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细针穿刺细胞学（FNA）已被证实在诊断淋巴结转移性恶性肿瘤方面，具有较高的敏感性和特异性，同时在评估肿瘤的分期和淋巴结疾病方面，具有成本低、微创等特点。尽管细针穿刺对诊断复发淋巴瘤的价值已被认可，但对初步评估淋巴组织增生性疾病，存在较大的争议。争议的原因在于细针穿刺的样本缺乏组织学形态。然而，随着免疫表型和分子异常在诊断非霍奇金淋巴瘤中的作用越来越重要，大大地改变了人们对FNA诊断淋巴组织增生性疾病的看法。目前，FNA结合流式细胞术已被用于诊断首发和复发的淋巴瘤 ［ 1 - 8 ］ 。FNA通常能提供足够的样本用于流式细胞分析和分子检测。近年来，已在FNA样本上开展分子检测，如荧光原位杂交（FISH）和聚合酶链反应（PCR） ［ 9 - 17 ］ 。细胞形态学结合辅助检查（包括流式细胞术和分子检测）可以对大多数非霍奇金淋巴瘤进行分类。对浅表增大的淋巴结进行开放性检查较为容易，但对深部淋巴结进行开放性检查，则具有较大的创伤性。近年来，随着超声内镜引导下的细针穿刺（EUS-FNA）和经支气管超声内镜引导下的细针穿刺（EBUS-FNA）技术的引进，方便了临床对深部淋巴结的检查 ［ 18 ］ 。对于浅表淋巴结增大，细针穿刺主要是为了排除转移性癌或恶性黑色素瘤，而不是淋巴瘤。因此，在FNA检查评估淋巴结增大时，强调具有良好的细胞形态学技能和熟悉可用的辅助工具的重要性一点也不为过。粗针穿刺已用于淋巴组织增生性疾病的诊断，穿刺组织可以提供相应的淋巴结结构。有研究显示，粗针穿刺和切除活检之间具有良好的相关性。
根据临床情况和要求，FNA在评估淋巴结疾病时，可能需要回答下面的问题：是淋巴结反应性增生、转移性恶性肿瘤还是淋巴瘤？是非霍奇金B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤或其他亚型？对于诊断的目的，最重要和基本的任务是区分良性反应性的淋巴结和恶性淋巴瘤。完全基于细胞形态学诊断某些淋巴瘤如弥漫性大B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤相对较为容易，但对于另一些淋巴瘤如低级别滤泡性淋巴瘤和边缘区淋巴瘤，非常困难，甚至是不可能。一般来说，淋巴结细针穿刺涂片的细胞形态学通常可以被分为三种类型：单一型（细胞形态、大小一致），异质性（heterogeneous：细胞形态不同，指不同的细胞群）和多形性。细胞涂片中出现单一的淋巴细胞有三种情况：小而单一的淋巴细胞，提示可能是小淋巴细胞性淋巴瘤；中等大小淋巴细胞的鉴别诊断包括伯基特淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤和套细胞淋巴瘤；大淋巴细胞应考虑弥漫性大B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤。涂片中出现异质性淋巴细胞通常提示反应性淋巴结，但一些淋巴瘤也可出现异质性淋巴细胞。涂片中出现以小淋巴细胞为主的异质性淋巴细胞可见于低级别滤泡性淋巴瘤和边缘区淋巴瘤；以大淋巴细胞为主的异质性淋巴细胞可见于中、高级别滤泡性淋巴瘤，弥漫性大B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤。多形性淋巴细胞通常见于间变性淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。
流式细胞对于成熟的小B细胞淋巴瘤的诊断和鉴别诊断非常有用（表5-1）。除了转移性恶性肿瘤、化脓性炎症或有确切证据的霍奇金淋巴瘤之外的所有淋巴结活检，均应收集样本用于流式细胞分析。由于肉芽肿性炎可见于非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤，因此，即使已经诊断是肉芽肿性炎，也应收集样本用于流式细胞分析，以及进行分枝杆菌和真菌等微生物的培养。如果无法进行流式细胞分析，可以做细胞组织化学染色以协助诊断。许多抗体可用于免疫组织化学染色，如CD3、CD5、C10、CD20、CD23、BCL-2和Cyclin D1（表5-1）。免疫组织化学染色和原位杂交检测κ和λ轻链限制性可用于B细胞克隆性研究。
表5-1
许多种类淋巴瘤有其免疫染色特征，但并不特异，细胞遗传学、分子生物学异常可以帮助诊断 ［ 19 , 20 ］ 。FNA穿刺标本可适合于分子研究。荧光原位杂交（FISH）和其他的分子检测可用于非霍奇金B细胞淋巴瘤的诊断和分类。超过90%的低级别滤泡淋巴瘤有t（14；18）（q32；q21）易位，几乎所有的套细胞淋巴瘤存在t（11；14）（q13；q32）易位。大多数伯基特淋巴瘤有MYC易位，最常见的类型是t（8；14）（q24；q32），或t（2；8）和t（8；22）。部分弥漫性大B细胞淋巴瘤有BCL-6和BCL-2基因重排（与滤泡性淋巴瘤一样的易位）。
淋巴组织增生性疾病的FNA评估，需要注意以下几点。第一，由于细胞学缺乏组织学结构，具有一定的局限性。因此，仅凭细胞学，即使有辅助检查，要对某些淋巴瘤作出诊断也是相当困难的，甚至是不可能的。基于细胞学，要作出血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤和淋巴结边缘区淋巴瘤的诊断很困难，甚至是不可能的。粗针穿刺可能会有帮助，但为了作出明确的诊断，或许切除活检不可避免。第二，淋巴瘤新分类和新的治疗方案不断出现，送血液病理专家会诊很有必要。细胞病理专家应通过造血和淋巴组织肿瘤治疗和分类的继续医学教育，不断进行知识的更新。第三，细胞病理专家应该熟悉流式细胞分析和常用的分子检测。准确地制备样本和进行适当的检测对明确诊断很重要。分子检测可作为淋巴瘤诊断的依据，但一些结果并不特异，且有可能出现假阳性。小的克隆性B细胞或T细胞群并不都是恶性淋巴瘤，也可见于一些反应性增生。第四，当分子检测t（11；14）（q13；q32）易位阴性时，应该重新考虑套细胞淋巴瘤的诊断。第五，临床和病理的联系非常重要。临床症状典型的淋巴瘤患者，如淋巴结活检阴性，则提示取样误差或判读错误造成的假阴性，应充分随访，如切除活检或重复FNA。另一方面，病毒感染尤其是EBV感染可能出现大异型淋巴细胞，因此，作出恶性淋巴瘤的诊断应非常谨慎。