第四节
分子生物学检查

分子生物学是利用分子生物技术和方法研究机体分子体系的结构、表达调控变化，从而为疾病的预防、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据的一门学科。

包虫生活史复杂，同一包虫的不同种株、同一种株的不同发育阶段、寄生的不同组织、甚至外环境的改变等，都可造成包虫基因表达的改变。目前有关包虫病分子生物学的研究还处于起步阶段，主要集中于包虫单个基因的序列及其功能上的研究。

一、聚合酶链反应技术

特点：高特异性、高灵敏性、快速简便性。

1.免疫聚合酶链反应（immuno-polymerase chain reaction，immuno-PCR）

（1）原理：

免疫PCR是一种抗原检测系统，可通过选择不同的引物和生物探针，将某个已知序列的DNA片段标记到相关抗原抗体复合物上，再将这段DNA扩增后对PCR产物进行常规检查。

（2）评价：

临床针对细粒棘球蚴和泡状棘球蚴感染病例均采用免疫PCR法鉴别，检查泡型包虫特异mRNA。免疫PCR识别一抗和二抗的灵敏度高达10 ⁸ ，与酶联免疫吸附试验和酶免疫法等传统方法相比，提高了囊型和泡型包虫病鉴别诊断的特异性和敏感性。

2.实时荧光定量聚合酶链反应（real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，real-time fluorescence PCR）

（1）原理：

实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，监测整个PCR过程，利用仪器对荧光信号的累积计算，最后通过特定数学原理对未知样本进行准确、快速的核酸定量分析的方法。

（2）评价：

该技术是定量研究基因表达水平最为有效的方法之一，为包虫病特异基因筛选提供有利的技术支撑。

二、分子杂交技术

1.分子杂交（molecular hybridization）

是利用核酸变性和复性的性质，在一定条件下使具有同源序列的两条单链核酸（包括DNA-DNA、DNA-RNA、RNA-RNA）按碱基互补原则进行特异性结合，形成相对稳定的异质双链的过程。常用于检查、分离特定的核酸序列，评价单、双链核酸分子的同源性或其他特性。主要包括印迹杂交技术、斑点杂交技术、荧光原位杂交技术、基因芯片技术和抑制差减杂交技术等。

2.抑制差减杂交技术（suppression subtractive hybridization，SSH）

（1）原理：

SSH是基于抑制PCR和差减杂交技术建立的简单有效的实验方法，通过cDNA变性后再复性的过程中，使原来在丰度上有差别的单链cDNA达到均一化，在杂交过程中只有目标序列有效扩增，非目标序列退火时产生“锅柄”结构，扩增受到抑制。

（2）评价：

该技术在寄生虫学研究中主要应用在：①寻找与寄生虫不同发育阶段相关的差异表达基因；②寻找与寄生虫抗药性相关的差异表达基因；③寄生虫其他相关基因的研究。在细粒棘球绦虫发育过程中，可通过此技术得到不同发育期差异表达的基因，并将这些基因用于诊断和防治包虫病，提高包虫病诊治的效果。

目前，包虫病的实验室检查在包虫病的筛查诊断中广泛应用。但在血清学检查中，流行地区部分健康人也可检出低滴度的抗体，因而血清阳性率高于患病率。这是因为居民在受到虫卵的感染后，仅有一部分人发展成为包虫患者（成功的感染），多数人在不成功地感染后不发病，但在血清中出现低滴度抗体。因而抗体阳性率反映的是居民遭受虫卵感染的水平（过去或现在的感染），而不能代表感染后是否真正发病，需要结合影像学检查进一步明确诊断。

（任卫全　唐桂波） MnM5JM2jUCPouOun/+zy8mnuRLG8NQXce1L59iPGtO2LIzuYM9a0qWVrQxMwi8f1