第四节
牛膝配方颗粒质量标准研究

一、牛膝配方颗粒质量标准草案

牛膝配方颗粒　Niuxi Peifangkeli

【来源】

本品为苋科植物牛膝 Achyranthes bidentata Bl.的干燥根经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。

【制法】

取牛膝饮片1 500g，加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏，加辅料适量，干燥，干浸膏出膏率范围为38%～55%，再加辅料适量，混匀，制粒，制成1 000g，分装，即得。

【性状】

本品为浅黄色至棕黄色的颗粒；气微，味微甜而稍苦涩。

【鉴别】

取本品3g，研细，加80%甲醇50ml，加热回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml，微热使溶解，加在D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为15cm）上，用水100ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇100ml洗脱，弃去洗脱液，继用80%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80%甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取牛膝对照药材3g，加水100ml，煮沸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80%甲醇50ml，同法制成对照药材溶液。再取 β -蜕皮甾酮对照品、人参皂苷Ro对照品，加甲醇分别制成每l ml含l mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述四种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸（7：3：0.5：0.05）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】

应符合颗粒剂项下有关的各项规定（《中国药典》2015年版四部通则0104）。

【特征图谱】

照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（100mm×2.1mm，1.6μm）；以乙腈为流动相A，以0.05%甲酸溶液为流动相B，按表8-4-1中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为40℃；检测波长为270nm。理论板数按 β -蜕皮甾酮峰计算应不低于10 000。

参照物溶液的制备

取牛膝对照药材约0.5g，置具塞锥形瓶中，加入30%甲醇10ml，加热回流30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。另取 β -蜕皮甾酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，作为对照品参照物溶液。

供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约0.2g，置具塞锥形瓶中，加入水10ml，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法

分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各1μl，注入超高效液相色谱仪。测定，即得。

供试品色谱中应呈现4个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的4个特征峰保留时间相对应（图8-4-1、图8-4-2），与 β -蜕皮甾酮参照物峰相应的峰为S峰；计算各特征峰与S峰的相对保留时间，应在规定值的±10%范围之内；相对保留时间规定值为：0.197（峰1）、1.033（峰 3）、1.060（峰 4）；计算峰 4 与峰 3 的峰面积比值，不低于 1.0。

【浸出物】

取本品研细，取约2g，精密称定，精密加入乙醇100ml，照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（《中国药典》2015年版四部通则2201）测定，不得少于8.0%。

【含量测定】

照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-甲酸（16：84：0.1）为流动相；流速为每分钟0.3ml；柱温为35℃；检测波长为250nm。理论板数按 β -蜕皮甾酮峰计算应不低于4 000。

对照品溶液的制备

取 β -蜕皮甾酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水10ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，每1g含 β -蜕皮甾酮（C ₂₇ H ₄₄ O ₇ ）应为0.43～1.35mg。

【性味与归经】

苦、甘、酸，平。归肝、肾经。

【功能与主治】

逐瘀通经，补肝肾，强筋骨，利尿通淋，引血下行。用于经闭，痛经，腰膝酸痛，筋骨无力，淋证，水肿，头痛，眩晕，牙痛，口疮，吐血，衄血。

【用法与用量】

供配方用，遵医嘱。

【规格】

每1g配方颗粒相当于饮片1.5g。

【贮藏】

密封。

二、牛膝配方颗粒质量标准草案起草说明

本研究以大生产三批牛膝配方颗粒样品进行质量研究，根据国家药典委员会《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求（征求意见稿）》的要求，依据《中国药典》2015年版一部“牛膝”项以及前研究牛膝标准汤剂质量标准为研究基础，建立符合牛膝标准汤剂质量要求的牛膝配方颗粒质量标准。

（一）药品名称

药品名称：牛膝配方颗粒

汉语拼音：Niuxi Peifangkeli

（二）来源

本品为苋科植物 Achyranthes bidentata Bl.的干燥根经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。

（三）制法

牛膝配方颗粒的研究以标准汤剂为对照，以出膏率、指标成分含量和转移率、特征图谱的一致性为考察指标，通过单因素实验，确定了提取、固液分离、浓缩、干燥、成型工艺，通过三批中试的验证，考察了牛膝中间体及成品制备过程中的量值传递和物料平衡，最终确定了牛膝配方颗粒的制备工艺。

（四）性状

根据三批牛膝配方颗粒样品的实际性状描述，暂定本品性状为：本品为浅黄色至棕黄色的颗粒；气微，味微甜而稍苦涩（图8-4-3）。

（五）鉴别

参照《中国药典》2015年版一部牛膝【鉴别】项下方法制定，选用牛膝对照药材人参皂苷R ₀ 对照品、 β -蜕皮甾酮对照品作对照，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸（7：3：0.5：0.05）为展开剂，按正文鉴别项下方法操作，结果供试品在与对照药材及对照品相应位置上有对应斑点（图8-4-4）；经试验验证，方法重现性好，因此将该方法收入正文。

（六）检查

1．常规检查

按《中国药典》2015年版四部通则0104颗粒剂项下规定，对牛膝配方颗粒的粒度、水分、溶化性、装量差异、微生物限度进行了检查，规定如正文。

2．其他检查

（1）重金属及有害元素：

按《中国药典》2015年版四部通则2321铅、镉、砷、汞、铜测定法（电感耦合等离子体质谱法）操作，采用电感耦合等离子体质谱仪对三批本品进行铅、镉、砷、汞、铜的测定，结果见表8-4-2。

根据《中国药典》2015年版对中药材重金属及有害元素的一般规定，除矿物、动物、海洋类以外的中药材中，铅不得过5mg/kg；镉不得过0.3mg/kg；砷不得过2mg/kg；汞不得过0.2mg/kg；铜不得过20mg/kg。由表8-4-2可见，三批牛膝配方颗粒重金属及有害元素均符合药典规定的限度。暂不纳入标准正文中。

（2）有机氯农药残留量：

按《中国药典》2015年版四部通则2341农药残留量测定法（第一法有机氯类农药残留量测定法-色谱法）中9种有机氯类农药残留量测定法操作，采用气相色谱仪对本品三批进行9种有机氯类农药残留量测定，测定结果表8-4-3。

根据《中国药典》2015年版对中药材有机氯类农药残留量的一般规定，六六六（总BHC）不得过0.2mg/kg；滴滴涕（总DDT）不得过0.2mg/kg；五氯硝基苯（PCNB）不得过0.1mg/kg。由表8-4-3可见，三批牛膝配方颗粒中有机氯农药残留量均符合药典规定的限度。暂不纳入标准正文中。

（七）浸出物

按醇溶性浸出物测定法（《中国药典》2015年版四部通则2201浸出物测定法）项下的热浸法测定，对三批牛膝配方颗粒进行测定，测定结果为22.50%、16.69%、28.82%。在《天津市中药配方颗粒质量标准》牛膝项下无浸出物的标准规定，《广东省中药配方颗粒标准》（第二册）牛膝项下浸出物的含量标准下限为8.0%，本次仅测定了三批样品数据，缺乏样品的代表性，参考《广东省中药配方颗粒标准》（第二册）牛膝配方颗粒的要求，并结合广东一方制药有限公司的历史数据，暂定牛膝配方颗粒醇溶性浸出物不得少于8.0%。

（八）特征图谱

本研究将以牛膝标准汤剂特征图谱标准为依据，对牛膝配方颗粒特征图谱进行研究。

取三批牛膝配方颗粒（批号：NX-C-01、NX-C-02、NX-C-03），按特征图谱中项下供试品溶液制备方法项下制备供试品溶液，按正文色谱条件下测定三批牛膝配方颗粒特征图谱，结果见图8-4-5、表8-4-4。

将三批牛膝配方颗粒UPLC 特征图谱使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行匹配，以2号峰 β -蜕皮甾酮为参照峰，生成对照图谱，建立牛膝配方颗粒对照特征图谱（图8-4-6）。

（九）含量测定

参考牛膝标准汤剂含量测定项、《中国药典》2015年版一部、《广东省中药配方颗粒标准》（第二册）以及《天津市中药配方颗粒质量标准》牛膝项含量测定项标准，建立牛膝配方颗粒的含量测定方法。

取三批牛膝配方颗粒，按照【含量测定】项下供试品制备方法制备供试品溶液，按正文项下色谱条件进行测定，测定三批牛膝配方颗粒 β -蜕皮甾酮含量，结果为0.702mg/g、0.722mg/g、0.754mg/g。结合牛膝药材、饮片质量及牛膝标准汤剂中 β -蜕皮甾酮含量测定结果，暂定本品每 1g含 β - 蜕皮甾酮（C ₂₇ H ₄₄ O ₇ ）应为 0.50～0.90mg。

（十）性味与归经、功能与主治、用法与用量、注意

同正文。

（十一）规格

按照制法中制成总量计算，每1g配方颗粒相当于饮片1.5g。

（十二）贮藏

根据颗粒剂易吸潮特点以及稳定性试验结果，包装应密封。

三、小结

本研究参考牛膝标准汤剂质量标准，以牛膝的有效成分 β -蜕皮甾酮作为含量测定指标，采用UPLC法测定本品中 β -蜕皮甾酮的含量；建立了以 β -蜕皮甾酮指标成分的定量测定方法和限量范围；有文献以5-羟甲基糠醛和蜕皮甾酮作为牛膝配方颗粒含量指标，测得不同厂家牛膝配方颗粒中的5-羟甲基糠醛和蜕皮甾酮的含量差异较大，配方颗粒的质量不稳定。本研究发现牛膝配方颗粒中并无5-羟甲基糠醛，而酒牛膝配方颗粒中存在5-羟甲基糠醛，推测5-羟甲基糠醛可能为炮制受热产生。同时还建立了牛膝标准汤剂的特征图谱标准，规定牛膝标准汤剂应具有4个特征峰，指认了其中的 β -蜕皮甾酮峰为参照峰，并规定了特征峰的相对保留时间值和峰面积比值。除了进行定性定量分析外，利用ICP-MS法测定重金属及有害元素、GC法测定农药残留量，积累数据纳入质量标准，确保本品临床使用的安全性。经方法学考察，检测方法均符合要求，检测数据稳定可靠。 luhoR+jElTP8rUAC2/cQ/TelOsDBjPuEJtMpnVuxCWutNEXE7pIXKl3pgBrCmJKf