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答：造血干细胞（hematopoietic system cells，HSCs）/造血祖细胞（hematopoietic progenitor cells，HPCs）是具有高度自我更新能力和多向分化潜能的造血前体细胞，在一定的微环境中和在某些调节因素的共同作用下，造血干/祖细胞可以增殖分化为不同的血细胞，是血液组织中各种细胞的祖先。之所以对造血干/祖细胞进行分类，是因为造血干/祖细胞实质上它是一个异质性的细胞群的统称，从功能角度可分为多能造血干细胞、寡能干细胞、单能干细胞及各系早期造血祖细胞等，而在体外培养的造血干/祖细胞，可以依据加入的不同集落刺激因子，又可以分为不同的类型。
答：造血干细胞分化为几种不同的造血祖细胞，造血祖细胞可用体外培养的细胞集落法测定，在不同的集落刺激因子（colony stimulating factor，CSF）作用下，可分别出现不同的血细胞集落。目前已确认的造血祖细胞有：①红细胞系造血祖细胞，必须在促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）作用下才能形成红细胞集落，又称红系集落形成单位（colony forming unit-erythroid，CFU-E）；②中性粒细胞-巨噬细胞系造血祖细胞，需在粒细胞生成素（granulopoietin，GPO）作用下形成该种细胞的集落，又称粒细胞巨噬细胞系集落形成单位（colony forming unit-granulocytemacrophage，CFU-GM）；③巨核细胞系造血祖细胞，需在血小板生成素（thrombopoietin，TPO）作用下形成巨核细胞集落，又称巨核细胞系集落形成单位（colony forming unit-megakaryocyte，CFU-M）。另外，研究发现还有其他血细胞的造血祖细胞的存在。
答：集落形成单位（colony forming unit，CFU）是造血细胞长出来的集落，E是红系细胞集落。红系祖细胞集落形成单位（CFU-E）的培养体系如下：①集落培养体系CFU-E的培养需要促红细胞生成素（EPO）。在干细胞培养中，加入EPO后可获得爆式红系集落形成单位（burst forming unit-erythroid，BFU-E）和对红系生成素有反应集落形成单位（CFU-E）两种集落，BFU-E的培养需要植物血凝素-白细胞条件培养基（phytohaemagglutinin-leukocyte conditioned medium，PHA-LCM）、再生障碍性贫血患者血清或白细胞介素（interleukin，IL）-3等，培养基主要为 IMDM培养基（Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium）；②培养方法将配制好的体系加入直径为33mm的培养皿或6孔板中，37℃、5%CO 2 饱和湿度环境下培养；③集落计数一般CFU-E在培养的第5～7天观察计数，大于8个细胞的细胞团为一个CFU-E集落。BFU-E在培养的第14天计数，大于50个细胞组成的细胞团或3个中心以上的细胞团为一个BFU-E集落。
答：集落的鉴定在倒置显微镜下，红系祖细胞集落形成单位（CFU-E）及爆式红系集落形成单位（BFU-E）集落一般呈鲜红色，易于和其他集落比较。CFU-E可以应用集落染色法进行鉴定。因为红细胞的血红蛋白具有类似过氧化物酶的作用，可使二甲基联苯胺和过氧化氢反应而形成棕红色，借此可与其他集落相鉴别。培养CFU-E的临床意义：CFU-E属于定向祖细胞阶段，进一步分化方向已经限定，可以分化为具有红细胞功能的终末细胞，然后释放进入血液循环，发挥红细胞的功能。
答：集落形成单位（CFU）是造血细胞长出来的集落，CFU-GU称为粒-单祖细胞，也写作CFU-GM，即粒细胞和单核细胞集落或者称为粒细胞-巨噬细胞集落（colony forming unit-granulocytemacrophage，CFU-GM）。在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony stimulation factor，GM-CSF）等的作用下，促进早期的多能前体细胞生长和分化为CFU，能刺激造血干/造血祖细胞分化发育，刺激粒细胞和单核祖细胞分化增殖，诱导细胞形成粒细胞集落形成单位（CFU-G）、巨噬细胞集落形成单位（CFU-M）和粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM），集落的大小和数目均增加。
答：粒细胞-单核细胞祖细胞集落形成单位（CFU-GU）的培养体系如下：CFU-GM培养的刺激物含多种造血生长因子，这些细胞因子包括粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）、粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony stimulating factor，G-CSF）、巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor，M-CSF）以及白细胞介素（IL）-3等，但常用GM-CSF。培养基多用IMDM培养基（Iscove’s Modified Dulbecco’sMedium）和RPMI培养基（Roswell Park Memorial Institute）等。培养体系通常包括20%～30%胎牛血清，50ng/ml GM-CSF，细胞悬液中细胞总数一般以（1～2）×10 5 /ml为宜，剩余用IMDM或RPMI补齐，但通常保持琼脂终浓度为0.3%，甲基纤维素终浓度为0.9%～1.0%。细胞一般置于直径为35mm的培养皿或6孔板中，放置于37℃、5%CO 2 饱和湿度环境下培养。一般在培养体系中培养10～14天，观察细胞集落，大于40个细胞的细胞团为一个集落，进行细胞集落计数。
答：粒细胞-单核细胞祖细胞集落形成单位（CFU-GU）集落形态一般分3类：①致密型细胞紧密成团，细胞个体较小，多为粒细胞为主的集落；②混合型细胞团中央为紧密成团的粒细胞，周围弥散分布着单核细胞或巨噬细胞；③松散型细胞团比较均匀地分散，细胞个体较大，多为单核细胞和巨噬细胞组成。
答：培养粒细胞-单核细胞祖细胞集落形成单位（CFU-GU）的临床意义：粒细胞-单核细胞祖细胞集落形成单位（CFU-GU）属于定向祖细胞阶段，进一步分化方向已经限定，可以分化为具有粒细胞、单核细胞、巨噬细胞功能的终末细胞，然后释放进入血液循环，发挥粒细胞、单核细胞、巨噬细胞的功能。
答：多向祖细胞集落形成单位（CFU-Mix），CFU是造血细胞长出来的集落，Mix是混合集落。混合集落是指集落中含有两系、三系或四系细胞的集落，一般是指三系以上的集落，是体外培养的一般含有粒-巨噬系（GM）、红系（E）与巨核系（M）共同组成的混合型集落。培养方法：培养体系与爆式红系集落形成单位（BFU-E）、巨核细胞系集落形成单位（CFU-Meg）和粒-巨噬系集落形成单位（CFU-GM）相似，培养14～18天观察细胞集落形成的情况。
答：培养多向祖细胞集落形成单位（CFU-Mix）的临床意义：因CFU-Mix是体外培养的含有粒-巨噬系（GM）、红系（E）与巨核系（M）共同组成的混合型集落。所以这些混合型的定向祖细胞，可以分化为具有粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、红细胞和巨核细胞功能的终末细胞，然后释放进入血液循环，发挥粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、红细胞和巨核细胞的功能。
（王维维）