影响抗原抗体反应的因素较多,主要可以分为两方面:一方面是抗原、抗体的本身因素;另一方面是反应的环境因素(如电解质、酸碱度、温度及时间等)。
抗原和抗体是抗原抗体反应的主要参与者,它们的性质、活性及浓度(效价)等均能影响抗原抗体反应。
抗原的理化性状、抗原表位种类和数目均可影响抗原抗体反应的结果。例如,可溶性抗原与相应的抗体反应后会发生沉淀现象;而颗粒性抗原与相应的抗体反应后会发生凝集现象;单价抗原与相应抗体结合后不出现沉淀现象。
抗体的来源不同导致反应性有差别。如来源家兔、羊等动物的抗体,由于具有较宽的等价带,与相应抗原结合后易出现可见的抗原抗体复合物,称为R型抗体。而来源马、驴等许多大型动物的抗体,由于等价带较窄,易形成可溶性复合物,称为H型抗体。单克隆抗体一般不用于凝集反应或沉淀反应。另外,由于抗原抗体反应具有比例性的特点,抗体的浓度也能影响抗原抗体反应,抗体的浓度是与抗原相对而言,因此许多试验应进行抗体预滴定,找出抗原抗体反应的最适浓度。
抗原抗体反应不仅受到自身因素的影响,还受到反应环境的影响。合适的反应环境条件能促进抗原抗体分子的紧密接触,增强分子间引力,有利于分子聚合。
电解质是抗原抗体反应中不可缺少的成分。抗原与抗体特异性结合后,适当浓度的电解质能够中和抗原、抗体表面电荷,使电势降低,促进亲水胶体向疏水胶体的转换,从而有利于大块聚集复合物出现。若无电解质存在,则不出现可见反应。但参与反应的电解质浓度不宜过高,否则会导致蛋白质非特异性沉淀,出现盐析现象,造成假阳性。通常在抗原抗体反应中,常用0.85%NaCl溶液或各种缓冲液作为稀释液及反应液,以提供适当浓度的电解质。补体参与的抗原抗体反应中,还应有适量的Ca 2+ 和Mg 2+ 存在,以促进补体活化。
适宜的pH是抗原抗体反应必要条件之一。pH过高或过低都能影响抗原和抗体的反应,例如,当pH达到或接近颗粒性抗原的等电点时,会引起抗原出现自凝现象,造成假阳性结果。抗原抗体反应一般以pH 6~9为宜,有补体参与的反应以pH 7.2~7.4为宜,超过此范围会影响结果。
合适的温度有利于抗原抗体的结合,特别是在可见反应阶段受温度的影响较大。温度越低,反应速度越慢,但抗原抗体结合越牢固,更易于观察。温度升高可促使抗原、抗体分子运动加快,碰撞机会增多,促进抗原抗体结合,但若温度高于56℃时,可引起抗原抗体变性、补体灭活或已结合的抗原抗体复合物解离。一般情况下抗原抗体反应以15~40℃为宜,最适温度为37℃。但某些特殊的抗原抗体反应需要特定的温度,如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合最好,20℃以上反而解离。此外,适当的振揺或搅拌可加强抗原抗体分子的结合,微波也可促使溶液中极性分子运动,加速其反应。