿度越高，灭活效果越好。
高温下不损坏、不变质、不蒸发物品均可使用干热灭菌器进行灭菌。玻璃制品、金属制品、陶瓷制品、油膏等消毒和灭菌可用干热灭菌器完成。外科手术器械中的手术刀、剪、镊、凡士林纱布、滑石粉，骨科用的锤、锯、钢针、骨夹板等，制药用品和药品如储存容器、转运、输送的金属器具、混合料斗、中成药、粉剂、颗粒、丸和制剂用的胶塞等，以及微生物实验室所用的器皿、吸管等的灭菌均可使用干热灭菌器完成。
打开电源，按要求设定时间、温度等技术参数。参数参考：160℃作用120min；170℃作用60min；180℃作用30min。
灭菌器箱体升温，同时风机运转去除冷空气。
当箱内温度达到设定值时，开始灭菌时间记录。
箱内加热系统停止后风机继续运行，转入空气自然降温状态。
当箱内温度低于80℃以下时，可开启箱门。
使用前认真阅读灭菌器说明书，按说明书进行安装、使用并定期维护。
1．为防止灭菌失败或污物碳化待灭菌物品，干热灭菌前消毒物品应充分洗净。
2．待消毒物品不宜重叠，避免与加热箱内壁接触，灭菌完成后须待箱内温度降至40℃方可开门，以防发生危险。
3．待消毒物品包装不宜过大，物品总高度勿超过灭菌器内室高度的2/3。为了利于热空气在物品之间对流，待消毒物品间应留有空隙，粉剂和油脂不宜太厚，一般为0.7cm，凡士林纱布一般不超过1.3cm，以利于热穿透。
4．灭菌时间的记录应从灭菌室内达到设定温度时开始计算。
5．为保证物品不受到微生物的二次污染，开门取物等操作应按无菌操作方法完成。