第三节
牛膝配方颗粒标准汤剂研究

一、牛膝标准汤剂的制备

牛膝标准汤剂的制备工艺研究，根据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求（征求意见稿）》中“标准汤剂制备”项的指导原则，参考中药药性及入药部位的分类，并参照卫生部、国家中医药管理局《医疗机构中药煎药室管理规范》的前处理方法、煎煮次数、加水量、煎煮时间等指标和参数并进行相关工艺考察，根据研究结果，确定牛膝标准汤剂的制备方法如下：

取牛膝饮片100g，加水煎煮两次，第一次加9倍量水，浸泡30分钟，武火煮沸后文火保持微沸30分钟，煎液经350目筛网趁热过滤，滤液迅速用冷水冷却。第二次加7倍量水，武火加热煮沸后文火保持微沸25分钟，煎液经350目筛网趁热过滤，滤液迅速冷水冷却，合并两次滤液。将合并后的滤液转移至旋转蒸发仪中减压浓缩，浓缩至清膏密度为1.03～1.08g/ml，在磁力搅拌下，精密吸取清膏2ml均匀分装于10ml棕色西林瓶中，真空冷冻干燥（真空冷冻干燥工艺参数见表8-3-1，冻干曲线见图8-3-1），取出，轧铝盖即得。牛膝标准汤剂样品制备测定数据见表8-3-2。

二、含量测定

（一）色谱条件

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEHshield RP ₁₈ 色谱柱（100mm×2.1mm，1.7μm）；以乙腈为流动相A，以0.05%甲酸溶液为流动相B，按表8-3-3规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为40℃；检测波长为270nm。理论板数按 β -蜕皮甾酮峰计算应不低于4 000。

（二）对照品溶液的制备

取β-蜕皮甾酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 β -蜕皮甾酮50μg的溶液，即得。

（三）供试品溶液的制备

取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水10ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）20min，放冷，再称定重量，用水补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

（四）方法学验证

方法学考察合格（具体内容略）。

（五）测定结果（表8-3-4）

三、特征图谱

测定方法同“第二节”中“特征图谱”项。

（一）方法学考察

1．专属性考察

精密吸取空白溶剂（水）溶液、 β -蜕皮甾酮对照品溶液、牛膝标准汤剂（NX-T-08）特征图谱项下供试品溶液。按色谱条件，进样，记录色谱图，结果见图8-3-2。

结果：空白溶剂中在与 β -蜕皮甾酮相应的保留时间没有色谱峰，空白溶剂对β-蜕皮甾酮的测定无干扰，且 β -蜕皮甾酮色谱峰与相邻色谱峰分离度大于1.5，供试品溶液色谱中在与 β -蜕皮甾酮峰的保留时间一致，所以本法具有良好的专属性。

在20分钟无明显色谱峰，在当前色谱条件下色谱峰基本满足了信息量最大原则。

2．精密度考察

取牛膝标准汤剂（NX-T-08）供试品溶液，按照已确定的色谱条件，重复进样6次，测定，记录色谱图，以 β -蜕皮甾酮参照物色谱峰为S峰，计算特征峰相对保留时间和相对峰面积，并计算RSD值，结果见表8-3-5。

结果：各色谱峰相对保留时间与相对峰面积的RSD＜2%，此特征图谱方法精密度良好。

3．稳定性考察

按照已确定的牛膝标准汤剂特征图谱项下供试品制备方法制备一份供试品溶液（NX-T-08），精密吸取供试品溶液，于室温放置，按照已确定的色谱条件，分别在0、2、4、6、8、18小时进样测定，以 β -蜕皮甾酮色谱峰为参照峰S，计算特征峰相对保留时间和相对峰面积，并计算RSD值，结果见表8-3-6。

结果：供试品溶液在18小时内，各特征峰相对保留时间与相对峰面积的RSD＜1%，表示该方法下供试品溶液在18小时内稳定。

4．重复性考察

取牛膝标准汤剂（NX-T-08）约0.2g，共6份，精密称定，按照牛膝标准汤剂特征图谱项下确定的方法制备供试品溶液，按照已确定的色谱条件，进样测定，以 β -蜕皮甾酮色谱峰为参照峰S，计算特征峰相对保留时间和相对峰面积，并计算RSD值，结果见表8-3-7。

结果：在平行6个供试品溶液中，牛膝标准汤剂的各色谱峰相对保留时间与相对峰面积的RSD＜1%，表明该特征图谱方法重复性良好。

5．中间精密度考察

由本项目组其他分析人员在不同日期和不同色谱仪下操作，取牛膝标准汤剂（NX-T-08）约0.2g共6份，精密称定，按照已确定的方法制备供试品溶液。按照已确定的色谱条件，进样，测定，以 β -蜕皮甾酮色谱峰为参照峰S，计算特征峰相对保留时间和相对峰面积，并计算RSD值，结果见表8-3-8。

结果：不同分析人员在不同日期和不同色谱仪下操作，各色谱峰相对保留时间RSD＜1%，相对峰面积RSD＜2%。

（二）测定结果

通过高效液相色谱法建立特征图谱的测定方法并进行方法学考察，对30批牛膝标准汤剂特征图谱测定，最终确定了牛膝标准汤剂特征图谱标准：规定牛膝标准汤剂供试品特征图谱中应有4个特征峰（图8-3-3、图8-3-4），与参照物峰 β -蜕皮甾酮色谱峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相关峰面积比值（表8-3-9）。

规定结果如下：供试品特征图谱中应有4个特征峰，与参照物峰相应的峰2为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，应在规定值的±10%范围之内。相对保留时间规定值为：0.197（峰 1）、1.00（峰 2）、1.033（峰 3）、1.060（峰 4）；计算峰 3、峰 4 与 S 峰的峰面积比值，峰4与峰3的峰面积比值应不低于1.0。

本研究对牛膝标准汤剂的制备工艺进行了考察，制定了牛膝标准汤剂的制备方法。根据牛膝标准汤剂的出膏率及主要成分 β -蜕皮甾酮的转移率，确定牛膝标准汤剂 β -蜕皮甾酮含量范围为0.073%～0.136%。通过UPLC建立特征图谱的测定方法并进行方法学考察，本方法分析时间短，灵敏度高，准确度高。 jYO8q4kw/tlQHy0Zp4NBuFMk/41ip2hz1my8j7SVWfvug2C7cfAh/mpYTlQ533Av