第三节
土茯苓配方颗粒标准汤剂研究

一、土茯苓标准汤剂的制备

土茯苓标准汤剂的制备工艺研究，均按照国家药典委员会起草的《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求（征求意见稿）》中“标准汤剂的制备”有关要求进行，根据研究结果，确定土茯苓标准汤剂的制备方法如下：

取土茯苓饮片100g，加水煎煮两次，第一次煎煮加9倍量水，浸泡30分钟，武火煮沸后改文火再煎煮30分钟，用350目筛趁热过滤，滤液迅速冷水冷却；第二次煎煮加7倍量水，武火煮沸后改文火再煎煮25分钟，用350目筛趁热过滤，滤液迅速冷水冷却；合并两次滤液，减压浓缩至清膏含固率约为12%，分装至西林瓶中，每瓶分装2ml，真空冷冻干燥（真空冷冻干燥工艺参数见表6-3-1，冻干曲线见图6-3-1），取出，轧铝盖，即得。土茯苓标准汤剂样品制备测定数据见表6-3-2。

二、含量测定

（一）色谱条件

以 ACQUITY UPLC BEH C ₁₈ （50mm×2.1mm，1.7μm）为色谱柱；以甲醇-0.1%冰醋酸溶液（30：70）为流动相；检测波长为 291nm；进样量为 2μl；流速每分钟 0.40ml；柱温为 30℃。理论板数按落新妇苷峰计算应不低于3 000。

（二）对照品溶液的制备

取落新妇苷对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1ml含落新妇苷50μg的溶液，即得。

（三）供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇100ml，称定重量，称定重量，超声处理（功率300W，频率45kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（四）方法学验证

方法学考察合格（具体内容略）。

（五）测定结果

实验结果见表6-3-3。

三、特征图谱

测定方法同“第二节”中“特征图谱”项。

（一）方法学考察

1．专属性考察

取土茯苓标准汤剂供试品溶液（TFL-T-06）、空白溶剂（60%甲醇）、参照物溶液，注入液相色谱仪，按已确定的色谱条件测定，记录色谱图（图6-3-2）。

结果：土茯苓标准汤剂特征图谱中5个特征峰不受空白溶剂的干扰，其中新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷、黄杞苷的保留时间与参照物溶液的保留时间一致，表明该方法具有良好的专属性。

2．精密度考察

取土茯苓标准汤剂供试品溶液（TFL-T-06），连续进样6次，测定分析，以落新妇苷峰为参照峰S，计算峰1～5的相对保留时间与相对峰面积，并计算连续6次进样结果的RSD值，实验结果见表6-3-4。

结果：在连续进样6次的精密度考察，土茯苓标准汤剂5个特征峰的相对保留时间RSD值在0.036%～0.095%范围内，相对峰面积RSD值在0.696%～1.919%范围内，表明该特征图谱方法精密度良好。

3．稳定性考察

取土茯苓标准汤剂特征图谱供试品溶液（TFL-T-06），于常温下放置，分别在 0、8、16、21、24、28 小时进样测定，以落新妇苷色谱峰为参照峰 S，计算峰 1～5 的相对保留时间与峰1～5的相对峰面积，并计算6个时间点供试品溶液结果的RSD值，结果见表6-3-5。

结果：供试品溶液在28小时内，5个特征峰的相对保留时间RSD值在0.060%～0.111%范围内，相对峰面积在1.086%～2.741%范围内，表明该方法下供试品溶液在28小时内稳定。

4．重复性考察

取土茯苓标准汤剂（TFL-T1-06），平行6份，按土茯苓标准汤剂特征图谱项下方法制备6份供试品溶液，进样测定，以落新妇苷峰为参照峰S，计算峰1～5的相对保留时间与相对峰面积，并计算6份供试品溶液结果的RSD值，结果见表6-3-6。

结果：5个特征峰的相对保留时间的RSD值在0.082%～0.120%范围内，相对保留时间RSD值在0.660%～1.149%范围内，表明该特征图谱方法重复性良好。

5．中间精密度考察

由其他分析人员在不同日期取土茯苓标准汤剂（TFL-T-06）适量，按土茯苓标准汤剂特征图谱项下供试品溶液制备方法制备样品，平行6份，并在不同色谱仪下操作，进样测定，以落新妇苷峰为参照峰S，计算峰1～5的相对保留时间与相对峰面积，并与重复性考察数据比较，计算RSD值，实验结果见下表6-3-7。

结果：在不同分析人员不同日期下的中间精密度考察中，土茯苓标准汤剂特征图谱5个特征峰的相对峰面积RSD值在0.761%～7.904%的范围内，相对保留时间RSD值在0.07%～0.199%范围内，其中异落新妇苷峰相对峰面积差异较大，是由于有杂质峰与该色谱峰保留时间较为接近，不同色谱仪的色谱行为对该色谱峰的结果有一定影响。

6．耐用性考察

考察了不同柱温、不同流动相比例、不同色谱柱对土茯苓标准汤剂特征图谱的影响。结果：土茯苓标准汤剂特征图谱耐用性考察结果中柱温在25～35℃、流速在0.35～0.45ml/min、流动相比例±1%范围内变化时，特征图谱相对保留时间与相对峰面积波动较小，特征图谱轮廓稳定。色谱柱推荐使用Agilent SB C ₁₈ 色谱柱、Acquity BEH C ₁₈ 色谱柱或与填料粒径与类型相近的色谱柱。

（二）测定结果

按照高效液相色谱法建立特征图谱测定方法，对20批土茯苓标准汤剂特征图谱测定，最终确定了土茯苓标准汤剂特征图谱标准：规定土茯苓标准汤剂供试品溶液特征图谱中应呈现5个特征峰（图6-3-3、图6-3-4），以与落新妇苷参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，实验结果如表6-3-8、表6-3-9所示。

本研究对土茯苓标准汤剂提取、固液分离、浓缩和冻干工艺进行了考察，制定了土茯苓标准汤剂制备工艺；建立了土茯苓标准汤剂中落新妇苷的含量测定方法并根据出膏率及转移率确定了土茯苓标准汤剂中落新妇苷的含量范围及转移率范围；建立了土茯苓标准汤剂特征图谱，规定供试品色谱中应呈现5个特征峰，其中2个峰应分别与相应参照物峰保留时间一致；与落新妇苷参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的 ±10% 范围以内，规定值为：0.93（峰 1）、1.21（峰 3）、1.26（峰 4）；计算峰3、峰5与S峰的相对峰面积，其相对峰面积应在规定范围内，规定范围为：0.38～0.88（峰3）、0.04～0.16（峰 5）。 ByRneD6+HlHmA8V/a11KKVupCuRB+mQSjXKNuU6soLKW5KCrXYHeQBEROA4+b40J