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能否预防手术切口感染，除了严格做到器械及物品的灭菌、消毒外，手术人员刷手、术区消毒、铺单、穿无菌手术衣、戴无菌手套等都必须符合无菌原则。为避免手术感染而为手术提供一个无菌操作环境，还需要有一定的规章来保持术中已经建立的无菌环境。这种手术人员都必须认真执行的规章称无菌操作规程。
1.手术人员一经洗手消毒并穿无菌手术衣、戴无菌手套后，严格区分无菌区和非无菌区，不准再接触未经消毒的物品，脐平面以上，乳腺平面以下，两侧腋前线至胸前区为无菌区。背部、腰部以下、肩部以上应被视为非无菌区，手术台边缘以下台单也是非无菌区，均不能接触，手和前臂不可垂至腰部和手术台以下。
2.手术切口边缘应以干的大纱布或手术巾遮盖保护，切开皮肤、皮下组织后，因皮肤断面的细菌比皮肤表面的要多，故切口边缘需用无菌纱布垫遮盖。尤其在有污染的手术、肿瘤切除术，更应注意保护切口。目前，大多数医院采用术前贴无菌贴膜可达到相同目的。
3.术中如手套破损或接触到有菌的地方，应更换无菌手套。如前臂或肘部触碰有菌的地方，应更换无菌手术衣或加套无菌袖套。
4.手术人员在术中调换位置，其中一人应退后一步，转身后以背靠背方式调换。
5.手术开始前及缝合切口前均应清点各种手术用品，特别是纱布、缝针等，以免异物遗留腔内，产生严重后果。
6.在手术过程中只允许在无菌区操作，接触非无菌区即认为被污染。而台下人员则应充分注意无菌区，也应避免接触和跨越无菌区。不可在手术人员背后传递器械和物品，坠落到无菌巾或手术台以外的器械和物品不得拾回再用。
7.做皮肤切口及缝合皮肤前，或延长切口前，均需用70%乙醇再涂擦消毒皮肤一次。
8.切开空腔脏器前，要先用纱布垫保护周围组织，防止或减少污染。被污染的器械、物品不能重复用于无菌区。如因故手术需要暂停进行时（如等待病理冷冻切片报告），切口应用无菌巾覆盖。术中进行X线拍片、造影或患者躁动时，应注意保护无菌区不被污染。
9.每个手术间参观人员不得超过2人，不可太靠近手术人员或手术台面，不可经常在室内走动，更不可到其他手术间去，以减少污染和交叉感染的机会。
10.不应开窗或开门通风或用电扇吹风，室内空调机风口也不应吹向手术台，以免扬起尘埃，污染手术室内空气及术野。