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答：血小板相关抗原是血小板表面存在的与其他细胞或组织共有的抗原，包括组织相容性抗原（HLA）和红细胞血型系统相关抗原。血小板特异性抗原是血小板表面存在的由血小板特有的抗原决定簇组成，表现血小板独特的遗传多态性的抗原。其构成血小板膜结构的一部分，是位于血小板膜糖蛋白上的抗原表位。至少5种糖蛋白［GPⅠa、Ⅰb（α和β）、Ⅱb、Ⅲa、CD109］具有多态性并与同种免疫有关。3%～5%的亚洲人和黑种人缺乏第6种血小板糖蛋白（GPⅣ、CD36），在输血或妊娠后可以导致对该种糖蛋白的致敏。迄今，已经有20多种血小板抗原被报道，并且最新的研究发现，血小板特异性抗原并非为血小板特有，一些特异性抗原也分布在其他细胞如内皮细胞、成纤维细胞、T淋巴细胞等上。
答：最初血小板抗原的名称是根据受累患者或分娩出血小板减少症患儿的妇女名字来命名，缺乏系统性与科学性。2003年由国际输血协会（ISBT）与国际血栓和止血协会（ISTH）联合成立血小板命名委员会（PNC），对人类血小板抗原（HPA）进行系统命名并建立了命名原则和认可新抗原的标准。HPA命名原则是以HPA加系统数字表示，该数字按发现的年代顺序的先后排列。目前，新抗原认可的5种标准如下：
（1）必须阐明该抗原的遗传学基础，提供相应基因的基因组DNA序列资料，或至少是cDNA序列资料。
（2）必须使用特异性蛋白免疫分析方法，阐明基因突变和相应蛋白之间的关联。
（3）至少有2个参比实验室证实血清学和分子生物学的鉴定结果。
（4）必须提供该抗原的群体资料，如果提供家系资料将更有价值。
（5）应尽可能提供血样以建立细胞株。
答：血清学检测血小板特异性抗原的主要方法有：
处理过的待测血小板与已知抗体孵育、洗涤，再与标记了荧光素的抗球蛋白反应，再洗涤，在荧光显微镜下进行观察结果。该方法是可靠的抗原鉴定方法，1986年被国际血小板血清学研讨会确定为标准参考方法。
将待检血小板和荧光标记的已知型别的血小板抗体孵育，用流式细胞仪检测。
虽然，利用血清学方法检测血小板抗原的方法简便，但需要一定数量的血小板及特异性HPA抗血清，由于血小板抗原难以重组，且特异性的HPA抗血清难以获得，血清学检测技术在血小板抗原的分型检测上受到了很大的制约。
答：由于血小板抗原血清学分型存在着各种各样的制约，人们一直希望有一种更实用的方法取代血清学方法进行血小板抗原分型。20世纪90年代后，随着血小板同种抗原系统的相应基因序列被阐明，分子生物学技术的不断发展和对血小板抗原、基因结构研究的突破性进展，使血小板血型的基因分型成为可能。HPA等位基因主要受控于第5、6、17、22号染色体，由于绝大部分HPA等位基因多态性均具有单核苷酸多态性（SNP）的特点，即编码血小板糖蛋白基因的一个核苷酸变化导致HPA抗原多肽链中一个氨基酸改变，由此产生不同的抗原性，这就为分子生物学检测HPA创造了良好的基础。
答：PCR-序列特异性引物法（PCR-SSP）是最简单、最常用的血小板HPA分型方法。PCR-SSP法是将多态性核苷酸设计为引物的3′端，这样就可以分别扩增HPA基因，PCR之后只需电泳和肉眼观察结果。该技术具有快速、简便和可靠的优点，是目前最为常用的血小板HPA分型方法。然而，PCR-SSP法需要注意以下几点：
（1）引物的设计必须合理，具有特异性。
（2）在反应中要仔细调节镁离子浓度，严格控制退火温度。
（3）应在同一反应体系中加入另一对引物（通常扩增人生长激素基因HGH的一段）作为内参照，该内参照引物总会产生一个DNA片段，与HPA基因型无关，作为PCR有效性的质控。
答：PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的原理是从血液或组织细胞中提取基因组DNA，设计包含等位基因多态性区域的引物进行PCR扩增，扩增后的DNA片段用特异性的核酸内切酶消化，利用琼脂糖凝胶电泳分离消化片段。根据PCR产物是否被酶切及酶切片段长度来区分各等位基因。该方法的缺点是在PCR扩增的基础上加上了酶切步骤，酶切条件不易掌握，如果酶切不充分可能得到错误信息，此外也并非每个HPA等位基因都可以直接用此方法进行分型，因此局限了该方法的应用。不过，目前通过引物修饰产生“人为的酶切位点”，使PCR产物能直接用于RFLP，已经能成功用于大部分HPA等位基因的分型。
答：由于血小板表面存在复杂的抗原系统，输血、妊娠或骨髓移植等均可刺激机体免疫系统产生同种血小板抗体。同种血小板抗体主要分为两大类：
（1）针对供血者、患者血小板共同抗原的抗体，即HLA-Ⅰ类抗体、红细胞血型抗体以及针对CD36上的NaK（a）抗原抗体等。
（2）针对供血者、患者血小板特异性抗原的抗体，即HPA抗体。
血小板抗体通过其Fab段与血小板膜糖蛋白或巨核细胞结合，并通过Fc段激活单核-巨噬细胞或补体系统，导致血小板破坏或巨核细胞成熟紊乱，引起血小板数量减少或功能紊乱。同种血小板抗体的存在可导致血小板输注无效、输血后紫癜、胎儿与新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜以及原发性免疫性血小板减少症等多种免疫反应的发生。
答：单克隆抗体特异性固相血小板抗体试验（monoclonal antibody - specific immobilization of platelet antigens assay，MAIPA）是将血小板与人血清和鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体分别孵育后，加入裂解液使其裂解成为“人血小板抗体-血小板糖蛋白-鼠抗人血小板糖蛋白单抗”三者免疫复合物，将复合物加入已包被羊抗鼠IgG的酶标板中，经孵育后捕获，再加入酶联抗人IgG及底物，经显色反应来测定血小板抗体。该试验的优点是，血小板单克隆抗体及待检标本中的人血小板抗体与血小板结合是发生在血小板裂解前，此时血小板抗原保持天然构象，不仅避免了有临床意义的重要抗原表位丢失导致敏感性降低或漏检问题，还减少了血小板裂解后所形成新的临床不相关抗原所致假阳性结果的可能。总之，MAIPA法凭借其检测血小板抗体特异性和敏感性均较好的优点，已成为目前检测血小板抗体应为最广泛的方法和手段。
答：胎儿与新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜（fetus and neonatal alloimmune thrombocytopenia，FNAIT）和胎儿与新生儿溶血病（HDFN）的发病机制相似，在妊娠期间由于母亲与新生儿间血小板血型不同，胎儿的血小板抗原刺激母体产生血小板相关抗体，后者通过胎盘导致胎儿和新生儿血小板减少。FNAIT是最常见的胎儿或新生儿血小板减少的原因，最严重的并发症是颅内出血。该病在白种人中主要由HPA-1a抗体引起的，但在黄种人中，推测HPA-3a和HPA-4a抗体可能是疾病发生的主要原因。根据病史和实验室检查对于FNAIT进行初步判断，如需确诊则需进行进一步的确认试验：
（1）母亲血清血小板特异性抗体测定以鉴别是否胎儿血小板减少是由血小板特异性抗体的反应引起。
（2）母亲和父亲血小板抗原的基因分型以证实前者体内的抗体产生机制。
一旦FNAIT的诊断确定，母亲再次妊娠时有同样的患病风险。
（侯 忱 汤朝晖 蔡晓红 王 静）