第八节
巴氏染色法

巴氏染色法（papanicolaou staining method，PAP染色法）使用核染色液（Richard-Allan苏木素）和胞质染色液（Richard-Allan Cyto-stain），特点是细胞透明度好、细胞结构清晰、色彩丰富而鲜艳，能清晰地显示细胞的形态学特点，已广泛应用于妇科和非妇科细胞学检查。

一、染色程序

PAP染色法的染色步骤及时间如表1-5所示。

二、空白对照

为避免非妇科样本之间的交叉污染，每次染色均设空白对照玻片，随染色等步骤操作。

（1）选一张清洁玻片，写上检测玻片及日期。

（2）将玻片随非妇科样本涂片一起染色、脱水、透明、封片。

（3）细胞技术员阅片并记录阅片结果（有、无细胞），并签字。

（4）细胞病理医师阅片签字。

（5）如发现有细胞污染，染色液必须立即丢弃，染色缸必须清洗并换上新的染色液。

（6）所有的记录资料必须签字归档保存。

三、影响PAP染色的因素

影响PAP染色的因素很多，其中最重要的是苏木素和Cyto-stain染色时间的长短。

（1）固定液的类型。

（2）染色的方法。

（3）苏木素的配方。

（4）复染剂的类型。

（5）染色时间的长短。

（6）需要染色的涂片数。

（7）自来水的pH和化学成分。

（8）水温。

（9）环境的潮湿度。

（10）溶液和染料的pH。

（11）使用过的染料的寿命。

（12）未过滤溶液有染料颗粒存在。

（13）脱水剂的污染。

（14）临床工作人员制备细胞的质量（厚薄、空气干燥或湿固定）。

（15）样本的pH。

（16）炎症细胞、血液、黏液及蛋白存在与否。

四、细胞样本的褪色和重染色

PAP染色时如遇到染色质量不佳或涂片长期存放而褪色时，可按以下程序处理后重染。

（1）把涂片浸泡在二甲苯溶液内，直到盖玻片自动脱落（或先将涂片置于冷冻柜内冷冻1小时）。

（2）把涂片放入新的二甲苯溶液内充分浸泡，使树胶完全溶掉。

（3）依次放入无水乙醇和95%乙醇中，分别放置2～5分钟。

（4）放入蒸馏水中漂洗。

（5）放入0.5%盐酸中，至颜色完全脱净为止（置于显微镜下观察细胞核完全褪色）。

（6）水洗10～15分钟，然后重新做PAP染色。 uT4zimeqUog7Hy0OhXAx7tCoRCo+mk3tRmWRYpIGbkKxU16v1WlJZ/MSrcCu1l8V