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牛冻精冷配技术是一项先进的人工繁殖技术，1952年在英国研究成功，1972年我国开始研究和推广冷冻精液技术，1976年我省首次在我市会泽县开始这项技术的推广工作，并取得成功。在实践中，冻精冷配与常温精液配种效果不相上下，且在公牛的利用上，冻精冷配不受时间、地域和种畜生命的限制，摆脱了种公牛有限的年配种次数、昂贵的饲养成本和疫病的困扰。牛冻精改良技术的推广，克服了良种公牛与母牛地域相隔的问题，大大增加了良种公牛的配种数，降低了配种成本，减少了疾病的传播，几十年来为全市的养牛业发挥了巨大的技术支撑作用。
图3－2 直肠把握输精示意图
牛冻精改良技术是利用良种公牛的冷冻精液通过输精枪对发情母牛进行人工授精，使其受孕，以提高后代生产性能的一种技术。到场输精技术，是与常规的拉母牛到配种站输精方式不同的一种冷配技术，即基层输精员接到养殖户的预约后上门开展配种服务，把所需品种公牛细管冻精解冻后经简单包装，在不依靠液氮设备的情况下进行一定时间（解冻冻精至输精完毕时间一般不超5小时）、一定距离的运输后到养牛场点为发情母牛进行输精的技术。与传统的由农户将发情母牛牵拉到改良站点来进行输精配种相比，到户输精解决了边远山区因交通原因不便牵牛到站配种的问题，使牛冻精改良站点的有效配种辐射半径从3～5千米扩大至数十千米，增加了改良配种数量，扩大了改良配种范围和配种面。
1.冻精的保存
冻精应经常贮藏在装有足够液氮的液氮罐中，并由专人管理，管理人员应熟悉容器的空重和装满液氮时的重量（1升液氮＝0. 808千克），每周定时称重2次，同时做好消耗记录。容器内的液氮要淹没冻精，一般液氮不足液氮罐总容量1／3时应及时补充。在贮存中，若发现液氮消耗显著或容器外壳挂霜，应及时更换容器。要尽量减少开启容器盖塞次数和每次开罐时间，防止异物和空气中的水分进入容器，避免液氮消耗。在运输中应小心轻放，不可碰撞、冲击、倾斜、倒置和重叠堆放，应加保护装置、软垫，适当加以固定，以免颠簸冲撞。
2.解冻
解冻就是在极短时间内把贮藏在液氮罐内的冻精恢复到常温状态下的过程。冻精解冻也是整个冷配过程中不可忽视的一个重要环节，要牢牢把握“四快”（快取、快投、快溶、快输）原则，使精子快速通过精子水分冰晶化的有害温度区范围（－40℃～0℃，尤以－30℃～－10℃的区间为主），并尽量减少污染的机会，保证精液解冻后有较高的活力。
（1）取放冻精。在取放冻精时，只能将盛冻精的提筒或其他冻精包装物提到容器颈基部（10厘米以下），不得提到容器外，若在10秒钟内尚未取放完时，应将提筒或其他冻精包装物放回液氮中浸泡一下继续取放。当贮存的冻精需要向另一容器转移时，在容器外的停留时间不得超过5秒，如需时间过长，应浸泡在盛装液氮的容器中处理。所有冻精应按原种公牛的批号存放，注明品种标签，严禁混杂。液氮罐每年要清洗一次。液氮罐倒放2～3天后，温度在0℃以上，此时可使用中性除垢剂、软布擦拭，晾干即可。
（2）解冻冻精。可用水浴法解冻或用铝饭盒内装38 ± 2℃温水，迅速取出所需配品种的细管于温水中轻轻摇动5～8秒，取出即可。有破损或封口不严的应弃去，重新解冻一支；或用现场输精的解冻方法解冻后常温保存运往输精地点，尽快输入母牛生殖道内。
发情鉴定的目的是及时发现发情母牛，正确掌握配种时间，防止误配、漏配，提高母牛受胎率。由于是异地输精，站点输精员不能直接观察到母牛的发情情况，养殖人员对发情母牛发情时间的掌握相当重要，饲养员准确掌握母牛发情时间，可以减少输精员不必要的往返和冻精的浪费，因此在平时需加强对养殖场的饲养员进行关于母牛发情技术鉴别的培训，让其在生产中能准确掌握母牛发情时间，提高母牛受胎率。
1.外部观察法
外部观察法主要是根据母牛的外部表现来判断发情状况，此法是养殖户最容易掌握的。母牛发情时表现出兴奋不安、食欲减少、尾根举起、抬头张望、鸣叫、频频排尿、呆立，追逐和爬跨其他母牛并接受其他母牛爬跨，外阴部红肿，从阴门流出黏液等特征。根据特征，发情期限又可分为初期、中期、末期三个阶段。
发情初期：母牛眼光锐利。用手按压母牛十字部，该牛摆动耳朵并回头观看，表情温顺。阴门外有黏液流出，性状较黏稠，垂涎很长而不断。
发情中期：母牛发情开始数小时后转入中期，这也是发情的最盛期。母牛性冲动很强烈，一边爬其他牛一边接受其他牛爬跨。放养的母牛，背腰部附近有被其他牛爬跨留下的痕迹，如蹄迹，伤痕、泥土、脱毛或被毛不自然地倒向一边。母牛尾根部附着黏液，流出的黏液较透明且拉得很长，但中途断裂。用手按压十字部，母牛表现凹腰，高举尾根。
发情末期：母牛接受爬跨，但精神表现安定一些。黏液量减少，稍白而混浊。这个时期母牛卵泡膜变薄，突出卵巢表面，继而排卵。这时母牛开始低头吃草，虽然有时爬跨其他牛，但不接受其他牛爬跨。手按压十字部，尾不上举，尾部紧贴阴门。母牛外阴部渐渐变干，皱纹开始复原，沟纹重新出现。
整个发情期（初、中、末）持续13～17小时，最短数小时，最长达36小时。大约有60％的母牛，发情出现在安静的夜间至清晨，其余的40％发生在清晨至夜间。从早到晚，既有发情结束的牛，又有开始发情的牛，也有处于发情高潮的牛，我们可在早、午、晚（睡觉前）观察三次，基本上可消除漏配现象。
2.阴道检查法
阴道检查法是用阴道开膣器打开母牛阴道，观察阴道黏膜、分泌物和子宫颈口的变化来判断母牛发情与否。母牛不发情时阴道黏膜苍白、干燥，子宫颈口紧闭。发情前期母牛阴道黏膜微红，有少量（或没有）黏液排出，插入开膣器时有抵触（涩滞）感。母牛发情时，插入开膣器无抵触感，阴道黏膜充血、色红，表面光亮湿润，有透明黏液流出，子宫颈口充血、松弛、开张，有黏液流出。黏液开始时较稀，随着发情时间的延续，黏液逐渐变稠，量也由少变多。发情后期黏液量逐渐减少，变得黏稠、稍混浊。
3.直肠检查法
直肠检查法是把手臂伸入母牛直肠内，隔着直肠壁触摸卵巢上卵泡发育的情况来判断母牛发情与否。母牛的卵泡发育可分为三期。
第一期（卵泡出现期）：有卵泡发育的一侧卵巢，体积增大。卵巢上卵泡发育的地方为软化点，波动不明显，卵泡直径约有0. 5厘米。此时母牛发情不明显，相当于发情前期和发情的初始阶段。
第二期（卵泡发育期）：卵泡进一步发育，直径为1～1. 9厘米，呈小球形，部分突出于卵巢表面，波动明显。此时相当于发情的中期至末期，母牛发情表现由强到弱。
第三期（卵泡成熟期）：此期卵泡体积增大，卵泡液仍增多，胞壁变薄，紧张性增强，波动明显。直肠检查时有一触即破之感。此时母牛发情表现并没有完全结束，相当于发情中后期，大约需经3～6小时发情表现才结束。此期直检易使卵泡破裂，而卵泡破裂后，由于输卵管伞的状态受到干扰，卵子不能进入输卵管伞而不能受胎，所以此时饲养员应小心检查。
母牛多数在发情表现消失后12～15小时排卵。在排卵前数小时，卵泡变软并有波动，这就是排卵的信号。排卵时卵泡液流失，泡壁变为松软，形成大的凹陷。排卵后6～13小时黄体开始生成，此时可以摸到稍微突出于卵巢窝表面质地较硬的黄体。
母牛发情持续时间一般为6～18小时，卵子从卵巢中排出大约在母牛站立发情结束后10～12小时，成熟卵泡排出卵子到达受精部位（输卵管壶腹部）需要6～16小时，卵子在受精部位存活时间为4～6小时，精子输入后到达受精部位需要2～3小时，精子在受精部位存活时间为20～48小时。按此推算，最佳输精时间应该是在观察到母牛站立发情后的20小时内。
当然，在具体操作中有一个很简单的指南可以保证大部分母牛在正确的输精时段上（上下午规则）：
第一次看到母牛在早上发情，输精时间为下午或傍晚。
第一次看到母牛在下午或傍晚发情，输精时间为第二天早上。
如果看到母牛流出带血黏液，表明母牛离发情还有48小时或已经太晚，此时进行输精则太迟。实际操作中饲养员应根据母牛阴道分泌物的黏度来把握输精的时机，分泌物从阴门排出后形成掉线状，如掉线状分泌物过清且排出阴门即流掉表明输精尚早，需等到分泌物浓稠到流到阴门口约10厘米处时不会自行掉下且会随着尾巴的摆动而粘在阴部的周围，此时为最佳的输精时间。初产母牛在这个时候还可往后推3～4小时再输精。
1.母畜的准备
将发情母牛牵入保定架内保定好，拴好或拉开牛尾巴，清洗消毒外阴部和肛门周围。输精员将手伸入母牛直肠掏出宿粪，再清洗消毒母牛外阴部并擦干净。
2.输精员的准备
剪短指甲并磨光，手臂洗净，涂上润滑剂或带上一次性长臂手套。
3.精液的准备
当使用细管冻精时，输精员先垂直捏住解冻后的细管，用剪刀在细管封装机封口的一端轻打几下，使气泡尽可能升到这一端的顶点。然后把细管放入输精枪内试一下，用已消毒的细管专用剪在封装机封口的一端沿气泡中间剪一个90度的切口（剪口要平，断面要齐）。细管最后突出输精枪的长度应与输精枪外套中的蓝色（或其他颜色）的活塞长度相吻合，留得过短，输精时精液会泄漏、回流或滞留在输精枪或外套内。再套上保持套（外套），朝螺丝拧紧方向拧紧，有卡环的应注意卡紧卡环以防输精时连细管一齐脱落。然后放入磁盘，盖好备用，严禁随意摆放造成污染。
4.输精
母牛最佳冷配输精部位在子宫体基部，过浅易导致精液回流，过深则易损伤子宫内黏膜或使精子向子宫角和输卵管一侧运行而错过另一侧的机会。目前最好的输精的方法是直肠把握输精。先把发情母牛保定在配种架内，输精枪插入子宫颈内口后，将输精枪退后0. 1～0. 3厘米再推送精液，以防皱褶堵塞枪口使精液倒流。推精速度不宜过快，一边推一边缓慢退输精枪，一定要将精液推入子宫体内。每次输完精后，应检查输精枪或外套内有无精液残留，如果残留较多应重输，并及时将输精枪等输精器械清洗干净并消毒，做到一畜一具一消毒，以确保人工授精卫生安全。如果使用一次性输精外套，必须每输一头更换一次。
5.输精要领
配种员用一只手的食指和拇指轻轻打开阴门，另一只手持输精枪由阴门斜向上45°角先插入一段，避开尿道口后再水平插入阴道，一直插到子宫颈口。然一只手插入母牛直肠，握住子宫颈进口处，或把子宫颈压迫固定在骨盆腔侧壁，两手配合，尽量封闭子宫穹隆，把输精枪尖端引入子宫颈管内，再往里插，穿过3～4道螺旋状软骨组织就可到达子宫体（距子宫颈内口1～2厘米）内，此时可注入精液。
（1）在手握子宫颈时，如果肠壁绷得太紧，不要硬抓，要按摩或轻轻振触肠壁，等它松弛后再握住子宫颈管。如果子宫颈管过粗或过细难握住，可将子宫颈压住或用手扶按在骨盆侧壁或下壁上再插入输精枪。
（2）在插入输精枪时，手要轻握输精枪后部并随牛体移动。如果阴道皱褶挡住输精枪，不要往里硬插，要转动输精枪，调整方向，并用直肠里的手按摩或牵引子宫颈，拉直阴道皱褶，以便插入。
（3）当输精枪对不准子宫颈口时，检查手是否把握过前，造成子宫颈口游离下垂，若是则应及时纠正。如果输精枪偏离子宫颈外口，就要退回输精枪，再用直肠内手的拇指定位引导。
（4）输精枪一定要穿过3～4道螺旋状软组织，如果有阻拦，要转动输精枪，调整枪头的方向往里插，必要时两手配合，达到子宫体，距子宫颈内口1～2厘米的地方才可输精（达到时再往前推没有阻力）。
（5）在准备注入精液时，要把输精枪稍微往后拉一下，避免枪口被阻。输完精液后，缓慢退出输精枪。检查手做轻微按摩后缓慢抽出。要检查输精枪头，如果发现有大量精液残留在枪内，应重输。