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1.脑脊液常规
朊蛋白病患者脑脊液常规检查基本正常。11%的患者细胞数轻微增高，绝大多数为淋巴细胞。少部分患者脑脊液蛋白轻度增高。
2.朊蛋白PrP sc
（1）检测方法
1）动物传递实验：是早期判断生物体是否感染朊蛋白、检测感染滴度、研究朊蛋白传染性的主要手段。该方法的优点是比较敏感，是研究朊蛋白生物学特性的重要实验。缺点是费时、费力，滴定误差大，需消耗大量动物，费用昂贵。由于种属屏障和毒株、动物个体差异等因素的影响，传递的成功率往往相差较大，个别Gerstmann-Straussler综合征（GSS）毒株的动物传递始终未获成功。因此，实验阴性并不能排除朊蛋白感染，使用转基因动物是一条经济、实用的削弱或消除种属屏障的实验途径，可明显改善传递效果。
2）免疫学方法：免疫学检测方法由于其灵敏度高、特异性强、方法众多、能适合不同检验要求的需要，目前已成为检测朊蛋白的最主要方法。常用的方法有：①组织印迹（histoblot）；②斑点印迹（dot-blot）；③免疫印迹（immunoblot，Western blot）；④免疫组化；⑤酶联免疫吸附试验（ELISA）。
3）毛细管SDS-凝胶电泳：该法标本用量少，无需免疫学试剂，判断直观；缺点是需用超速离心机、专用毛细管电泳仪。
4）荧光标记肽链的毛细管电泳免疫检测法：是根据免疫竞争原理检测，采用无区带毛细管电泳技术结合免疫荧光技术，检测标本中微量的PrP SC 。该法灵敏度很高，能检测到135pg的PrP SC ，可用于检测朊蛋白水平很低的脑外组织（如血液等）。
5）双色强荧光目标扫描法：是运用共聚焦双色荧光相关分光镜技术检测极其微量的朊蛋白。
6）PrP SC 蛋白错误折叠的循环扩增法：该法是最近发展起来的一种检测微量PrP SC 存在的方法，对组织和体液中用其他方法无法检测到的PrP SC ，可该法进行检测，同时该方法还可作为确定PrP SC 复制是否可在体外产生感染性的独特策略。
（2）标本：脑脊液、病变组织、尿液。
（3）参考范围：正常人脑脊液、病变组织PrP SC 阴性。
（4）临床诊断价值和评价：脑组织活检检测PrP SC 是确诊指标。在朊蛋白病的诊断过程中，PrP SC 的存在部位决定了诊断取材。目前已在脑组织、脊髓、扁桃体、脾脏、淋巴结、视网膜和近端视神经、眼结膜、直肠、肾上腺、胸腺、肾脏及尿液等材料中检测到PrP SC ，其中在淋巴网状组织检测到PrP SC 是变异CJD（nvCJD）区别其他朊蛋白病的一个重要标志。由于在nvCJD患者的扁桃体有较高水平的PrP SC 存在，因此扁桃体可作为活检取材部位用以筛查和评价临床前nvCJD感染流行情况。由于在临床症状出现前很长一段时间，就可在感染患者和动物尿中检测到PrP SC ，因此可通过检测尿中PrP SC 进而诊断人和动物潜伏期的朊蛋白病。研究还发现，将尿中的PrP SC 接种至仓鼠大脑后，可在270天后都不出现朊蛋白病的表现，这提示尿中的PrP SC 与脑中的不同，因此，研究尿中的PrP SC 有助于加深对PrP SC 体内代谢的理解。
3.脑脊液中14-3-3蛋白
14-3-3蛋白质是一组真核细胞内高度保守的多功能蛋白质。目前已知至少包括从alpha到theta共7个亚型，其中zeta亚型mRNA大多克隆自哺乳动物。14-3-3主要分布于脑，其次是肺、脾脏和肾脏。在心脏、睾丸、胰腺、卵巢和肌肉中含量较少。
（1）检测方法：蛋白质印迹Western blot方法。
（2）标本：脑脊液。
（3）参考范围：正常人脑脊液14-3-3蛋白质呈阴性。
（4）临床诊断价值和评价：朊蛋白的沉积是CJD病的主要特征，脑脊液14-3-3蛋白质的存在，是CJD的主要分子病理学特征。目前尚不清楚14-3-3蛋白质在CJD中所起的作用及出现在CSF的原因。一般认为是由于大量神经元的破坏，而导致14-3-3蛋白质漏入到脑脊液中，14-3-3蛋白质存在的数量可能与神经元破坏比率和数量成正比。14-3-3蛋白质的检测缺乏特异性，阳性结果还见于疱疹性脑病、卒中的缺氧性脑损伤、阿尔茨海默病甚至多发性硬化等。14-3-3蛋白质阳性对支持的诊断最有价值，对于一个临床确诊的病例，若是阳性则增加了诊断的可信度，若是阴性，也不能排除诊断，14-3-3蛋白质不能被单独用作诊断实验。
4.S100蛋白
（1）检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）法。
（2）标本：血清、脑脊液。
（3）参考范围：不同方法对应不同的参考范围。
（4）临床诊断价值和评价：S100蛋白为脑特异性蛋白，是一个酸性钙结合蛋白，在脑组织中S100主要存在于胶质细胞中。已有报道脑损伤后血清及脑脊液中S100蛋白浓度增高，S100蛋白浓度增高反映星形胶质细胞增生，而在CJD整个病程中都可见星形胶质细胞增生。因此认为S100蛋白可作为诊断CJD的生化指标。
（5）方法学评价和问题：ELISA法检测S100浓度的优点是灵敏度较高、操作简便、重复性好，但试剂盒价格昂贵，常规应用受到限制。
5.Tau蛋白
（1）检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）法。
（2）标本：脑脊液。
（3）临床诊断价值和评价：Tau蛋白是脑内神经元的细胞骨架蛋白之一，它对稳定微管和神经功能方面起到重要作用。过去认为Tau蛋白的异常主要发生于Alzheimer病的老年斑与神经原纤维缠结内、Pick病的Pick小体、进行性核上性麻痹和皮质基底节变性等神经变性疾病中；而近年从对蛋白质的病理学研究中发现，CJD患者的脑脊液中Tau蛋白水平明显增高，而且增高程度远远高于Alzheimer病。另外，脑脊液Tau蛋白水平增高，除见于某些神经变性疾病外，也可见于急性严重性脑损伤，如病毒性脑炎、脑梗死以及脑肿瘤等，应与这些疾病相鉴别。
6.神经元特异性烯醇化酶（NSE）
（1）检测方法：时间分辨荧光免疫分析法、放射免疫法。
（2）标本：血清、脑脊液。
（3）临床诊断价值与评价：患者出现肌阵挛和EEG周期性尖波时，CSF中NSE升高最明显，有人提出CSF中NSE＞35ng/ml时，诊断灵敏度为80%，特异度为92%。CJD患者早期CSF中神经元特异性烯醇化酶（NSE）的变化相当敏感，晚期随着神经细胞内NSE的耗竭，血或CSF中NSE浓度降低。因此，早期CSF中NSE的检测对判断病情及预后均有实际意义。
PrP 基因的筛选与分析
（1）检测方法：聚合酶链反应（PCR）法。
（2）标本：病变脑组织。
（3）临床诊断价值和评价：在人类朊蛋白病CJD中有15%为家族性，GSS突出的特征是小脑共济失调，与这些疾病相关的则是由宿主编码的一种异常的朊蛋白PrP蛋白在脑组织中沉积，而编码PrP蛋白的基因位于第二十号染色体，该基因不同位点的突变可出现不同表现型的家族性朊蛋白病。因此， PrP 基因（ PRNP ）可作为家族性海绵状脑病的筛选基因。研究表明在人的 PrP 基因129位密码子的多型性（Met或Val）同遗传易感染性有很大关系，当发生突变（Met→Val）时，基因为纯合子的个体比杂合子个体易感染朊蛋白病。现已发现正常PrP基因中密码子171位突变（Met→Ser）和219位突变（Glu→Lys）时，基因型为纯合子的人易患CJD，而GSS患者中发现密码子102（Pro→Leu）、117（Ala→Val）、198（Phe→Ser）和217（Glu→Arg）发生点突变，使α-螺旋更易转变为β-折叠。PrP从正常主要以α-螺旋的构象转变为以β-折叠为主的构象状态与疾病的发生及其传染性密切相关。
1.朊蛋白病诊断首选检验项目组合
组织病理学检查+脑组织PrP sc 检测。若组织病理学为脑组织广泛海绵状空泡、淀粉样蛋白沉淀及神经元退行性改变，以及脑组织PrP sc 检测为阳性即可确诊。
2.朊蛋白病辅助诊断检验项目建议组合
脑脊液中14-3-3蛋白+S100蛋白+Tau蛋白+NSE。
3.基因检测
应进行 PRNP 基因突变的筛查，约60%遗传性朊蛋白病患者无明确的家族史。对有遗传性克-雅病（Creutzfeldt Jakob disease）风险的家族进行基因筛查，以指导生育。
4.脑组织活检
组织病理学和免疫学检出PrPSc是诊断的“金标准”，典型特征是脑组织广泛海绵状空泡变性、淀粉样蛋白沉积及神经退行性变，免疫组织化学染色或免疫印迹法可发现PrPSc。
（张 旭 李小龙）