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答：高纯度、高获得率的T、B淋巴细胞是人类白细胞抗原（HLA）分型结果真实准确的先决条件。传统的T、B淋巴细胞分离方法周期比较长，对操作人员的熟练程度以及操作的准确性要求较高。近年来出现的免疫磁珠方法分离淋巴细胞操作更为方便、快捷，获得的细胞纯化度更高，所以越来越多的实验室采用该方法来分离淋巴细胞。免疫磁珠是一种表面结合有单克隆抗体、可荧光染色、可磁化的微球。免疫磁珠方法分离细胞的原理是：细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单克隆抗体相结合，在外加磁场中通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单克隆抗体结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。通过微球的反复磁化，重复聚集和分散的过程，可以达到纯化细胞的目的。
答：交叉淋巴细胞毒试验是指淋巴细胞表面带有HLA抗原，如患者体内有针对供体者HLA的特异性抗体，则与之结合，在补体存在的情况下在膜上形成穿孔，杀伤细胞。无相应抗体则对细胞无影响。染料进入到死细胞内使之着色，而活细胞不被染色。根据着色的死细胞数可以估计淋巴细胞毒的强度。该方法可以检测血清中存在的HLA-Ⅰ类、Ⅱ类抗体，包括IgG和IgM抗体。通过交叉淋巴细胞毒试验对供体者、受体者交叉配型，检测器官移植患者、待输血小板患者等体内是否存在针对供体者的特异性HLA抗体，为供体者选择提供依据。该方法需要活的T、B淋巴细胞，为了保证实验结果的长期稳定，使试验标准化，许多实验室采用冰冻保存的细胞，但是冰冻细胞容易溶解或变脆，导致假阳性。
答：HLA-Ⅰ类抗原的血清学分型方法的原理是依据抗体介导的补体系统对靶细胞溶解的原理进行的。实验采用一系列HLA-Ⅰ类抗原的标准分型血清（抗体）与待检细胞作用，细胞毒阳性孔说明待检细胞具有该种标准血清代表的抗原特异性，阴性则说明HLA型别与该孔标准血清代表的型别不一样。根据全套标准血清的反应格局，可以判断该细胞HLA-Ⅰ类抗原的特异性。但该方法也存在着一些问题：
（1）标准分型抗体亲和力较弱、效价较低、易产生交叉反应。
（2）缺少某些单价抗血清，国内供HLA抗原分型的血清板来源困难，质量欠佳。
（3）某些病理过程可能导致外周血淋巴细胞表面抗原性质发生改变，干扰抗原抗体的反应。
（4）血清学分型需要用新鲜的血样或淋巴细胞，存在取样困难等问题。
上述这些问题均影响了HLA分型结果的可靠性以及血清学分型技术的推广应用，所以目前临床以及各类骨髓库、脐血库已经基本不采用该方法。
答：PCR-序列特异引物（polymerase chain reaction sequence specific primer，PCR-SSP）的原理是根据HLA等位基因各型别核苷酸碱基序列的差异性，设计出一系列特异性引物。因Taq DNA聚合酶没有3′→5′核酸内切酶活性，引物3′端最后一个碱基是否与模板配对起关键作用，决定着能否扩增出产物。该方法结果的判读只需要借助常规的琼脂糖凝胶电泳，根据是否出现特异性的阳性条带及有无扩增产物来判断基因的多态性。因此试验流程较短，方法简单、快速，可以迅速获得分型结果，适合小批量标本，从基因组DNA模板的提取到获得检测结果一般需要几个小时。但是由于该方法工作量大，一般需要好几十孔PCR反应才能指定一个标本中低分辨率的分型结果，是通量最小的分型方法，所以目前仅中低通量的实验室用该方法检测。
答：PCR-序列特异性寡核苷酸探针（polymerase chain reaction sequence specific oligonucleotide，PCR-SSO）方法是核酸杂交的代表性技术。该方法采用特异性引物对目的DNA片段进行扩增，将PCR扩增产物与已知序列特异性探针进行特异性杂交，通过分析杂交结果和分型格局得出标本HLA基因序列。PCR-SSO分型的灵敏度和特异性都很高，其优点有：
（1）可以满足不同分辨率的要求，根据探针设计的特异性不同，在可使用的微球数目范围内，可设计数目不等的探针，满足从中低分辨率到高分辨率的不同要求。
（2）高通量，并且由于携带不同探针的微球在同一管中对PCR产物进行杂交，因此每个标本根据检测的位点不同，所需的反应数不同，从而使通量得以大大提高，适用于骨髓库及脐血库等大量标本的分型。
答：HLA分型的PCR-直接测序分型法（polymerase chain reaction sequence base-typing，PCR-SBT）是最详尽确认HLA基因型的方法。本方法通过扩增目的DNA片段，采用引物直接检测HLA基因多态性位点的核苷酸序列，再结合软件分析与已知可能的等位基因的序列进行比较，从而确定HLA等位基因型别。该方法通过全自动测序仪器，可以准确、快捷、直接地获得DNA序列，发现新的突变位点，鉴定新的等位基因，保证高分辨结果。而其他PCR方法的缺陷在于其引物或探针都针对已有的多态性位点设计，如果在其他位点发生新的突变便无法检出。新的突变位点检出后需厂家设计新引物检测，其中往往会有较长时间的延迟。而且随着新等位基因的不断发现，需要设计的引物/探针越来越多，反应格局越来越复杂，PCR方法已经达到极限容量但仍有一些基因家族的分型结果难以制订。因此，PCR-SBT较其他PCR方法具有很大的优势。
答：人类白细胞表达的抗原比较多，其中与输血医学有关的是白细胞血型抗原，这些抗原包括粒细胞特异性抗原、HLA及红细胞血型抗原三种。由于人类白细胞表达的红细胞血型抗原比较少，意义也不大，临床主要关注粒细胞特异性抗原及HLA。而在实际的临床应用中，由于白细胞容易引起同种免疫反应，一般会使用去除白细胞的红细胞制品-少白红细胞（leukocyte-reduced red blood cells）。少白红细胞制品的输血不良反应少，在发达国家已逐渐替代悬浮红细胞。因此，不作为常规血型检测。
答：粒细胞的生成障碍或破坏增加可引起粒细胞的减少，破坏增加主要由于粒细胞抗体所引起。粒细胞抗体可引起新生儿同种免疫性粒细胞减少症、自身免疫性粒细胞减少症、发热性非溶血性输血反应、输血相关性急性肺损伤、骨髓移植后同种免疫性粒细胞减少症、输血相关性同种免疫性粒细胞减少症、药物诱导的粒细胞减少症和粒细胞输注无效等，粒细胞系统不同的抗体所引起的疾病不同。然而粒细胞抗体检测比较困难，主要原因有：
（1）粒细胞细胞毒性和凝集试验的特异性和敏感性均较低。
（2）粒细胞无法长期保存，制备已知型标准粒细胞试剂十分困难。且对于试验所需的分离粒细胞纯度要求较高，需要无红细胞污染，标本新鲜，粒细胞具有一定的活性。
（3）临床上抗体介导的中性粒细胞减少病例相对较少。
答：输血相关性急性肺损伤（TRALI）也称为“非心源性肺水肿”或“严重过敏性肺水肿”，是一种严重的非溶血性输血反应，属于白细胞相关性急性免疫性输血不良反应。输血后数小时可发生，常见症状为输血发生急性呼吸困难、低氧血症、非心源性肺水肿、低血压和发热，严重者可引起死亡。一般认为TRALI的发生机制是供血者血浆中存在抗HLA抗体或者抗HNA抗体引起中性粒细胞激活或在患者肺血管内聚集，释放出的细胞内生物活性因子诱发肺毛细血管内皮损伤和肺水肿等临床症状，死亡率较高，多见于经产妇。白细胞抗体包括HLA-Ⅰ类、HLA-Ⅱ类抗体和人类粒细胞同种抗原（HNA）抗体HNA1、HNA2抗体等。因此，输血前筛查患者和供血者HLA和HNA抗体可以降低TRALI的发生，避免输血相关不良反应。
（侯 忱 汤朝晖 姜晓星 蔡晓红）