第四节
土茯苓配方颗粒质量标准研究

一、土茯苓配方颗粒质量标准草案

土茯苓配方颗粒　Tufuling Peifangkeli

【来源】

本品为百合科植物光叶菝葜 Smilax glabra Roxb.的干燥根茎经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。

【制法】

取土茯苓饮片4 000g，加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏（干浸膏出膏率为13%～24%），干燥（或干燥，粉碎），加辅料适量，混匀，制粒，制成 1 000g，即得。

【性状】

本品为浅黄棕色至棕褐色的颗粒；气微，味微甘、涩。

【鉴别】

取本品2g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取土茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取落新妇苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取供试品溶液2μl、对照药材溶液15μl、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（13：32：9）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，放置5分钟后，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【特征图谱】

照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm）；以乙腈为流动相A，以0.2%冰醋酸溶液为流动相B，按表6-4-1中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.4ml；柱温为30℃；检测波长为291nm。理论板数按落新妇苷峰计算应不低于15 000。

参照物溶液的制备

取土茯苓对照药材约0.8g，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇100ml，加热回流60分钟，取出放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。另取落新妇苷对照品、黄杞苷对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1ml各含50μg的混合溶液，作为对照品参照物溶液。

供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约0.1g，置具塞锥形瓶中，加入70%乙醇100ml，超声处理（功率300W，频率45kHz）40分钟，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法

分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

供试品色谱中应呈现5个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的5个特征峰保留时间相对应（图6-4-1、图6-4-2），其中2个峰应分别与相应对照品参照物峰保留时间相对应；与落新妇苷参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的 ±10% 范围之内，规定值为 0.93（峰 1）、1.21（峰 3）、1.26（峰 4）；计算峰 3 与S峰的相对峰面积，其相对峰面积应在规定的范围内，规定范围为0.38～0.88（峰3）。

【检查】

应符合颗粒剂项下有关的各项规定（《中国药典》2015年版四部通则0104）。

【浸出物】

取本品研细，取约2g，精密称定，精密加入乙醇100ml，照醇溶性浸出物测定法（《中国药典》2015年版四部通则2201）项下的热浸法测定，不得少于25.0%。

【含量测定】

照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适应性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为50mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm）；以甲醇-0.1%冰醋酸溶液（30：70）为流动相；流速为每分钟0.40ml；柱温为30℃；检测波长为291nm。理论板数按落新妇苷峰计算应不低于3 000。

对照品溶液的制备

取落新妇苷对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇100ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率45kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1g含落新妇苷（C ₂₁ H ₂₂ O ₁₁ ）应为10.5～38.0mg。

【性味与归经】

甘、淡，平。归肝、胃经。

【功能与主治】

解毒，除湿，通利关节。用于梅毒及汞中毒所致的肢体拘挛，筋骨疼痛；湿热淋浊，带下，痈肿，瘰疬，疥癣。

【用法与用量】

供配方用，遵医嘱。

【规格】

每1g配方颗粒相当于饮片4.0 g。

【贮藏】

密封。

二、土茯苓配方颗粒质量标准草案起草说明

本研究以大生产三批土茯苓配方颗粒样品进行质量研究，根据国家药典委员会《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求（征求意见稿）》的要求，依据《中国药典》2015年版一部、《天津市中药配方颗粒质量标准》的“土茯苓”项以及前实验研究土茯苓标准汤剂质量标准为研究基础，建立符合土茯苓标准汤剂质量要求的土茯苓配方颗粒质量标准。

（一）药品名称

药品名称：土茯苓配方颗粒

汉语拼音：Tufuling Peifangkeli

（二）来源

本品为百合科植物光叶菝葜 Smilax glabra Roxb.的干燥根茎经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。

（三）制法

土茯苓配方颗粒的研究以标准汤剂为对照，以出膏率、指标成分含量和转移率、特征图谱的一致性为考察指标，通过单因素试验，确定了提取、固液分离、浓缩、干燥、成型工艺，通过三批中试的验证，考察了土茯苓中间体及成品制备过程中的量值传递和物料平衡，最终确定了土茯苓配方颗粒的制备工艺。

（四）性状

根据三批土茯苓配方颗粒样品的实际性状描述，暂定本品性状为：本品为浅黄棕色至棕褐色的颗粒；气微，味微甘、涩（图6-4-3）。

（五）鉴别

土茯苓的化学成分主要包括黄酮类、酚类等，其中黄酮类成分占主要成分如落新妇苷、黄杞苷等。本研究参照《中国药典》2015年版土茯苓【鉴别】项下方法制定，选用土茯苓对照药材、落新妇苷对照品作对照，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（13：32：9）为展开剂，按质量标准草案鉴别项下方法操作，实验结果显示供试品在与对照品相应位置上有对应斑点（图6-4-4）；经试验验证，方法重现性好。

（六）检查

1．常规检查

按《中国药典》2015年版四部通则0104颗粒剂项下规定，对土茯苓配方颗粒的粒度、水分、溶化性、装量差异、微生物限度进行了检查，规定如正文。

2．其他检查

（1）重金属及有害元素：

按《中国药典》2015年版通则2321铅、镉、砷、汞、铜测定法（电感耦合等离子体质谱法）操作，采用电感耦合质谱仪对本品三批进行铅、镉、砷、汞、铜的测定，结果见表6-4-2。

结果：根据《中国药典》2015年版对中药材重金属及有害元素的一般规定，除矿物、动物、海洋类以外的中药材中，铅不得过5mg/kg；镉不得过0.3mg/kg；砷不得过2mg/kg；汞不得过0.2mg/kg；铜不得过20mg/kg。由表6-4-2可知，土茯苓配方颗粒重金属及有害元素均符合一般规定，并且在土茯苓原料内控标准中已建立重金属及有害元素的限度规定。故在土茯苓配方颗粒中暂不将重金属及有害元素纳入标准中。

（2）有机氯农药残留量：

按《中国药典》2015年版四部通则2341农药残留量测定法（第一法有机氯类农药残留量测定法——色谱法）中9种有机氯类农药残留量测定法操作，采用气相色谱仪对本品三批进行9种有机氯类农药残留量测定，测定结果表6-4-3。

根据《中国药典》2015年版对中药材有机氯类农药残留量的一般规定，六六六（总BHC）不得过0.2mg/kg；滴滴涕（总DDT）不得过0.2mg/kg；五氯硝基苯（PCNB）不得过0.1mg/kg。由表6-4-3可见，三批土茯苓配方颗粒中有机氯农药残留量均符合药典规定的限度。暂不纳入标准中。

（七）浸出物

按醇溶性浸出物测定法（《中国药典》2015年版四部通则2201浸出物测定法）项下的热浸法测定，对三批土茯苓配方颗粒进行测定，测定结果为38.11%、40.04%、39.50%。

（八）特征图谱

参照土茯苓标准汤剂特征图谱标准，对土茯苓配方颗粒特征图谱进行研究。

取三批土茯苓配方颗粒，按特征图谱方法测定三批土茯苓配方颗粒特征图谱，结果见图6-4-5、表6-4-4。

将三批土茯苓配方颗粒HPLC 特征图谱使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行匹配，生成对照图谱，建立土茯苓配方颗粒对照特征图谱（图6-4-6）。

（九）含量测定

参考土茯苓标准汤剂含量测定项、《中国药典》2015年版一部以及《天津市中药配方颗粒质量标准》土茯苓项含量测定项标准，建立土茯苓配方颗粒的含量测定方法。

取3批土茯苓配方颗粒，按照含量测定方法测定3批土茯苓配方颗粒落新妇苷含量，结果分别为 14.82mg/g、15.94mg/g、14.31mg/g。

结合土茯苓药材、饮片质量及土茯苓标准汤剂中落新妇苷含量测定结果，暂定本品每1g含落新妇苷（C ₂₁ H ₂₂ O ₁₁ ）应为 10.5～38.0mg。

（十）性味与归经、功能与主治、用法与用量、注意

同质量标准草案。

（十一）规格

按照制法中制成总量计算，每1g配方颗粒相当于饮片4.0g。

（十二）贮藏

根据颗粒剂易吸潮特点以及稳定性试验结果，包装应密封。

三、小结

本研究以土茯苓标准汤剂质量标准为依据，针对有效成分落新妇苷，采用UPLC法，测定本品中落新妇苷含量；建立了特征图谱方法和标准，选取5个共有峰，并将土茯苓配方颗粒与土茯苓标准汤剂的研究数据进行比对，以确保土茯苓配方颗粒与土茯苓标准汤剂质量的一致性。此外，采用TLC法，针对土茯苓的黄酮成分，选择土茯苓对照药材为对照进行专属性鉴别。除了进行定性定量分析外，还采用ICP进行重金属及有害元素的测定、采用GC进行农药残留量的测定，以期积累数据纳入质量标准，确保本品临床使用的安全性。经方法学考察，检测方法均符合要求，检测数据稳定可靠。

三批大生产配方颗粒的各项指标均在标准汤剂规定质量范围之内，表明从原料到成品具有稳定的量值传递关系，且土茯苓配方颗粒与土茯苓标准汤剂物质基础一致，土茯苓药材到饮片再到标准汤剂以及最终的中药配方颗粒，物质传递脉络清晰，能对土茯苓配方颗粒的质量进行较全面控制。 FEIlr/sPSaWkgjY3Y3B1z1k6uO0FVNSTcqmpFNar6d53sQKUOo8vhwnORKE0bjN1