第二节

酶活力测定

一、酶活力、酶活力测定的基本原则

1 酶活力测定的三个基本原则

酶活力会受到许多因素的影响，因此在测定酶活力时要遵循以下三个原则：

（1）测定酶促反应的初速度

随着反应的进行，一方面底物浓度的降低使酶被底物所饱和的程度降低；另一方面产物浓度增加加速了逆应的进行，反应产物对酶的抑制或激活作用以及随着时间的延长引起酶本身部分分子失活。因此，测定酶促反应的初速度，可以准确地反映出酶活力。

（2）在最适的条件下测定

酶的催化作用会受到测定环境的影响，只有在最适的温度、最适pH、最适缓冲离子强度等，才能反应真实的酶活力大小。

（3）底物浓度要足够大

只有底物浓度足够大的时候，酶促反应初速度才与底物浓度无关，整个酶反应对于底物而言是零级反应。

2 酶促反应曲线分析的三个因素

（1）温度

酶促反应在一定温度范围内反应速度随温度的升高而加快；但当温度升高到一定限度时，酶促反应速度不仅不再加快反而随着温度的升高而下降。在一定条件下，每一种酶在某一定温度时活力最大，这个温度称为这种酶的最适温度。

（2）pH

每一种酶只能在一定限度的pH范围内才表现活性，超过这个范围酶就会失去活性。

（3）底物浓度

在底物浓度较低时，反应速度随底物浓度增加而加快，反应速度与底物浓度近乎成正比，在底物浓度较高时，底物浓度增加，反应速度也随之加快，但不显著；当底物浓度很大且达到一定限度时，反应速度就达到一个最大值，此时即使再增加底物浓度，反应也几乎不再改变。即随反应时间的增加，底物浓度逐渐下降，反应速度逐渐趋于平稳。

3 酶活力的概念

酶活力又称酶活性，是指酶催化某一化学反应的能力。酶活力的大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速率来表示，可以用单位时间内底物的消耗量或产物的生成量来表示。

二、酶活力的表示与追踪

1 酶活力单位

2 酶比活的定义、表达式

酶的比活力可以表示酶的纯度。比活力用每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示，有时用每克酶制剂或每ml酶制剂含有多少个活力单位来表示（U/g或U/ml）。对于同一种酶而言，比活力愈大，表示酶的纯度愈高。

比活力＝活力U/mg蛋白＝总活力U/总蛋白mg

3 酶活力追踪式的计算 +hB5B5r1xAVc9L/BkoBv6bcBikEGahCDdV+/2CIxDv7+TSyfdsc5EWHFXQ7s1Mv4