第一节
呼吸道细胞病理学简介

呼吸道脱落细胞学用于肺病理学的诊断可追溯到1919年。直到20世纪50年代和60年代，呼吸道脱落细胞学才真正成为一门独立的诊断学科，随后又发展了通过支气管镜和细针穿刺（FNA）等直接取样的方法。经支气管刷（bronchial brushings, BB）、支气管灌洗（bronchial washings, BW）、支气管肺泡灌洗（bronchial alveolar lavage, BAL）等方法获取得的细胞学标本通常比简单的脱落细胞学标本更有诊断价值。近年来随着胸部影像诊断学的灵敏度及特异性的日益提高，呼吸道脱落细胞学在肺部病变的诊断中已经得到广泛的应用。在这一节，我们将简要地介绍脱落细胞样本制备、样本的种类及取样方法、染色方法。

一、脱落细胞样本制备

1. 固定剂及固定方法　脱落细胞的固定方式有两种：干固定和湿固定。干固定即空气干燥固定，把脱落细胞以空气干燥的方式固定。干固定最常用罗氏染色（Romanowsky，即DQ染色）。先将制作好的细胞涂片在室温下自然干燥，然后进行罗氏DQ染色。湿固定是用不同的固定剂将细胞直接即刻固定，常用乙醇为主的固定剂、不同浓度的乙醇或乙醇以不同的浓度与其他的化学试剂混合。其中，乙醇通常用95%的浓度，这是PAP染色最常用的固定剂。另外，还有Saccomanno固定剂及Carbowax固定剂。Saccomanno固定剂是2%聚乙二醇与50%乙醇的混合液，市面有售。当脱落细胞不能马上在病理实验室处理时，可先用Saccomanno固定，之后细胞样本可以短期保存或者在短时间内运输到病理实验室。Carbowax固定剂主要是聚乙二醇，常用作喷洒固定剂，聚乙二醇可将细胞包裹起来并防止细胞干燥。

2. 涂片制备　制备细胞涂片有许多方法，最常见的有挤压法和拉片法。

（1）挤压法。适合黏液较多的细胞样本，如痰液、支气管灌洗及支气管肺泡灌洗。先将细胞样本中白色线条状或者带血丝的成分挑出来，放在玻片上，再用另外一张玻片挤压而成，之后按要求进行干固定或者湿固定处理。

（2）拉片法。适合液体细胞样本，如体腔积液及其他液体。方法是将1～2滴细胞样本放在一张玻片上，再放上另外一张玻片。等样本自然展开后将两张玻片拉开，然后再按要求进行干固定或者湿固定处理。

二、脱落细胞样本种类

1. 痰　痰由细胞和非细胞两种成分组成，包括黏液、呼吸道下段的上皮细胞、口腔及呼吸道上段的分泌物。因为痰相对容易获得而且很少有不适感，曾是最常见的用于细胞学诊断的呼吸道样本，但是，痰细胞学筛查无症状的吸烟者并不能降低肺癌死亡率，因此，现在痰细胞学检查通常用于有症状的患者。近年由于支气管镜的出现和FNA取材的广泛应用，痰细胞学检查的应用已经显著减少 [ 1 ] 。对有症状的患者，采用数天内多次收集痰的方式可以优化灵敏度。清晨深咳后的痰是最好的。痰的制备方法被称为“挑选并涂抹”技术，即从新鲜痰液检查并挑选组织碎片或血液，或两者都用，涂片后立即固定于95%乙醇中。另外，可以用改进的Saccomanno方法，要求痰液收集到50%乙醇和2%聚乙二醇的混合液中，然后在搅拌机内均质化，并通过离心浓缩。用Saccomanno方法操作时，必须在通风柜内进行。如果在痰中找到很多肺泡巨噬细胞，表示下呼吸道深咳出的痰足够用于细胞学检查。如果痰中只有单纯的鳞状上皮细胞、细菌和假丝酵母菌，表示痰里面的成分不足以用作细胞学的诊断。即便痰中见到纤毛细胞，由于它们是鼻腔鼻窦通道内常见的细胞成分，也并不表示足以用于细胞学的诊断。痰细胞学检查诊断恶性肿瘤的灵敏度为42%（单次取样）到91%（五次取样）不等。痰细胞学检查的特异性很高，范围为96%～99%，其阳性和阴性预测值分别为100%和15%。由于阴性预测值低，痰阴性结果并不能保证不存在恶性肿瘤，尤其当患者在临床怀疑患为肺癌时。另外，痰细胞学检查的灵敏度依赖于恶性肿瘤的位置：中央肺癌为46%～77%，周边的肺癌只有31%～47%。

2. 经支气管镜获得的脱落细胞样本　经呼吸道直视下采集呼吸道和肺的样本。20世纪60年代末期发明纤维支气管镜，这让支气管细胞样本，特别是下呼吸道细胞样本的采集发生了重要的变化。现在，任何部位的呼吸道都可以用纤维支气管镜成功地采集足够的细胞样本。支气管镜检查常见的并发症是局部感染和出血，严重的并发症很少见，包括喉痉挛、支气管痉挛、心脏传导紊乱。经支气管镜获得的脱落细胞样本，常见的方式有支气管刷、支气管灌洗和支气管肺泡灌洗。下面简要的介绍这3种方法。经支气管细针穿刺活检请参见《细针穿刺细胞病理学》第六章（北京科学技术出版社，2014年出版）。

（1）支气管刷采样。纤维支气管镜可直视气管及支气管树并进行必要的采样。支气管刷用于刷取支气管黏膜的病变。留在支气管刷上的细胞可以直接涂到载玻片上或者放入细胞收集液的试管内，后者可以进一步制作出细胞块。如果用于涂片，涂片制成后应立即放入固定液（如浸入95%乙醇）固定，也可用喷雾固定法固定。支气管刷采样的优点是对可疑病变部位直接刷检，样本质量好，但是对技术的要求较高，而且患者有不适感。

（2）支气管灌洗采样。支气管分泌物可以直接在支气管镜下（如弹性纤维支气管镜）直视，并洗涤呼吸道而获得细胞样本。通过灌输生理盐水，洗涤液进入支气管黏膜，通过抽吸后收集洗液。通常灌输3～10ml盐水洗涤黏膜面并抽吸回洗涤液体。离心后将浓缩物用来制作涂片、薄片或细胞块。细胞块可用来做其他的特殊染色和免疫组化染色。

（3）支气管肺泡灌洗采样。选择经支气管灌洗还是经支气管肺泡灌洗，取决于需要在呼吸道的哪个位置采取细胞样本。经支气管肺泡灌洗采取细胞样本，将支气管镜尽可能放到支气管的最远端，然后用消毒盐水冲洗数次。第一次冲洗的细胞样本代表从较大气道来的细胞学成分，而随后的数次冲洗代表从支气管肺泡采取的细胞样本。支气管肺泡灌洗是用于诊断免疫功能低下患者无机会性感染的最好的方法之一。 tihT8MIYUoO04pADupGK5FXaqmIHVzj9BE3jNHN3ioxKenualjIvseDFkIiuE+OF