第四节
荧光光度计

某些物质分子被一定波长的光（常用紫外光）照射后，会在极短的时间内发射出比原来吸收光波长更长的光，称为荧光。荧光的波长和被照射的物质有关。对于一定的荧光物质的稀溶液，当激发光强度和液层厚度不变时，荧光强度与该荧光物质的组成量度成正比。

测量物质被激发光照射后产生的荧光强度来决定该物质组成量度的方法称为荧光分析法。仪器有荧光计和荧光分光光度计。各种型号的荧光分析仪器，均由光源、单色器、样品池和检测器等主要部件构成。下面介绍930型荧光光度计。

930型荧光光度计属于简易型的荧光分析仪器，它以卤钨灯做光源，由于这类光源在紫外范围能量输出很小，因此，不能测定激发波长低于330 nm的荧光物质。

930型荧光光度计采用滤光片做单色器。仪器有330 nm、360 nm、400 nm、500 nm、530 nm和420 nm、450 nm、470 nm、510 nm、550 nm、600 nm、650 nm滤光片各一块，供选择激发波长和发射波长用。仪器用光电管做检测器，其外形见图Ⅱ-12，仪器光路见图Ⅱ-13。

由光源发出的光，经激发滤光片后，成为近似的单色光，照射到样品液池上，液池中荧光物质溶液吸收激发光后产生荧光，经发射滤光片滤去杂色光，投射到光电管上产生光电流，经电子放大线路在指示表上显示出荧光强度。

1. 仪器操作步骤

（1）检查指示表指针必须位于“0”刻线，否则用指示表上的校正螺丝调节。

（2）在仪器未接通电源时，必须检查滤光片是否已安装在仪器上，否则光电管将受损。测试中，若须更换滤光片，应先切断电源。

（3）将仪器的电源开关接通，打开样品室盖，旋转调零电位器，使指示表指针处于“0”位，预热10 mins，即可进行测试。

（4）灵敏度倍率转换档的选择，先将旋钮旋至较低倍率的档，然后根据需要逐渐提高倍率，以免光电元件及表头过载受损。在灵敏度已满足的条件下，选择较低倍率的档，可以使仪器获得较高的稳定性。各档灵敏度范围是：

第一档×1倍

第二档×10倍

第三档×100倍

第四档×200倍

第五档×400倍

（5）“满度”旋钮的调节是为了便于浓度直读，可根据需要将已知组成量度的标准溶液的读数调至满度或其他任意数值。

（6）测试工作结束，将开关放在“关”位置，拔下电源线。

（7）取出样品液池，洗净，倒置于滤纸上晾干，存放在专用的盒子或干燥器内。

2. 使用注意事项

（1）仪器室照明不宜太强。

（2）使用前应首先了解仪器的结构和工作原理，以及各个操作旋钮的功能，并对仪器的安全性进行检查。电源线接地应良好、可靠；开关应在“关”的位置；各调节旋钮应逆时针旋到底或最小一档。

（3）选择滤光片的原则是使其标示的波长与被测物质的激发波长和发射波长一致或尽量接近，被测物质的激发波长和发射波长可在有关文献中查阅，也可用荧光分光光度计扫描测得。其方法是：在仪器进入正常工作状态后，逐块换上不同波长的激发滤光片和发射滤光片，测定荧光强度，至指示表上读数最大为止。此时，装在仪器上的两块滤光片，可分别用做测定该物质的激发滤光片和发射滤光片。

（付继军） 2NiW4/qPGsbbvaEYXy7ET5slDw2gmt9FtRRtn0U3P0ZTeE8an/bmUS95JcvuELfz