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12.cisAB06亚型鉴定1例

一、简要病史

患者,女性,35岁,因“幽门梗阻拟行手术治疗”入院,术前备血时发现ABO血型正反定型不一致。既往有妊娠史,无输血史,否认家族遗传性疾病史。

二、实验室检查

(一)血型血清学常规检查
1.血型鉴定

抗-A弱凝集,ABO正反定型不一致,RhD阳性,结果见表1-19。

2.抗体筛查

阴性。

(二)血型血清学特殊检查
1.DAT

阴性。

2.唾液血型物质检测

唾液中无A物质,有B、H物质,结果见表1-19。

表1-19 患者血型鉴定结果

(三)血型分子生物学检测
1.ABO血型基因PCR-SSP分型检测

ABO血型基因分型电泳见图1-21,初步判断患者 ABO 基因型为 B / O02 型。

2. ABO 基因第6~7外显子测序

参照ISBT红细胞免疫遗传学和血型术语予以 ABO 等位基因的命名,按惯例以 ABO * A1.01 等位基因标准序列为参考序列比对,存在6个碱基突变,分别是c.297A>G、c.657C>T、c.703G>A、c.796C>A、c.803G>C和c.930G>A突变。而与 ABO * B.01 基因序列比对仅在526位发生G>C的突变(c.526G>C),见图1-22。该位点的突变导致176位亮氨酸变成脯氨酸(p.R176G),其氨基酸与A基因相同。而此序列与 ABO * cisAB.06 基因的序列完全一致。该基因与各个 cisAB 基因突变点比较,见表1-20 [1]

图1-21 患者ABO血型基因分型电泳图
注:1~8:分别为O 1 、非O 1 、O 2 、非O 2 、B、非B、A 2 和非A 2 ;M:1000bp分子量标志物。

图1-22 A101 B101 cisAB06 等位基因的第7外显子部分测序结果
注:A: A101 等位基因;B: B101 等位基因;C: cisAB06 等位基因。箭头示526位碱基突变点。

表1-20 cisAB 基因的第6和7外显子突变位点

分子生物学检测结论:该样本基因型应为 ABO * cisAB.06 / O.01.02

三、诊疗经过

患者入院后第4天在全麻下行胃大部切除术,术中输注O型洗涤红细胞2U,未发生输血不良反应,手术过程顺利。术后给予对症支持治疗,住院15天后康复出院。

四、相关知识链接

ABO血型系统基因定位于9号染色体,由7个外显子和6个内含子组成,包含编码序列1062个碱基。 ABO * A1.01 ABO * B.01 两个等位基因高度同源,二者在氨基酸编码区仅有7个核苷酸的差异,其中c.297A>G、c.657C>T和c.930G>A均位于密码子的摇摆位置,不引起氨基酸的改变;c.526G>C(p.R176G)、c.703G>A(p.G235S)、c.796C>A(p.I266M)和c.803G>C(p.G268A)突变引起4个氨基酸的替换,从而使得酶特异性发生显著变化 [2] cisAB 基因和 B A )基因就是在常见的 A B 基因中发生1个或者2个碱基突变,使得A抗原有了一些B抗原的性质,或者B抗原有了一些A抗原的性质。

目前发现的 cisAB 的等位基因有7种,分别为在欧美发现的 ABO * cisAB.01 ABO * cis - AB.02 ABO *c isAB.03 等位基因,在中国台湾发现的 ABO * cis - AB.04 等位基因和在中国大陆发现的 ABO * cis - AB.01var ABO * cis -A B.05 ABO * cis - AB.06 等位基因 [2-4] 。中国人 ABO * cisAB.06 等位基因是2009年Zhu等首先报道,推测 ABO * cis - AB.06 等位基因应该在中国人群中较罕见 [3]

cisAB 表现型是一种独特的ABO表型,表现在同一等位基因的编码产物兼具A和B特异的糖基转移酶活性。 cisAB 血清学特征随着个体的不同、家系的不同而有所不同。 cisAB06 等位基因是在 ABO * B.01 等位基因的基础上保留了 ABO * A1.01 等位基因的526位C位点,相应的氨基酸组合为(176R、235S、266M和268A),即为ABBB单倍型组合的等位基因,与所发现的其他6种 cisAB 基因单倍型不同。Seto [5] 等通过构建基因突变体和原核细胞体外表达的方式,分别研究了AAAA、BAAA、BBAA、BBBA和BBBB 5种单倍型组合的糖基转移酶特异性和酶动力学,发现BAAA、BBAA和BBBA单倍型组合均同时拥有A型酶供体和B型酶供体催化功能。我们推测ABBB单倍型组合能够同时催化A型酶供体和B型酶供体,血清学表达A和B抗原。

五、案例点评

本案例患者ABO血清学正反定型不一致,进行了 SSP 基因分型检测,最终通过 ABO 基因第6、7外显子测序,其序列与ISBT发布的 ABO * cisAB.06 基因的第6、7外显子序列完全一致。由于样本有限,未对该样本A和B转移酶活性进行检测。但是通过血清学试验我们推测本例 cisAB06 的ABBB型重组酶催化A型酶活性比正常A型酶低很多,因此A抗原表达非常弱,出现类似于B(A)的血清学表现。我们根据文献扩增引物对E67-F和E67-R扩增内含子5-3’非翻译区基因片段,引物针对 A B 基因特异性设计,测序是1条单链结果,通过直接测序得 cisAB06 基因序列,结合PCR-SSP分型检测结果,判定该患者 ABO 基因型为 ABO * cisAB.06 / O.01.02 [6]

cisAB06 患者与其他 cisAB 患者输血原则一致,通常选择O型洗涤红细胞,紧急时可以考虑输注O型悬浮红细胞,如果患者没有抗-B,也可以考虑输注B型悬浮红细胞。凝血功能障碍时,通常输注AB型血浆和血小板。

参考文献

1.PAMAIK S K, HELMBERG W, BLUMENFELD O O. BGMUT: NCBI dbRBC database of allelic variations of genes encoding antigens of blood group systems[J]. Nucleic Acids Res, 2012, 40: 1023-1029.

2.YAMAMOTO F, MENEILL F D, KOMINATO Y, et al. Molecular genetic analysis of the ABO blood group system cis-AB alleles[J]. Vox sang, 1993, 64(2): 120-123.

3.ZHU F, TAO S, XU X, et al. Distribution of ABO blood group allele and identification of three novel alleles in the Chinese Han population[J]. Vox sang, 2010, 98(4): 554-559.

4.TZENG C H, CHEN Y J, LYOU J V, et al. A novel cis-AB allele derived from aunique 796C>A mutation in exon 7 of ABO gene[J]. Transfusion, 2005, 45(1): 50-55.

5.SETO N O, PALCIC M M, COMPSTON C A, et al. Sequential interchange of four amino acids from blood group B to blood group A glycosyltransferase boosts catalytic activity and progressively modifies substrate recognition in human recombinant enzymes[J]. J Biol Chem, 1997, 272(22): 14133-14138.

6.戚新,章旭,刘显智,等.一例ABO血型cisAB06亚型的基因序列分析[J].中华医学遗传学杂志,2013,30(2):172-175. xA9MZcJ65jNfCDAz9jc7mJPjAolkuWsEdh6vdZkUZu0qzlIfpQkCRon//ZiW615W

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