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第四节
交叉配血试验

194.为什么输血前要进行交叉配血试验

答:交叉配血试验也称为血液配合性试验,是检查患者与输注的血液是否相合。交叉配血试验相合,表明患者与供血者血液之间没有检出不配合的抗原、抗体成分,配血无禁忌,可以输注。交叉配血试验是保障输血安全的重要措施,可以避免由于某些失误造成的输血危险。交叉配血试验包括以下三项:

(1)主侧配血:

患者血清与供血者红细胞反应,检测患者体内是否存在针对供血者红细胞的抗体。

(2)次侧配血:

患者红细胞与供血者血清反应,检测供血者血液中是否存在针对患者红细胞的抗体。

(3)自身对照:

患者红细胞与自身血清反应,以排除自身抗体,直接抗球蛋白试验阳性以及红细胞“缗钱”状凝集等干扰试验结果的判读因素。

交叉配血试验的要求是:在任何步骤均不出现溶血或同种凝集的结果时,方可将供血者的血液成分输注给患者。

195.为什么主、次侧配血试验是保障输血安全的重要前提

答:主、次侧配血试验是保证供血者、患者血型相容,避免发生免疫性溶血性输血反应,确保输血安全、有效的前提。交叉配血试验阴性,表明患者与供血者血液之间没有检出不配合的抗原、抗体成分,配血无禁忌,可以输注。主侧配血是患者血清与供血者红细胞配血,是检查患者体内有无针对供血者红细胞的抗体。如果主侧配血不相容,输血后会发生免疫反应。尤其是患者体内ABO抗体与供血者红细胞不相容时,因为ABO抗体是IgM抗体,会导致血管内溶血而可能危及生命。ABO血型系统以外的抗体多为IgG抗体,会导致血管外溶血,可能导致严重的临床症状。次侧配血是患者红细胞与供血者血清配血,是检查供血者血浆或血清中有无针对患者红细胞的抗体。如果次侧配血不相容,同样会造成输血不良反应。

196.为什么次侧配血试验不合一般不会导致严重的不良反应

答:次侧配血是患者红细胞与供血者血清配血,是检查供血者血浆或血清中有无针对患者红细胞的抗体。当次侧配血不相合时,因为患者体内血容量一般比输注的供血者悬浮红细胞中含的血浆量多出若干倍,在供血者成分血一滴一滴缓慢输注患者体内的情况下,少量供血者血浆被患者体内循环血液迅速稀释,所以一般不会导致严重的不良反应。但是,必须指出的是,不会导致严重的不良反应并不代表没有输血不良反应。并且不会导致严重不良反应的输注前提还是少量慢速的输注,对于某些手术、需要大量用血以及新生儿等患者,这一点并不适用。因此,虽然说次侧配血不合一般不会导致严重的不良反应,应该依然坚持输注主、次侧都相合的更为安全的血液,保障患者的安全用血。

197.为什么除了盐水配血外,还要采用其他介质进行交叉配血试验

答:因为血型抗体为免疫球蛋白,主要为两大类:一类为IgM抗体,与其对应抗原的红细胞在盐水介质中凝集;另一类为IgG抗体,与其对应抗原的红细胞在盐水介质中不凝集,只有在非盐水介质中(如聚凝胺、酶法以及抗球蛋白试剂等)才凝集。IgM血型抗体多见于ABO、P、MNS、Lewis等系统的抗体;IgG血型抗体见于Rh、Kidd、Duffy等系统的抗体。如果不用非盐水介质配血,IgG血型抗体会漏检,从而导致临床溶血性输血反应或无效输血。聚凝胺交叉配血试验对于Kell系统之外的大多数血型系统敏感性高且操作简便快捷,假阳性少,应用范围广,但易受非特异性因素的影响,微弱抗原抗体反应容易漏检。酶交叉配血试验方法操作简便,敏感性高,对于Rh和Kidd血型系统较为敏感,尤其是Rh血型抗体的检出尤为显著,但酶活性易受温度、保存时间等而改变,抗原抗体的结合受多种因素影响,容易出现假阳性和假阴性,改变某些血型系统的抗原结构破坏其抗原性。而抗球蛋白法检测IgG抗体最为可靠。

198.为什么聚凝胺法交叉配血试验适合于我国人群

答:聚凝胺法交叉配血试验原理是:利用低离子介质降低溶液的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,促进血清(浆)中的抗体与红细胞相应抗原结合,再加入聚凝胺溶液,聚凝胺是带有正电荷的多价阳离子多聚物,能够中和红细胞表面的负电荷,缩短红细胞之间距离,使正常红细胞形成可逆的非特异性凝集,同时也使IgG类抗体直接凝集红细胞。然后加入枸橼酸重悬液后,仅有聚凝胺引起的非特异性凝集会因电荷的中和而消失,而由抗体介导的特异性凝集则不会消失。聚凝胺试验操作简便、快捷,成本较低,应用较为广泛。聚凝胺试验技术可用来进行IgG抗体的检测,多数IgG抗体可以被检出,但不能检出IgG型的抗K抗体。在白种人群中,Kell血型系统是仅次于ABO血型系统和Rh血型系统的第三大血型系统。但对于我国汉族人群来说,Kell血型系统绝大多数为kk型,产生抗K抗体的概率很低,所以采用凝聚胺法做输血前检查相对安全。

199.为什么ABO和Rh血型一致,交叉配血试验还是会发生不相合的现象

答:患者和供血者ABO和Rh血型相同,交叉配血试验不合,可以考虑以下几个方面的原因:

(1)主侧交叉配血试验不合:

①患者血清中有冷自身抗体,此时可以将交叉配血试验置于37℃下进行,排除冷凝集;②患者血清中含有某些蛋白或其他促凝集因素,可以在主侧管中加入适量生理盐水去除蛋白凝集;③供血者红细胞的自身凝集,可以将低离子介质溶液或生理盐水配制的红细胞悬液直接离心做对照排除自身凝集,且对于红细胞悬液做直接抗球蛋白试验,排除供血者直接抗球蛋白阳性;④患者血清中有不规则抗体,用患者血清加抗体筛查细胞以鉴定不规则抗体是否存在。

(2)次侧交叉配血试验不合:

①供血者血清中存在有冷自身抗体,应将反应置于37℃排除冷凝集;②患者血清中含有某些蛋白或其他促凝集因素,可以将凝集的红细胞用生理盐水洗涤以排除此干扰;③患者红细胞的自身凝集,可以将低离子介质溶液或生理盐水配制的红细胞悬液直接离心排除自身凝集,且对于红细胞悬液做直接抗球蛋白试验,排除患者直接抗球蛋白试验阳性;④供血者血清中有不规则抗体,用供血者血清加抗体筛查细胞以鉴定不规则抗体是否存在。

200.为什么微柱凝胶方法交叉配血试验存在一定的局限性

答:微柱凝胶法交叉配血试验具有灵敏度高,结果准确;便于自动化、标准化,无需显微镜观察;重复性好,结果观察直观,不同人员的操作结果易于一致,避免人为因素的影响,批量标本配血和大剂量输血患者的配血也比较方便的优点。然而,其依然存在一定的局限性:

(1)孵育、离心时间较长,不适用于特急的急诊抢救标本配血。

(2)同其他交叉配血试验方法一样,微柱凝胶法不适用于直接抗球蛋白阳性患者,会导致次侧凝集,无法确定是患者本身抗球蛋白阳性引起的凝集还是患者红细胞与供血者血浆引起的凝集。

(3)使用抗凝标本时,血浆中纤维蛋白原可能会使配血结果出现假阳性,仪器判读存在一定假阳性,需要人工复检。

201.为什么直系亲属间不建议相互输血

答:输血相关性移植物抗宿主病是一种可致命的迟发性输血不良反应,临床表现缺乏特异性,一般在输血后8~10天发生,但最早有输血后2天发病的,最迟也有输血后30天发病的。TA-GVHD发生具有3个基本条件:

(1)供血者和患者的HLA抗原性存在差异。

(2)输注的血液中具有免疫活性的淋巴细胞。

(3)患者免疫缺陷或免疫抑制,不能识别和清除输注的淋巴细胞。

TA-GVHD也会发生于免疫功能正常者,多为一级、二级亲属间相互输血,其风险较非亲属间输血高数倍。究其原因,可能是亲缘关系越近,其HLA相配合的概率也越高,当患者输注含有免疫活性淋巴细胞的血液后,其免疫系统没有识别并清除供血者血液免疫活性的淋巴细胞,从而导致其在患者体内植活、增殖,最后导致TA-GVHD。因此,直系亲属间不建议相互输血。

202.为什么抗体筛查试验阴性时主侧交叉配合试验也会出现阳性结果

答:当患者抗体筛查阴性时,主侧交叉配合试验出现阳性,需要采取以下措施:

(1)复查血型:复查患者和供血者的ABO、Rh血型是否正确。

(2)血清中可能存在其他ABO血型抗体,必要时进行ABO亚型鉴定。

(3)若患者血清中含有不规则抗体,但在筛查细胞中无此抗原存在,导致抗体筛查试验阴性。

(4)患者血清中含有冷自身抗体,将反应置于37℃以排除干扰。

当患者抗体筛查阴性时,主侧交叉配合试验出现阳性时一定要引起相关配血人员的重视,积极查找可能存在的原因,与多个供血者血液标本进行配合试验,务必找到交叉配血试验阴性的血袋,以避免输血相关不良反应,保障患者血液输注的安全有效。

203.为什么交叉配血试验相合,患者输血后血红蛋白不升高或降低

答:交叉配血试验相合,患者输血后血红蛋白不升高或降低,可能原因如下:

(1)非免疫性原因,如患者自身因素,脾功能亢进或内出血等容易被忽略的出血情况等。

(2)免疫性原因,如患者发生迟发性输血反应,多次输注异体血或妊娠等被动免疫,体内存在低效价同种抗体低于目前方法的检测阈值,所以交叉配血试验“相合”,但再次输血时因“回忆反应”,体内抗体效价迅速升高,破坏输注的红细胞,产生血管外溶血,使输血后血红蛋白不升高或降低,以Rh血型抗D抗体尤为常见。

204.为什么自身免疫性溶血性贫血患者交叉配血试验困难

答:自身免疫性溶血性贫血是指患者产生了针对自身红细胞抗原的抗体,可分为温自身抗体型和冷自身抗体型两种。温型AIHA是由37℃有活性的自身抗体引起的;冷型AIHA主要由IgM型自身抗体引起的,最适反应温度可能是4℃,但在30℃以上甚至37℃时仍有活性。AIHA患者往往贫血较严重,需要输血治疗,然而在交叉配血试验中会出现极大的困难。由于患者红细胞结合IgG抗体或者补体,造成次侧配血不合,而且患者血浆中常含有自身抗体,造成主侧配血不合。自身抗体与自身红细胞以及输注红细胞均反应,而且反应强度相似,在患者的贫血已经危及生命时,应输注少量红细胞予以支持性治疗,维持患者基本生命体征,从而获得治疗所需时间。对于AIHA患者,应用其自身红细胞吸取除去血清中游离自身抗体后,再作抗体筛查及配血。应注意的一点是,自身抗体存在时,配血总是不相容,单纯自身抗体导致配血不相容不是输血禁忌。但是如果被自身抗体掩盖的同种抗体漏检,则可能发生严重的溶血性输血反应。

205.为什么多发性骨髓瘤患者交叉配血试验困难

答:多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是以克隆恶性浆细胞在骨髓中无节制的增生伴有单克隆免疫球蛋白或轻链(M蛋白)过度生成,造成患者血浆存在大量异常免疫球蛋白。多发性骨髓瘤患者交叉配血试验容易出现以下几种情况:

(1)“缗钱”状假凝集:M蛋白,红细胞“缗钱”状主要由于蛋白紊乱所形成。交叉配血试验时患者红细胞在盐水中立即离心时主侧呈高凝状态,出现“缗钱”状凝集,导致配血不合。如果患者有输血史或有服用产生类同种抗体的药物史,则体内可能产生同种抗体,“缗钱”状假凝集会掩盖同种抗体引起的真凝集,因此应用抗球蛋白及谱细胞筛查排除同种抗体的存在。

(2)自身抗体引起的交叉配血试验不合。

(3)ABO血型抗原减弱和血型抗体丢失:多发性骨髓瘤可以引起ABO血型抗原减弱和血型抗体丢失,导致血型异常,进而无法进一步进行交叉配血试验。

206.为什么地中海贫血患者容易出现交叉配血试验不合的现象

答:地中海贫血又名珠蛋白生成障碍性贫血,是一组遗传性溶血性贫血疾病。地中海贫血由于遗传基因的缺陷致使血红蛋白中一种或几种珠蛋白链合成缺如或不足所导致的贫血或病理状态。该疾病是我国南方各省最常见、危害较大的遗传疾病之一,人群发病率高,以广东、广西地区为主。地中海贫血患者交叉配血试验不合的原因主要有:

(1)反复输血产生同种抗体:

重型地中海贫血患者需反复输血,容易因输血引起除ABO和RhD血型抗原以外的血型系统免疫性抗体,这些不规则抗体可能造成交叉配血试验不合。

(2)重型β地中海贫血合并自身免疫性溶血:

此种患者特点是血清学直接抗球蛋白和间接抗球蛋白试验均为阴性,不规则抗体筛查阴性,自身冷抗体阳性。因此应在盐水、聚凝胺、抗球蛋白介质中交叉配血试验,无凝集、无溶血方可给患者输血。

207.为什么要进行血小板交叉配型试验

答:血小板交叉配型试验即血小板抗体筛查与对血小板进行交叉配合试验,以达到“配合型血小板输注”。理想的血小板交叉配型试验应该包括HLA型和HPA型均能达到配合。从免疫方面看,有血小板输注史或妊娠史的患者,当再次输注具有同种相应抗原的血小板后,产生相应抗体导致输注的血小板被吞噬,容易造成输血后紫癜(PTP)和血小板输注无效(PTR)。血小板输注次数越多,其产生相应抗体的频率越高。血小板上HLA抗原的抗原性较强,HLA抗体比HPA抗体产生的频率高,同时具有这两种抗体的患者输注血小板引起输血不良反应的概率更高,程度更严重。对于HLA配型来说,有效地去除白细胞、紫外线照射等方法可以预防HLA同种异型免疫反应。血小板交叉配型是指患者血清与供血者血小板的反应,配型相合的血小板输注可以明显提高血小板输注效率,因此进行血小板交叉配型很重要。

(侯 忱 汤朝晖 蔡晓红) Ob3mxChkVI48qhoex2npuPbY+CVG6xx2hnR3NIQVn67dXR7QHdy7AnDX0wHkB7eL

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