葡萄球菌属( Staphylococcus )细菌是革兰氏阳性球菌,常排列成不规则的葡萄串状。需氧或兼性厌氧,营养要求不高,最适生长温度为35℃,最适pH为7.4。其广泛分布于自然界,如空气、土壤、水等处。在人和动物的皮肤表面,以及鼻咽部、肠道也有本菌的存在。
葡萄球菌属目前分为39个种,21个亚种。引起人类疾病的菌种主要有金黄色葡萄球菌( S . aureus )、表皮葡萄球菌( S . epidermi dis)、头状葡萄球菌( S . capitis )、人葡萄球菌( S . hominis )等。根据能否产生凝固酶,将葡萄球菌分为凝固酶阳性葡萄球菌(主要为金黄色葡萄球菌)和凝固酶阴性葡萄球菌两类。
金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上生长,菌落呈金色或黄色,菌落周围可见完全透明的溶血环。金黄色葡萄球菌,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillinresistant Staphylococcus aureus ,MRSA)可定植于正常人体皮肤和鼻咽部。其中医务人员带菌率可高达70%以上,是医院内交叉感染的重要来源。中国细菌耐药监测网(China Antimicrobial Surveillance Network,CHINET)2018年度耐药监测数据显示,全国共22 147株金黄色葡萄球菌中MRSA检出率为34.0%。医护人员应重视手卫生,切断接触传播的途径。加强医院感染相关知识的教育,提高医护人员的意识,做到早发现、早隔离、早治疗。
金黄色葡萄球菌可产生多种酶,如血浆凝固酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等,还能产生多种毒素,如葡萄球菌溶素、杀白细胞素、肠毒素表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1等。
金黄色葡萄球菌侵袭人体可导致化脓性感染,如毛囊炎、疖、痈、伤口化脓、蜂窝织炎等。还可引起肺炎、心内膜炎、肾盂肾炎、肾脓肿等多器官的化脓性疾病。重症患者还可发展成为化脓性脑膜炎、脓毒症和脓毒血症。其产生的外毒素可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征和中毒性休克综合征。由MRSA引起的严重感染死亡率可达10%~30%。
根据感染部位的不同,可采集脓液、创伤分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液及粪便等。皮肤感染由于取材易被皮肤正常菌群污染,甚至出现多种细菌并存的培养结果,病变部位取样应注意采用不同的方法。①浅表、开放性脓疱和创口感染:清创后,使用拭子在创口涂抹;②蜂窝织炎和丹毒:穿刺针抽吸组织取样,但培养阳性率较低;③复杂性皮肤软组织感染:用组织活检、穿刺针抽吸、外科手术等方法取深层组织进行培养。
除血液外的无菌体液,如脑脊液离心后涂片行革兰氏染色镜检,发现革兰氏阳性球菌成堆排列,有诊断价值。
采集合格标本后,培养18~24h可形成直径1~3mm的菌落。典型菌落光滑、边缘整齐、突起、有色素,有明显的透明溶血环。
针对金黄色葡萄球菌种属特异性基因(如 coa , nuc )和甲氧西林耐药基因( mecA )可以使用多重PCR直接从标本中检测MRSA。针对疑似MRSA感染暴发的菌株可以进行分子同源性分析。
利用自动药敏系统、纸片扩散法、E-test法等可进行药敏实验。
凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative Staphylococcus ,CNS)是存在于健康人皮肤、口腔及肠道的正常菌,之前一直被认为无致病性,从血培养中分离出的该菌大多被认为是污染菌。但是随着介入诊疗技术、免疫抑制剂、广谱抗感染药物的广泛应用,该菌种引起的感染日益增多。导管相关性感染与CNS关联度很大,患者感染会导致高昂的临床成本。
CNS中最常见的是表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌引起的感染,是体内异物引起感染的主要原因,可引起菌血症、心内膜炎、导管相关感染等。此外,腐生葡萄球菌常可引起泌尿道感染、前列腺炎、伤口感染及菌血症。
同葡萄球菌属各类相关检查。
链球菌属( Streptococcus )细菌广泛分布于水、空气、尘埃,人及动物粪便和健康人的鼻咽部、肠道等,大多数为正常菌群,并不致病。本菌属细菌多为需氧或兼性厌氧菌,有氧环境中比厌氧环境对生长更有利。
链球菌属的细菌种类较多,根据在血琼脂平板上溶血现象的不同,可分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌和丙型溶血性链球菌。而根据链球菌细胞壁中多糖抗原(c抗原)的不同,可分为A~H、K~V共20个群。对人有致病性的主要是A群。
最常见,是引起化脓性感染的主要菌种。侵入宿主组织,可引起皮肤及皮下组织化脓性感染、淋巴组织感染和咽喉部感染等。其产生的外毒素还可引起猩红热,临床特征为发热、咽峡炎以及全身弥漫性皮疹。部分A群链球菌在引起扁桃体炎后,经过一定时间(2~3周)可发生风湿热,并可引起心肌和瓣膜损伤等变态反应性疾病,亦可引起急性肾小球肾炎。
主要为无乳链球菌,是新生儿脓毒症和脑膜炎的常见病原菌。常定植于下呼吸道、泌尿生殖道和肠道,可经产道或呼吸道感染引起相关疾病。
通常定植在口腔和牙龈缝隙中,在拔牙或切除扁桃体时,细菌侵入血流引起菌血症,并可在心脏损伤部位定植,引起亚急性细菌性心内膜炎。
主要寄生于人类的上呼吸道,40%~70%正常人的鼻咽部均有此菌定植。大多数菌株不致病,或致病力很弱。部分有致病力的菌株主要引起肺炎,也可以伴有菌血症。此外,该菌还可以引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎和心内膜炎等。
根据感染部位不同,采集咽拭子、痰液、脓液、血液、脑脊液等标本,对于妊娠35~37周的女性可以采集生殖道拭子。大多数链球菌对环境比较敏感,采集标本后应尽快送检及时接种,延迟接种可能使细菌的分离率下降。
菌体形态为圆形或卵圆形,直径为0.6~1.0μm,成对或链状排列。其中肺炎链球菌可见矛头状、钝端相对、成双排列的菌体,在血琼脂培养基上培养可形成明显的荚膜。
该属细菌营养要求较高,在含血清、葡萄糖的培养基中才能生长。在血琼脂平板上形成灰白色、表面光滑、凸起、边缘整齐、直径0.5~0.75mm的小菌落。不同菌株有不同的溶血现象。根据溶血特征、生化反应、血清学试验可进一步鉴定。
乳胶微粒凝集试验、协同凝集试验、对流免疫电泳试验及酶联免疫试验等可以用于链球菌的直接抗原检测。
单链化学发光核酸探针测定适用于从咽喉部分离的化脓链球菌的快速检测,通过测定特定的rRNA序列,其灵敏度和特异性较高。无乳链球菌也可以通过实时荧光定量PCR技术进行快速检测。
利用自动药敏系统、纸片扩散法等行药敏实验,药敏试验方法和解释标准参考CLSI相关文件。近年来,青霉素耐药的肺炎链球菌逐年增多,临床实验室正确检测并报告肺炎链球菌对青霉素的敏感性非常重要。
肠球菌属( Enterococcus )广泛分布于自然界中,是空气、水、尘埃、人及动物粪便以及健康人上呼吸道的常驻细菌,迄今有40多个种,其中粪肠球菌和屎肠球菌在临床标本中最为常见。本菌属细菌为需氧或兼性厌氧菌,多数菌种为短链状排列,一般无芽孢、无荚膜,最适生长温度为35℃,在10℃、45℃和pH 9.6条件下均可生长,大部分菌株在60℃能生存30min。肠球菌属细胞壁厚,对多种抗菌药物固有耐药。固有耐药由染色体介导,包括β-内酰胺类、克林霉素、磷霉素等抗感染药物;而获得性耐药及毒力特性常由转座子或质粒编码,即可由突变产生,或通过转座子上编码的耐药基因、信息素应答质粒和其他广泛分布于宿主的质粒交换而获得耐药性。万古霉素耐药肠球菌属(vancomycin-resistant Enterococcus ,VRE)表型和基因型可分为 van ( A 、 B 、 C 、 D 、 E 、 G 、 L 、 M 、 N )9型,其中 van ( A 、 B 、 D 、 L 、 G 、 M 、 N )属于获得性耐药,而vanC和vanE型则属先天性耐药。
在革兰氏阳性球菌中,肠球菌是仅次于葡萄球菌属的重要院内感染致病菌。肠球菌主要感染具有基础疾病的老年人、长期住院患者、安装植入性装置者,以及接受广谱抗感染药物治疗的患者。泌尿系统感染是肠球菌引起的最为常见的感染。肠球菌亦可引起腹腔、盆腔和伤口感染以及菌血症、心内膜炎等,严重时可导致脓毒症。在分离的肠球菌中,粪肠球菌占绝大多数,其次为屎肠球菌。
根据患者临床表现、感染部位,采集血、尿、穿刺液等标本。标本转运无特殊要求。
该菌属细菌为革兰氏阳性球菌,菌体呈球形或卵圆形,多呈短链状排列。
在血琼脂平板上35℃培养18~24h,形成较小、灰白色、湿润、凸起的菌落。
利用自动药敏系统、纸片扩散法等行药敏实验。主要检测氨苄西林、青霉素,达托霉素、利奈唑胺、万古霉素以及高浓度庆大霉素和链霉素的敏感性。