第七节
样本的固定

为维持细胞的精确结构，需要及时、适当地对细胞进行固定，常用的固定液是乙醇。乙醇也是一种脱水剂，因其除去水分或替代水分，可以引起细胞的皱缩。在细胞固定过程中，细胞的结构和细胞核的成分变得更加明显，染色后，细胞和细胞核的结构清晰可见，因此乙醇固定是PAP染色流程中的第一步。

传统的直接涂片完成后，涂片立即放入固定液内；薄层液基细胞制片在制片前和制片后均应置于固定液（CytoLyt、PreservCyt保存液、乙醇）中，使细胞形态保存完好，避免涂片完全干燥导致细胞退变，减少假阴性或假阳性的发生。CytoLyt和PreservCyt保存液是良好的防腐剂，对细胞有一定的固定作用，但并不能达到良好的固定效果，在制成薄层细胞片后，必须用标准浓度的细胞固定液。固定液通常采用乙醇，浓度为90%～95%，低于90%的乙醇固定效果不好，95%以上的乙醇固定会导致细胞核深染。

一、样本固定方法

1. 湿涂片新鲜样本　对任何未固定的液体样本进行快速检查，细胞在自然状态下或染色情况下检查。一般离心后，取1滴细胞和1滴染色剂甲苯胺蓝在玻片上混合，然后在显微镜下观察。这种方法常用于检查细胞的多少或有无恶性细胞的存在。

2. 空气干燥的样本　涂片后待其自然干燥，再浸泡在甲醇固定液内，直至染色。用于Wright和（或）Romanowsky、Wright-Giemsa、DQ、May-Grunwald-Giemsa染色。

3. 湿固定　涂片后样本尚未干燥时立即固定。涂片一直在固定液内，在染色前细胞不再暴露在空气中。

4. 湿固定伴空气干燥　固定后细胞材料再干燥，即涂片制成后，立即将涂片置入固定液内固定，然后取出来干燥。

5. 喷雾固定　也称包被固定（coating fixation），就是将细胞转移至玻片上，立即用喷雾固定剂（聚乙二醇、乙醇的混合物）固定。喷雾固定的涂片可以空气干燥，并置入容器内便于邮寄运送。染色前涂片首先在95%乙醇中浸泡30分钟，除去聚乙二醇，然后再固定于95%乙醇中10～15分钟，继而染色。乙醇和聚乙二醇的混合物是非常好的固定液，前者固定细胞，后者包被细胞起保护作用。

二、固定液

（1）95%乙醇、冰醋酸（99∶1）。

（2）95%变性酒精。

（3）80%丙醇。

（4）80%异丙醇。

（5）100%甲醇，用于瑞氏染色、May-Grunwald-Giemsa染色和免疫细胞化学染色。

（6）包被固定液，即聚乙二醇50g、95%乙醇950ml，二者混合，剧烈振荡至完全溶解，加温可以加速这一溶解过程。

（7）细胞块组织学制片的固定液常见的是40%的甲醛，或称10%福尔马林（1份甲醛、9份水）。为保持其最佳效果，福尔马林需保存在中性环境中。为了避免光照射引起氧化，福尔马林应保存在棕色瓶中。10%福尔马林可引起细胞水肿，导致细胞核内容物肿胀，但并不影响组织学诊断。 SeLV8CbrirA81dM10XHCAW/TbVg2dkwosWy7X1zagwTxHXhGswiGG8RsnA66BBSy