第五节
液体样本的离心

一、离心前注意事项

在处理液体样本之前，制片者应穿好工作服，戴好手套、口罩，开通无菌通风系统（至少在样本开始处理前半小时开通），检查真空泵、玻片、离心管、样本瓶、样本保存液瓶和申请单是否贴上标签；患者的姓名、样本编号及医疗编号是否一致。

处理首选新鲜样本，如果处理需要推迟几个小时，那么样本应放在冰箱内，低温可以使细胞暂时处于原来的代谢状态。室温（22～25℃）下，细胞一般可维持它的完整性约4小时，但是脑脊液和尿样本会在1小时内就开始变性（无论样本是否置于冰箱内保存）。如果样本的处理不能在4小时内完成，加入抗凝剂，样本可以维持7小时不变性。如处理需要更长时间，样本就需先固定。

液体样本混悬液中含有凝血系统的激活因子，因而可导致细胞凝固成块，这有利于细胞块组织切片，但会干扰细胞的分离。实验室常用的抗凝剂包括肝素、EDTA。这些抗凝剂会干扰细胞的辅助研究，如流式细胞术或细胞培养。肝素会干扰细胞培养，EDTA会干扰流式细胞术，因此应根据实际需要来选择抗凝剂。为保持液体样本处于悬浮状态，通常每毫升加肝素3～5IU。

二、离心步骤

新鲜或固定的细胞悬液在制片和染色前需要离心，离心包括一般离心法和细胞离心法。

1. 一般离心法的步骤

（1）取30ml液体于离心管内离心，1200r/min，10分钟，去掉上清液（可直接涂片，见湿制备）。

（2）加入30ml CytoLyt溶液，混悬，离心，1200r/min，10分钟，去掉上清液。

（3）评估细胞沉淀的形态特征。① 如为白色、淡粉色、棕黄色或看不见，取细胞沉淀入PreservCyt溶液瓶内。② 如有血液存在，加入30ml溶血溶液，混悬，离心，去掉上清液，然后取细胞沉淀入PreservCyt溶液瓶内。③ 如为黏液，加入30ml溶黏液溶液，混悬，离心，去掉上清液，然后取细胞沉淀入PreservCyt溶液瓶内。

（4）评估细胞沉淀体积的大小。① 如不见细胞沉淀或很少，加入20ml PreservCyt溶液，混悬，将整个样本倒入PreservCyt溶液瓶内；混悬细胞，让细胞在PreservCyt溶液中静置15分钟。② 如细胞沉淀清晰可见且体积小于1ml，混悬细胞沉淀与残留上清液取2滴置于PreservCyt溶液瓶内；混悬细胞，让细胞在PreservCyt溶液中静置15分钟。③ 如细胞沉淀体积大于1ml，加1ml CytoLyt溶液，混悬，取1滴样本置于PreservCyt溶液瓶内；混悬细胞，让细胞在PreservCyt溶液中静置15分钟。

（5）ThinPrep 2000制片机制片。

2. 离心速度 [ 2 ] 在不同的实验室，样本的离心速度不同（表1-2，1-3）。细胞分离实验显示，理想的细胞沉降速度为600×g，10分钟。