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阴道镜应在月经间期以及其他可能引起宫颈损伤的妇科检查之前进行。阴道镜检查的步骤包括：
1.小心地将合适大小的窥器置入阴道，避免损伤宫颈。若阴道松弛或为妊娠妇女，可用阴道拉钩或同时应用两个窥器（一个标准位，另一个90°放置）。
2.观察宫颈的形状和大小，确定有无撕裂及黏膜红斑病。进行宫颈细胞学检查和新鲜包埋的准备。观察阴道分泌物，排除感染引起的炎症。细胞学检查是早期宫颈癌的筛查，可以从颈管、宫颈及阴道取样。取样时用取样器在宫颈上轻刷，可减少损伤和出血，用棉拭子浸湿生理盐水压迫出血点即可止血。
3.直接阴道镜观察。用生理盐水浸湿宫颈，使上皮表面变得透明，可以清楚地看到上皮下方的血管形态，可借助绿色滤光镜观察血管细节。
4.应用醋酸。用4%醋酸溶液浸湿宫颈可使宫颈黏液在15～20秒内消失，清晰观察形态学细节，如细胞密度的异常、上皮轻微的突起、黏膜角质化及柱状上皮。1分钟内，正常上皮依然无变化，而化生或异常的上皮变白，形成鲜明的对比。醋白的强度、持续时间以及出现和消失的速度与异常组织的严重程度直接相关。当检查时间超过2分钟，应重复使用醋酸。病毒感染图像在应用醋酸后需较长时间出现。应用阴道镜的变焦可在不同放大倍数下观察图像。
5.碘试验，用碘溶液（Lugol碘溶液）涂于上皮表面检查宫颈上皮病变。这一步骤可鉴别染成棕褐色的正常鳞状上皮和表现为苍白色或不染（碘阴性）的异常鳞状上皮（良性或恶性的病变）。此外，可以帮助评估HPV感染的分布特征。虽然很多阴道镜医师认为Lugol碘溶液的应用对阴道镜检查并没有多大帮助，但碘染异常所见，对于不同阴道镜图像的鉴别诊断非常有用，偶尔也可为不熟练的阴道镜医师指出异常区域。
6.检查宫颈后，应在5倍放大视野下系统地检查阴道和外阴。在阴道镜视野下缓慢移动窥器，使阴道前壁、后壁及侧壁的上皮完全可见。然后应用阴道镜检查外阴，先直接观察，再应用5%醋酸溶液观察小阴唇内缘及阴道口。
7.检查结束后应立即描述阴道镜检查发现的细节。完整的阴道镜报告应包括观察到的图像的图解、对病变的形态学诊断，以及病变的自然状态特征和不典型脉管系统的概括。阴道镜检查可否用于决策取决于检查是否充分、患者是否伴发阴道炎、是否妊娠或接受激素替代治疗等多项因素。